SP600125阻断JNK信号通路下电针对CUMS大鼠c-fos和AP-1表达的影响

发布时间：2020-05-19 11:22

【摘要】：背景和目的抑郁症是一种临床常见的情感性精神障碍,具有高患病率,高复发率,高自杀率和难治愈的特点。目前,抑郁症的病理机制尚不明确,临床缺乏有效治疗手段。JNK信号通路是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated proteinkinases,MAPK)家族成员之一,称c-j un氨基末端激酶(c-Jun N-terminal Kinase,JNK)。JNK在细胞生长、分化、凋亡、应激反应及多种人类疾病的发生、发展中起着重要的作用。前期实验研究发现,应激诱导的大鼠JNK信号通路激活参与了抑郁症的发生与发展,通过针刺干预可以降低JNK的磷酸化水平,抑制神经元凋亡,改善大鼠抑郁样行为。本研究将基于前期研究基础,通过CUMS结合慢性孤养建立大鼠慢性应激模型,侧脑室注射JNK信号通路阻断剂SP600125,进行电针干预,以体重、旷场实验和糖水偏好实验,评价大鼠行为学指标变化;观察电针后海马CA3区c-fos与下丘脑c-jun,垂体c-fos及血清c-fos、AP-1表达的差异;以c-jun、c-fos、AP-1的表达作为海马、下丘脑、垂体神经元功能的标志,旨在研究慢性应激抑郁症大鼠海马、下丘脑、垂体神经元功能活性的改变;电针干预降低JNK的磷酸化水平的效应机制;进一步为针刺的临床应用提供新的科学依据。方法1动物分组将64只雄性SD大鼠,随机分为8组,每组8只:空白对照组(对照组)、模型组、模型+DMSO组(DMSO组)、模型+SP600125组(SP组)、模型+电针组(电针组)、模型+电针+SP600125组(电针+SP组)、模型+氟西汀组(氟西汀组)、模型+氟西汀+SP600125组(氟西汀+SP组)。2造模方法除对照组外,其余大鼠均采用国际公认的CUMS造模方法:应用7种不可预知温和刺激方法(震荡30min、夜间光照12h、束缚2h、夹尾3min、断食24h、断水24h、潮湿垫料24h)连续刺激21天,平均每种刺激各使用3次。3干预方法电针干预选取“内关”(PC6)、“三阴交”(SP6)穴;用30号1寸毫针直刺进行,深度为0.3-0.5cm,针柄连接HANS LH-202型电针仪,电针频率为2Hz,电流强度为0.6mA,大鼠四肢微颤即可,每次进行20min,每天1次,持续21天;氟西汀用蒸馏水配成0.2mg/ml的混悬液,以1.8ml/kg灌胃给药,每天1次,持续21天。4处理方法对照组不给予任何刺激,正常群居饲养。其余每组均单笼饲养并且接受21天慢性应激。同时,电针组于每天造模前30min进行电针干预;氟西汀组于每天应激前30min进行氟西汀灌胃给药;DMSO组于应激前1h给予10μl/1d DMSO侧脑室注射;SP组于应激前1h给予10μl/1d阻断抑制剂SP600125稀释液侧脑室注射;电针+SP组、氟西汀+SP组于应激前1h给予10μl/1d阻断抑制剂SP600125稀释液侧脑室注射,于应激前30min分别给予电针干预和氟西汀灌胃给药。5检测方法行为学检测:在实验前1天和实验第21天分别测量大鼠的体重、旷场实验和糖水偏好指数,以评价模型大鼠行为学改变情况。指标检测:运用免疫组化法检测海马CA3区c-fos表达情况;ELISA法检测下丘脑c-jun、垂体c-fos、血清c-fos和AP-1表达情况。结果1.行为学变化实验前1天,各组之间体重、旷场实验、糖水偏好指数均无统计学意义(P0.05)。实验第21天,与对照组相比,模型组大鼠的体重、旷场实验、糖水偏好指数均显著减少(P0.01),提示造模成功;与模型组相比,电针组体重、旷场实验、糖水偏好指数均显著增加(P0.01),氟西汀组水平穿越格数增加(P0.05),体重显著增加(P0.01),说明电针和氟西汀干预可以改善抑郁模型大鼠的抑郁样行为,并且电针干预效果要优于氟西汀;DMSO组体重、旷场实验、糖水偏好指数均无统计学意义(P0.05),表明侧脑室套管埋置手术对大鼠行为学影响不大;手术组(DMSO组、SP组、电针+SP组、氟西汀+SP组)之间体重、旷场实验无显著差异(P0.05);与电针组相比,电针+SP组体重显著减少(P0.01),旷场实验减少(P0.05),糖水偏好指数无显著差异(P0.05);与氟西汀组相比,氟西汀+SP组体重显著减少(P0.01),旷场实验、糖水偏好指数无显著差异(P0.05)。2.JNK信号通路下游分子的表达水平实验21天后,与对照组相比,模型组大鼠海马CA3区c-fos、下丘脑c-jun、垂体c-fos、血清c-fos和AP-1表达均显著上升(P0.01),说明慢性应激刺激可以激活JNK相关下游分子的表达水平;与模型组相比,电针组海马CA3区c-fos表达下降(P0.05),下丘脑c-j un、垂体c-fos、血清c-fos和AP-1表达显著下降(P0.01),氟西汀组海马CA3区c-fos、垂体c-fos表达下降(P0.05),下丘脑c-jun、血清c-fos和AP-1表达显著下降(P0.01),说明电针和氟西汀能够在一定程度上逆转JNK相关下游分子的表达上调,DMSO组各项指标表达水平均无统计学意义(P0.05);与DMSO组相比,SP组下丘脑c-jun、血清AP-1表达下降(P0.05),电针+SP组各项指标表达水平均显著下降(P0.01),氟西汀+SP组下丘脑c-j un、血清c-fos和AP-1表达显著下降(P0.01);与电针组相比,电针+SP组各项指标表达均无显著差异(P0.05);与氟西汀组相比,氟西汀+SP组海马CA3区c-fos、下丘脑c-j un、垂体c-fos、血清AP-1表达均无显著差异(P0.05),血清c-fos表达下降(P0.05)。结论1慢性温和不可预知应激刺激结合孤养可诱导模型大鼠体重下降、快感缺失与探究行为减少等行为异常。2电针干预可改善大鼠抑郁样行为,可能与其下调海马CA3区c-fos、下丘脑c-jun、垂体c-fos及血清c-fos和AP-1活性相关。3阻断剂SP600125对慢性应激抑郁模型大鼠c-j un、c-fos、AP-1的表达具有干预作用;对抑郁样行为学各项指标存在不同程度的影响。4电针+SP组比氟西汀+SP组对慢性应激抑郁模型c-fos表达水平的干预效果明显,阻断剂SP600125和电针干预方法在抑制c-fos磷酸化水平上有叠加效应,更具协同作用。5氟西汀对慢性应激抑郁模型外周血清的干预效果比电针干预更明显。
【图文】：

