基于冠心病炎症反应学说探讨益气养阴、活血化痰方对巨噬细胞极化的机制研究

发布时间：2020-06-21 15:42

【摘要】：研究目的:基于冠心病炎症反应学说,观察益气养阴、活血化痰方对M1/M2型巨噬细胞相关细胞因子、mRNA、蛋白表达的影响,评价益气养阴、活血化痰方在巨噬细胞极化调控中的作用,并探讨其治疗CHD的作用机制与p3 8MAPK/NF-κB信号通路的相关性。研究方法:利用LPS诱导RAW264.7细胞,构建体外炎症模型。将RAW264.7细胞分为空白组、LPS炎症模型组以及不同浓度的中药给药组。电子显微镜下观察各组细胞形态学变化;运用MTT比色法检测不同给药浓度的益气养阴、活血化痰方对RAW264.7细胞增殖情况的影响;采用Griess法检测细胞上清液中NO的分泌量;采用FCM法检测M1/M2型巨噬细胞表面标记物CD86、CD206的表达;采用ELISA法检测细胞上清液中M1型促炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS及M2型抗炎性因子IL-10、TGF-β、Arg-1的表达量;采用Real-Time PCR法检测M1/M2型巨噬细胞相关基因mRNA的表达量。运用Western blot法检测M1型促炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1 β、iNOS蛋白的表达量以及p38MAPK/NF-κB信号通路中关键蛋白的表达量。研究结果:(1)电子显微镜观察:与空白组相比,LPS组细胞形态改变,外周伪足增多;于LPS组相比,给药组的细胞伪足减少,正常形态细胞增多。(2)MTT 比色法显示:给药浓度为2.0 g-L-1及以下时对细胞增殖无明显影响。(3)Griess法显示:与空白组相比,LPS组NO释放量明显上调(P0.01);与LPS组相比,给药组NO释放量均下调(P0.01)。(4)FCM法显示:LPS干预后,CD86表达明显上升,CD206变化不明显,提示LPS以诱导巨噬细胞向M1亚型极化为主。(5)ELISA显示:与空白组相比,LPS组M1/M2型巨噬细胞相关炎症因子表达均上调(P0.01);与LPS组相比,给药组可明显下调M1型巨噬细胞促炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS的表达(P0.01),对M2型巨噬细胞抗炎症因子IL-10、TGF-β、Arg-1无影响。(6)Real-Time-PCR显示:与空白组相比,LPS组M1/M2型巨噬细胞相关基因mRNA表达量均上调(P0.01);与LPS组相比,不同浓度给药组均可下调M1型巨噬细胞促炎症因子mRNA表达量(P0.01,P0.05),对M2型抗炎性因子mRNA表达量无影响。(7)Western blot显示:与空白组比较,LPS组TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS蛋白的表达明显上调(P0.01);与LPS组相比,给药组TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS蛋白的表达均下调(P0.01)。与空白组相比,LPS组P-p38、P65、IκB蛋白的表达明显升高(P0.01),p38表达量无明显变化;与LPS炎症模型组相比,各浓度给药组均可下调P-p38、P65、IκB蛋白的表达量(P0.01)。研究结论:(1)益气养阴、活血化痰方可以抑制巨噬细胞向M1亚型方向极化,发挥免疫调节作用,能够有效的减少TNF-α、IL-6、IL-1β等相关促炎性因子的分泌,具有良好的体外抗炎活性。(2)益气养阴、活血化痰方治疗CHD的作用机制可能是通过调控p38MAPK/NF-κB信号通路,抑制p38MAPK的磷酸化反应,阻断NF-κB从细胞胞质向细胞胞核内转移,从而抑制NF-κB的转录功能而实现的。
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R259
【图文】：

不同药物浓度的益气养阴、活血化痰方干预后，Ｍｌ亚型巨噬细胞特异性表面标记物ＣＤ８６逡逑呈逐渐递减趋势，提示益气养阴、活血化痰方可以抑制巨噬细胞向Ｍｌ亚型极化，从而发逡逑挥抗炎作用。见

图７逡逑１．３．６邋Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ邋ＰＣＲ检测结果显示：逡逑

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本文编号：2724274