针刺对EAE模型小鼠脊髓p-p38MAPK和血清IL-1β影响的实验研究

发布时间：2020-06-26 19:59

【摘要】：目的:观察针刺“大椎”、“肾俞”、“足三里”穴对多发性硬化(multiple sclerosis,MS)经典动物模型实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmune cephalomyelitis,EAE)小鼠神经系统损伤症状的改善程度和其对脊髓磷酸化丝裂原活化蛋白激酶p-p38MAPK及血清IL-1β的影响,验证针刺对MS的治疗作用,探究针刺干预EAE小鼠的相关机制,为临床针刺治疗MS提供实验依据。方法:将40只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、模型+针刺组(针刺组)、模型+激素组(激素组),每组10只。除空白组外,其余各组小鼠采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白 33-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein 33-55,MOG33-55)与完全弗氏佐剂(complete freund's adjuvant,CFA)诱导建立EAE模型。各组自造模第14天(明显发病)开始,每日上午同一时间干预治疗。空白组和模型组每日抓取、固定,并用生理盐水[0.1mL/(10g·d)]灌胃;针刺组应用针刺干预小鼠“大椎”、双侧“足三里”穴、双侧“肾俞”穴15分钟;激素组用醋酸泼尼松龙药液(0.6mg/mL)灌胃[0.1mL/(10g·d)]治疗;以上各组均连续干预治疗15天。从造模当天开始,采用隔天测量体质量和神经功能评分评价小鼠行为学变化;于免疫第28天对各组小鼠进行眼球采血并留取脊髓组织,采用LFB染色技术检测小鼠脊髓脱髓鞘损伤程度;分别采用酶联免疫吸附法和蛋白质免疫印迹法检测小鼠血清IL-1β的含量及脊髓组织p-p38MAPK蛋白表达情况。结果:(1)小鼠体质量变化:与空白组相比,免疫第12天后,模型各组小鼠平均体质量明显下降;与模型组相比,免疫第20天后,针刺组与激素组小鼠平均体质量明显升高(P0.05);而与激素组相比,免疫第22天后,针刺组小鼠的平均体质量明显下降(P0.05)。(2)小鼠行为学变化:实验过程中空白组小鼠未出现临床症状和行为学异常改变。在免疫第10天后,模型各组小鼠均先后发病,表现为精神疲倦、毛色晦暗、蜷缩扎堆及不同程度的神经功能缺损症状。与空白组相比,模型各组自免疫第14天开始,平均神经功能评分明显升高(P0.05);与模型组相比,病程高峰期时(免疫后第20天),针刺组与激素组小鼠平均神经功能评分明显下降(P0.05);高峰期过后,模型各组小鼠症状略有缓解趋势,但与EAE模型组相比,至免疫第28天时,针刺组与激素组小鼠平均神经功能评分均明显下降(P0.05),而针刺组与激素组两组之间无明显差异(P0.05)。(3)LFB染色结果:正常组小鼠脊髓组织的髓鞘致密,排列整齐。模型组EAE小鼠脊髓组织出现多个部位髓鞘脱失,以侵犯白质为主。脊髓组织白质疏松,可见多个大小不一的片状脱髓鞘区,呈“空泡样”改变。针刺组和激素组EAE小鼠多部位脱髓鞘程度明显减轻,髓鞘脱失部位明显减少。(4)IL-1β的检测结果:发病28天时,与空白组相比,模型组小鼠血清IL-1β表达增高(P0.05);与模型组相比,针刺组与激素组小鼠血清IL-1β表达均降低(P0.05);而针刺组与激素组比较差异无统计学意义(P0.05)。(5)p-p38MAPK的检测结果:发病28天时,与空白组相比,模型组小鼠脊髓磷酸化p38MAPK蛋白p-p38MAPK表达增高(P0.05);与模型组相比,针刺组与激素组小鼠脊髓p-p38MAPK蛋白表达均降低(P0.05);而针刺组与激素组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:(1)针刺能明显改善EAE小鼠神经功能损伤症状;(2)针刺能下调EAE小鼠脊髓中p-p38MAPK的蛋白含量,提示针刺对p38MAPK信号通路的激活有抑制作用;(3)针刺能明显下调EAE小鼠血清IL-1β蛋白的表达,且其调节作用与激素相当;(4)本研究验证了针刺对EAE小鼠有治疗作用,其作用机制可能与p38MAPK蛋白磷酸化受抑制及血清IL-1β表达的下调有关。
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R245;R-332
【图文】：

逑３．邋４各组小鼠脊髓ＬＦＢ染色结果逡逑如图３空白组小鼠脊髓组织的髓鞘致密，排列整齐。模型组ＥＡＥ小鼠脊髓组织出逡逑现多个部位髓鞘脱失，以侵犯白质为主。脊髓组织白质疏松，可见多个大小不一的片状逡逑脱髓鞘区，呈“空泡样”改变。针刺组和激素组ＥＡＥ小鼠多部位脱髓鞘程度明显减轻，逡逑髓鞘脱失部位明显减少。逡逑Ｈ１ＨＩ逡逑注：Ａ空白组；Ｂ模型组；Ｃ针刺组；Ｄ激素组逡逑图３各组小鼠脊髓染色切片图（ＬＦＢ，邋Ｘ４００）逡逑３．５各组小鼠血清ＩＬ－丨卩蛋白表达水平逡逑发病２８天时，与空白组相比，模型组小鼠血清ＩＬ－ｉｐ蛋白表达水平明显上调（Ｐ＜０．０５）；逡逑与模型组比较，激素组与针刺组小鼠血清ＩＬ－１（３蛋白表达水平均明显下调（Ｐ＜０．０５）；但逡逑针刺组与激素组相比差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。见表５，图４。逡逑５３逡逑

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本文编号：2730818