电针预处理对抑郁模型大鼠电休克治疗后学习记忆功能的影响及机制研究

发布时间：2020-07-07 04:50

【摘要】：目的通过慢性不可预知温和应激建立抑郁症大鼠模型,观察电针预处理在减轻电休克所致学习记忆损害中的作用,并探讨其可能存在的机制。方法 SPF级雄性SD大鼠108只,体重180～220g。采用随机数字表法分为6组(n=18):对照组(Control组)、模型组(Model组)、电休克组(ECT组)、电针组(EA组)、假电针组(NEA组)和AMPK抑制剂组(AI组)。大鼠适应性饲养一周后,开始实验(计为实验第1天)。Control组不做任何实验干预处理,其余五组在实验第9天至第29天均采用慢性不可预知温和应激(CUMS)方法建立抑郁模型。建模成功后,于实验第38天至第43天,ECT组～AI组腹腔注射异丙酚麻醉后,进行电休克治疗。Model组仅行异丙酚麻醉,不行电休克治疗。EA组在电休克治疗前30min,先行电针刺百会穴、印堂穴;NEA组在电休克治疗前30min,先进行假穴位(百会穴、印堂穴旁开5mm)电针刺激;AI组在电针刺前腹腔注射AMPK抑制剂Compound C 20mg/kg,其余处理同EA组。分别于实验第1天、第30天和第44天进行Morris水迷宫实验(定位航行实验和空间探索实验);实验第7天、第36天、第50天进行旷场实验;实验第8天、第37天、第51天进行糖水偏好实验。并分别于每次糖水偏好试验结束后即刻,每组随机处死6只大鼠,迅速置于冰上断头取脑,分离海马组织,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠海马CA1区病理学改变;Western blot法检测大鼠海马AMPK和磷酸化AMPK(p-AMPK)的表达；ELISA法检测大鼠海马 BDNF、TNF-α、IL-6、IL-1α 含量。结果 Morris水迷宫实验:1)定位航行实验:与Control组比较,在第34天时,Model组、ECT组、EA组、NEA组、AI组,第48天时,Model组、ECT组、NEA组、AI组逃避潜伏期和游泳路径明显延长；与第5天时比较,第34天时,Model组、ECT组、EA组、NEA组、AI组,第48天时,Model组、ECT组、NEA组、AI组,逃避潜伏期和游泳路径明显延长;与第34天时比较,EA组逃避潜伏期和游泳路径明显缩短;与EA组比较,第48天时,Model组、ECT组、NEA组、AI组逃避潜伏期和游泳路径明显延长,差异有统计学意义(P0.05);2)空间探索实验:与Control组比较,在第35天时,Model组、ECT组、EA组、NEA组、AI组,第49天时,Model组、ECT组、NEA组、AI组穿越平台次数明显减少;与第6天时比较,第35天时,Model组、ECT组、EA组、NEA组、AI组,第49天时,Model组、ECT组、NEA组、AI组,穿越平台次数明显减少;与第35天时比较,EA组穿越平台次数明显增多;与EA组比较,第49天时,Model组、ECT组、NEA组、AI组,穿越平台次数明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。旷场实验:与Control组比较,Model组、ECT组、EA组、NEA组、AI组,在第36天时,Model组在第50天时,水平运动得分和垂直运动得分均减少;与第7天时比较,Model组、ECT组、EA组、NEA组、AI组在第36天时,Model组在第50天时,水平运动得分和垂直运动得分明显减少;与第36天时比较,ECT组、EA组、NEA组、AI组在第50天时,水平运动得分和垂直运动得分明显增加;第50天时,与ECT组比较,Control组和EA组水平运动得分和垂直运动得分明显增加;与Model组比较,Control组、ECT组、EA组、NEA组水平运动得分和垂直运动得分明显增加,差异有统计学意义(P0.05)。糖水偏好实验:与Control组比较,Model组、ECT组、EA组、NEA组、AI组在第37天时,Model组在第51天时,糖水偏好率均降低；与第8天时比较,Model组、ECT组、EA组、NEA组、AI组在第37天时,Model组在第51天时,糖水偏好率均降低;与第37天时比较,ECT组、EA组、NEA组、AI组在第51天时,糖水偏好率均增高;第51天时,与Model组比较,Control组、ECT组、EA组、NEA组、AI组糖水偏好率均增高,与ECT组比较,Control组和EA组糖水偏好率均增高,差异有统计学意义(P0.05)。病理学改变:在第8天时,各组大鼠海马CA1区形态正常,结构完整,均匀致密,层次清晰。细胞排列紧密,呈圆形或椭圆形,胞浆丰富,核仁清晰。第37天时,Model组、ECT组、EA组、NEA组、AI组均出现不同程度的神经损伤改变,组织水肿,着色变浅,细胞排列紊乱,核固缩,核仁不明显,形态不规则,部分细胞呈空泡状;在第51天时,与其余四组比较,EA组海马神经元细胞数量明显增多,排列紧密,细胞呈圆形或椭圆形,核仁清晰,脑损伤程度明显减轻。与其他各组比较,ECT组出现严重的神经损伤改变,组织水肿,着色变浅,细胞排列紊乱,核固缩,核仁不明显,形态不规则。Western blot检测:与Control组比较,在第37天时,Model组、ECT组、EA组、NEA组、AI组,第51天时,Model组、ECT组、NEA组、AI组AMPK和p-AMPK的表达明显下调;与第8天时比较,第37天时,Model组、ECT组、EA组、NEA组、AI组,第51天时,Model组、ECT组、NEA组、AI组,AMPK和p-AMPK的表达明显下调;与第37天时比较,EA组第51天时,AMPK和p-AMPK的表达明显上调;与EA组比较,第51天时,Model组、ECT组、NEA组、AI组AMPK和p-AMPK的表达明显下调,差异有统计学意义(P0.05)。ELISA检测:与Control组比较,在第37天时,Model组、ECT组、EA组、NEA组、AI组,第51天时,Model组BDNF、TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显降低;与第8天时比较,第37天时,Model组、ECT组、EA组、NEA组、AI组,第51天时,Model组BDNF、TNF-α IL-6、IL-1α含量明显降低;与第37天时比较,ECT组、EA组、NEA组、AI组BDNF、TNF-α IL-6、IL-1α含量明显增高;与Model组比较,第51天时,Control组、ECT 组、EA 组、NEA 组、AI 组 BDNF、TNF-α、IL-6、IL-1α 含量明显增高,与 ECT 组比较,第51天时,Control组、EA组BDNF、TNF-α、IL-6、IL-1α含量明显增高,差异有统计学意义(P0.05)。结论慢性不可预知温和应激可导致大鼠抑郁样行为改变,主要表现为对新环境的探究行为和适应能力下降,快感缺失,电休克治疗可以改善其症状。但是,电休克治疗后大鼠出现了不同程度的学习记忆功能减退。与单纯异丙酚麻醉相比,电针预处理可增强电休克的抗抑郁疗效,并有效改善电休克治疗后的学习记忆功能降低。其机制可能通过激活AMPK信号通路,促进海马BDNF表达,减少海马组织炎症介质TNF-α、IL-6和IL-1α的释放,从而改善抑郁模型大鼠电休克所致的学习记忆能力下降。
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R245.97
【图文】：