逦ＳＰ６００１２５阻断ＪＮＫ信号通路下电针对ＣＵＭＳ大鼠ｃ－ｆｏｓ和ＡＰ－１表达的影响逦逡逑从肿瘤等疾病领域，转向神经系统方面的疾病，抑郁症方面也己成为研宄热点，有关逡逑ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｆｏｓ和ＡＰ－１表达的研宄多是急性应激实验，慢性应激T中枢神经系统内正Ｇｓ逡逑表达的研宄很少，慢性应激性抑郁大鼠海马与下丘脑中ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｆｏｓ和ＡＰ－１的表达仅逡逑有少部分研究，其具体机制尚未明确。因此，本研究通过ＣＵＭＳ结合慢性孤养建立大逡逑鼠慢性应激模型，，以ＪＮＫ信号通路下游分子ｃ－ｊｕｉｕｃ－ｆｏｓ和ＡＰ－１过度激活作为切入点，逡逑进一步探究电针抗抑郁效应机制，为临床提供生物标志物证据。逡逑

电针组体重无显著差异（＾＞０．０５），氟西汀＋ＳＰ组体重显著减少（／＾＜０．０１）；逡逑手术组（ＤＭＳＯ组、ＳＰ组、电针＋ＳＰ组、氟西汀＋ＳＰ组）间的体重无显著差异（尸＞０．０５）。逡逑（见表２和图２）逡逑４５逡逑
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R245.97

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本文编号：2670817