肺系调治方干预肠黏膜屏障防治小儿反复呼吸道感染的实验研究

发布时间：2020-05-17 05:36

【摘要】：目的:本研究通过抗生素联合肾上腺糖皮质激素复制菌群失调及免疫力低下的大鼠模型,观察治疗小儿反复呼吸道感染的临床有效经验方肺系调治方对大鼠肺组织及结肠组织的分泌型免疫球蛋白A(SIgA)、肠道菌群及其代谢产物短链脂肪酸、肠黏膜组织中紧密连接蛋白及肠内容溶菌酶的影响,探讨该方“扶卫固表”作用的生物学基础,初步阐明肺系调治方调节呼吸道黏膜免疫功能并同时修复肠黏膜屏障防治小儿反复呼吸道感染的作用机理,进一步丰富中医“肺系调治”的现代科学内涵。方法:1.抗生素联合肾上腺糖皮质激素复制菌群失调及免疫力低下大鼠模型,通过观察大鼠肺组织及结肠组织的SIgA、肠道菌群以及肠内容物短链脂肪酸和肠黏膜组织中紧密连接蛋白等指标变化评价模型是否成功。2.制备肺系调治方水煎剂,于造模成功(实验第8天)后,从第9天开始以灌胃方法进行中药干预实验,阳性对照组给予泛福舒灌胃,模型组给予生理盐水灌胃,共给药7天。3.通过蛋白质印迹及实时荧光定量聚合酶链式反应检测肠黏膜组织中紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin和ZO-1的含量;通过16S rRNA基因高通量测序检测大鼠肠内容物的菌群丰度;通过气相色谱法检测大鼠肠内容物短链脂肪酸的含量;通过酶联免疫吸附测定法检测大鼠肺组织、结肠组织SIgA及肠内容物溶菌酶的含量。结果:1.模型组大鼠肠黏膜组织中紧密连接蛋白Claudin-1 mRNA的相对表达呈下降趋势(P0.05),肺系调治方低剂量组Claudin-1 mRNA的相对表达显著上升(P0.05),其他中药干预组呈不同程度的上升趋势(P0.05);模型组Occludin mRNA的相对表达极显著下降(P0.001),中药干预组Occludin mRNA的相对表达极显著上升(P0.001);模型组ZO-1 mRNA的相对表达呈下降趋势(P0.05),肺系调治方低、中剂量组ZO-1 mRNA的相对表达显著上升(P0.05),肺系调治方高剂量组呈上升趋势(P0.05)。2.16S rRNA基因高通量测序结果显示⑴门水平:(1)模型组大鼠肠内容物菌群以Bacteroidetes(拟杆菌门)为主的5个菌门相对丰度升高,以Firmicutes(厚壁菌门)和Proteobacteria(变形菌门)为主的6个菌门相对丰度降低;(2)中药干预组以Proteobacteria为主的4个门水平相对丰度降低。⑵属水平:(1)模型组以Alloprevotella、Bacteroides(拟杆菌属)、Phascolarctobacterium为主的12个菌属相对丰度升高,以Prevotella(普雷沃菌属)和Lactobacillus(乳杆菌属)为主的8个菌属相对丰度降低;(2)中药干预组以Alloprevotella和Clostridium XI(梭菌XI)为主的6个菌属相对丰度升高,以Phascolarctobacterium和Oscillibacter(颤杆菌克)为主的6个菌属相对丰度降低。3.模型组大鼠肠内容物短链脂肪酸(乙酸、丙酸、正丁酸)的含量均显著下降(P0.05),中药干预组短链脂肪酸含量呈上升趋势(P0.05)。4.模型组大鼠结肠组织SIgA的表达水平呈下降趋势(P0.05),中药干预组SIgA的表达水平显著上升(P0.05);模型组肺组织SIgA的表达水平极显著下降(P0.001),中药干预组SIgA的表达水平显著上升(P0.05)。5.模型组大鼠肠内容物溶菌酶的表达显著下降(P0.05),肺系调治方低剂量组溶菌酶表达显著上升(P0.01),肺系调治方中、高剂量组呈不同程度的上升趋势(P0.05)。结论:1.肺系调治方可使菌群失调及免疫力低下大鼠模型肺组织黏膜免疫效应分子SIgA水平明显增高;2.肺系调治方可通过调节肠黏膜紧密连接蛋白、溶菌酶、菌群、短链脂肪酸、黏膜免疫效应分子SIgA的表达,修复肠黏膜屏障;3.肺系调治方对肠黏膜屏障的修复可能是防治小儿反复呼吸道感染的生物学基础。
【图文】：

调治,大鼠,胸腺指数,空白

表 1 肺系调治方对大鼠脏器指数的影响( x s, mg/g )Table 1 Effect of Feixi Tiaozhi decoction on the organ index of rats( x s, mg/g )组别(Group) N 胸腺指数(thymus index) 脾脏指数(spleen index)空白组(Control) 8 1.96±0.42 2.80±0.39模型组(Model) 8 0.64±0.18 2.30±0.39 肺系调治方低剂量组(FTD-L) 8 0.68±0.18 2.47±0.32肺系调治方中剂量组(FTD-M) 8 0.76±0.22 2.37±0.56肺系调治方高剂量组(FTD-H) 8 0.88±0.40 2.61±0.30阳性对照组(OM-85 BV) 8 0.64±0.20 2.46±0.54注：与空白组相比， P＜0.001。

HE染色,大鼠,管腔狭窄,中药干预

30图 2 大鼠结肠组织 HE 染色结果（10 10）Figure 2 HE staining results of colon tissue (10×10)3.3.2 肺系调治方对大鼠肺组织病理的影响⑴空白组：肺组织形态结构完整，支气管上皮完整，，纤毛结构完整、排列整齐，气管、血管周围无明显炎症反应；⑵与空白组相比，模型组大鼠肺内细支气管上皮增生，管腔狭窄，管壁增厚，炎性细胞浸润；⑶与模型组相比，中药干预组及阳性对照组肺内细支气管上皮增生、管腔狭窄、管壁增厚的程度有所减轻，炎性细胞浸润减少。
【学位授予单位】：云南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R272

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