电针对局灶性脑梗死大鼠健侧大脑皮层BDNF、Sma3A、NRP-1表达的影响

发布时间：2020-07-03 11:54

【摘要】：目的:观察电针治疗后局灶性脑梗死大鼠健侧大脑脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、突起坍塌蛋白(Semaphorin3A,Sema3A)、神经纤毛蛋白1(Neuropilin-1,NRP-1)表达的变化及运动功能恢复情况,探讨电针调节健侧大脑促进神经功能恢复的可能机制。方法:将SPF级雄性SD大鼠随机分为手术组(n=99)、假手术组(n=48),手术组大鼠采用Longa改良线栓法制备右侧大脑中动脉(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,参照Bederson4分5级法对MCAO大鼠进行神经功能评分,选取评分在2-3分者进行下一步实验,死亡或不符合评分标准的大鼠按数量补齐。术后24小时在手术组MCAO大鼠中随机选取3只,进行TTC染色,观察脑梗死灶位置。余手术组大鼠随机分为模型组(n=48),电针组(n=48),假手术组、模型组、电针组按时间点分为3天、7天、14天、28天四个亚组(n=12)。电针组大鼠取双侧肢体内关(PC6)、足三里(ST36)行电针治疗,模型组、手术组同时间做捆绑处理。电针28d组、模型28d组各选取6只大鼠进行神经功能评分和脚步错误试验评估;在4个取材时间点,每亚组随机取6只大鼠,使用4%多聚甲醛灌注后分离取出脑组织并固定,行HE染色、尼氏染色观察脑梗死大鼠健侧脑组织结构、神经元、尼氏小体变化;免疫组化法检测健侧大脑皮层BDNF、Sema3A、NRP-1表达变化;其余取新鲜脑组织,进行实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time QT-PCR)检测健侧大脑皮层BDNF、Sema3A、NRP-1 mRNA的相对表达量。结果:(1)神经功能、运动功能评分显示,电针组与模型组术后第3天无明显差异(P0.05),术后第7、14、28天电针组、模型组神经功能和脚步错误实验评分逐渐降低,且电针组明显低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。(2)TTC染色:可见右侧大脑皮质区梗死灶明显,包括了感觉运动区,左侧大脑未见梗死灶。(3)HE染色:与假手术组比较模型组和电针组大鼠健侧大脑皮质在术后第3天,神经细胞数量减少,部分固缩呈三角形,细胞核染色较深,细胞间距增大,排列出现紊乱。第7天至28天,神经细胞逐渐多,形态基本恢复正常,排列有序,电针组神经元细胞数增加较模型组快。(4)尼氏染色:模型组、电针组大鼠术后第3天,健侧大脑皮质尼氏小体有轻微裂解现象;术后7天时,尼氏小体数量减少,神经细胞轻微肿胀,模型组较电针组明显。术后14天至28天,尼氏小体数目逐渐恢复正常。(5)免疫组化:术后第3天,电针组与模型组BDNF平均光密度值无明显差异(P0.05);术后第7、14、28天电针组平均光密度值明显高于模型组(P0.05)。电针组术后第3天Sema3A、NRP-1与模型组平均观密度值比较无明显差异(P0.05),第7、14、28天明显低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。(6)实时荧光定量PCR:术后第3天,电针组与模型组BDNFmRNA相对表达量无明显差异(P0.05);术后第7、14、28天电针组表达量明显高于模型组(P0.05)。电针组术后第3天Sema3A、NRP-1mRNA相对表达量与模型组比较无明显差异(P0.05),第7、14、28天表达量明显低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:健侧大脑皮层参与脑梗死后的神经功能重塑,电针可通过调节健侧大脑皮层来实现部分功能代偿,改善大鼠神经功能缺损症状及运动功能恢复,其机制可能与上调BDNF,促进神经细胞生长,下调Sema3A、NRP-1,减轻对轴突再生的抑制作用有关。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R245.97
【图文】：

TTC染色,梗死灶,大脑,感觉运动

2019 届硕士学位论文电针对局灶性脑梗死大鼠健侧大脑皮层 BDNF、Sema3A、NRP-1 表达的影响结果1.TTC 染色如图 1 所示，TTC 染色后可见由右侧大脑中动脉供血的额叶、顶叶、颞叶、枕叶皮层以及少部分皮下组织可见呈苍白色的梗死灶，其梗死范围大面积覆盖了大脑感觉运动皮层区域。左侧大脑颜色鲜红、结构完整，未见白色梗死灶。（图 3-1）

大脑皮层,大鼠,尼氏小体,电针

图 3-2 假手术组及手术组大鼠 3d、7d、14d、28d 时健侧大脑皮层 HE 病理染色（ ×400）Fig.3-2 The HE pathological staining of the cerebral cortex in the sham operation group and the operationgroup at 3d, 7d, 14d and 28d (×400)A: sham-operated group; B: model group at 3d;C: electrocacupuncture group at 3d;D: model group at 7d;Emodel group at 14d;F: model group at 28d;G: electrocacupuncture group at 7d;H: electrocacupuncturegroup at 14d;I: electrocacupuncture group at 28d.3.2 尼氏染色假手术组神经细胞形态正常，胞浆染色深蓝，核仁清晰，呈淡蓝色，尼氏小体数量较多，细胞排列整齐有序。模型组、电针组术后 3 天，健侧大脑皮质部分部分神经细胞胞浆颜色变淡，核仁轻微固缩，颜色变深，尼氏小体有轻微裂解现象；术后 7 天时，尼氏小体数量减少，神经细胞轻微肿胀，模型组较电针组明显。术后 14 天电针组较模型组尼氏小体增多，神

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