示意图,实验大鼠,体重,大鼠

１．４实验方法与步骤逡逑１．４．１动物模型分组逡逑实验大鼠分组如下图（见图１）：逡逑珊栛验丨，—逡逑（ｍＳ）异＿００ｍｇ娜给药逡逑涵邋＿0？＞ｇ／ｋｇ？腔给药邋＇逡逑由车丨？报逦＊■＊邋ＥＣＴ逡逑（ＥＡ＾Ｉｌ）逦异Ｗ酚腹腔给药穴位电针丨桢３0ｍｉｎ逦干预逡逑异内酚１００呢／ｋｇｉ腔给药ｆ穴位电针丨预３０ｍｉｎ＾＾逦／逡逑抑制剂组训丨／丨Ｃｏｍｐｏｕｎｄ邋Ｃ逦穴位电针十预／逡逑（八削邋ｐ＿ｌ0Ｗｋｇ歐给药邋｜邋２0ｍｇ／ｋｇ＿魏邋｜邋３0ｍｉｎ邋丨逡逑图１：实验大鼠分组示意图逡逑实验分组：成年雄性ＳＤ大鼠１０８只，体重为１８０？２２０ｇ。按照随机数字表法分为６逡逑组（ｎ＝１８）：对照组（Ｃｏｎｔｒｏｌ组）：不作任何干预处理；模型组（Ｍｏｄｅｌ组）：仅制备抑逡逑郁症模型；电休克组（ＥＣＴ组）：制备抑郁症大鼠模型，并进行电休克治疗（具体操作方逡逑法见１．４．７）；电针组（ＥＡ组）：制备抑郁症大鼠模型，电休克治疗前３０ｍｉｎ，行电针干逡逑预（具体操作方法见１．４．４）；假电针组（ＮＥＡ组）：制备抑郁症大鼠模型，电休克治疗逡逑治疗前３０ｍｉｎ，进行假穴位（百会穴、印堂穴旁开５＿）电针干预；抑制剂组（ＡＩ组）：逡逑制备抑郁症大鼠模型

百会,大鼠,水池

图５：邋ａ．大鼠穴位选择；ｂ．电针刺的具体过程逡逑行为学评估逡逑．１邋Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫实验逡逑Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫系统由一个圆柱形水池（直径１．２米，高０．５米）和图像采集分析。实验过程中，维持水深０．邋３米，并向水池内加入墨汁使池水呈黑色，水温２２？２４°

大鼠,断头

图６：大鼠全脑图逡逑

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