藏药“亚吉玛”（裸茎金腰）对ANIT所致肝内胆汁淤积型肝损伤小鼠的保护效应及其作用机制

发布时间：2020-06-19 15:39

【摘要】：背景:肝内胆汁淤积(intrahepatic cholestasis,IC),是一种由于肝细胞或毛细胆管结构与功能障碍,导致胆汁酸在肝脏内蓄积,从而引发肝脏病变的临床综合征。目前治疗IC的药物十分有限,且存在严重不良反应。特色藏药“亚吉玛”(裸茎金腰Chrysosplenium nudicaule Bunge)是藏医临床治疗肝胆疾病的良药,但目前尚未见现代药效学评价和相关作用机制的研究报道。目的:评价裸茎金腰对IC型肝损伤的影响并探讨其相关机制,为藏药“亚吉玛”的临床应用提供现代药理学证据,奠定其进一步开发利用的基础。方法:采用α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导法建立小鼠IC型肝损伤模型;采用全自动生化分析仪,检测裸茎金腰提取物(Extract of C.nudicaule,ECN)干预后小鼠血清AST、ALT、ALP、DBIL、TBIL、TBA水平;采用比色法检测ECN干预后小鼠肝组织匀浆SOD、GSH、MDA活性;病理切片观察ECN干预后小鼠小鼠肝组织病理变化;采用RT-PCR法测定ECN干预后小鼠肝组织中Bsep、Cyp7a1、Fxr、Mrp2、Shp、Ntcp等基因的mRNA表达评价;采用western-blot法测定ECN不同极性部位干预对小鼠肝脏BSEP、CYP7A1、FXR、MRP2、SHP、NTCP蛋白表达。结果:(1)ECN能剂量依赖性的降低模型小鼠血清中AST、ALT、ALP、DBIL、TBIL、TBA的含量水平、升高小鼠肝组织匀浆SOD和GSH的活性(P0.01,P0.05),同时降低MDA的含量(P0.01,P0.05)。小鼠肝脏病理切片显示,ECN可改善模型小鼠肝脏病理变化;(2)ECN不同极性萃取部位的活性评价结果表明,其乙酸乙酯部位、正丁醇部位能剂量依赖性的降低模型小鼠血清中AST、ALT、ALP、DBIL、TBIL、TBA的含量水平(P0.01,P0.05);(3)mRNA分析结果表明,ECN能显著改变胆汁酸代谢相关基因的表达水平,如Bsep、Fxr、Mrp2的mRNA表达显著上调(P0.01,P0.05),同时Cyp7a1的表达显著下调(P0.01,P0.05)。其乙酸乙酯部位、正丁醇部能显著升高模型小鼠肝组织Shp、Ntcp的mRNA表达;(4)蛋白表达结果表明,ECN的乙酸乙酯部位、正丁醇部位能显著改变模型小鼠的胆汁酸代谢相关蛋白的表达水平,如BSEP、FXR、MRP2、SHP、NTCP的蛋白表达显著上调(P0.01,P0.05),同时CYP7A1的表达显著下调(P0.01,P0.05)。结论:裸茎金腰提取物具有逆转肝内胆汁淤积的作用,其有效部位为乙酸乙酯部位和正丁醇部位,其作用机制可能与抑制脂质过氧化,减少肝细胞损伤,激活FXR及其靶蛋白,减少胆汁酸的合成,增加胆汁酸的排泄有关。本研究为特色藏药亚吉玛在藏医药中的临床应用提供了现代药理学依据。
【学位授予单位】：江西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R29
【图文】：

肝内胆汁淤积,生化指标,小鼠血清,联苯双酯

1. 空白组 2. 模型组 3. 联苯双酯组 4. ECN 低剂量组 5. ECN 中剂量组 6.ECN 高剂量组 7.未造模组。图 1 ECN 对 ANIT 致肝内胆汁淤积小鼠血清生化指标的变化(χˉ±s)Figure1 Effect of ECN on serum biochemical parameters inANIT induced liver injury mice3.2 ECN 对 ANIT 致肝内胆汁淤积小鼠 SOD、MDA、GSH 含量的影响与空白组比较，模型组小鼠肝组织匀浆中 SOD 活性和 GSH 含量极显著降低(P <0.01)，而 MDA 含量则极显著升高(P < 0.01)；未造模组的小鼠肝组织中 SOD 活性和GSH、MDA 含量没有明显变化。与模型组比较，联苯双酯组小鼠肝组织中 MDA 含量极显著降低(P < 0.01)，SOD 活性和 GSH 含量极显著升高(P < 0.01)；ECN 低、中、高剂量组小鼠肝组织匀浆中 SOD 活性和 GSH 含量明显升高(P < 0.05), MDA 的含量明显降低(P < 0.05，P < 0.01)，且具有剂量依赖性。结果见表 4。

肝内胆汁淤积,小鼠,联苯双酯,组织匀浆

组别剂量/g·kg-1 数量（只） SOD/U·mg-1GSH/mg·g-1MDA/nM·mg-1空白对照组 - 9 108.53±6.66 1.31±0.16 0.64±0.18模型组 - 9 70.73±1.87##0.93±0.08##1.60±0.40##联苯双酯组 0.15 9 105.07±7.34**1.39±0.20**0.98±0.29**ECN 1.0 10 79.42±15.40*1.09±0.18*1.24±0.24*2.0 10 84.23±1.28**1.31±0.18**1.22±0.31*4.0 10 100.52±5.51**1.32±0.18**1.01±0.21**未造模组 4.0 10 107.03±7.61 1.41±0.20 0.63±0.16注：与空白组比较，##P < 0.01；与模型组比较，*P < 0.05, **P < 0.01。表 4 ECN 对 ANIT 致肝内胆汁淤积小鼠肝组织匀浆中 SOD、MDA、GSH 含量水平的影响(χˉ±s)Table 4 Effect of ECN on the content of SOD, MDAand GSH-Px in liver tissue homogenate of anit-induced liver injurymice( x ±s, n =8-10)

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