艾条悬灸调控MR和GR对皮质酮肾阳虚大鼠影响的机制研究

发布时间：2020-07-19 18:11

【摘要】：目的:探讨艾条悬灸对皮质酮肾阳虚大鼠海马及杏仁核中盐皮质激素受体(mineralocorticoid receptor,MR)和糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)基因及蛋白表达的影响,揭示艾条悬灸改善肾阳虚证的可能分子机制。方法:将70只Sprague-Dawley雄性大鼠,体重200±25g,由江西中医药大学动物实验中心提供,借助随机数字表分为空白对照组(n=20)和造模组(n=50)。造模组大鼠依据每克体重给予0.03mg剂量的氢化可的松注射液于双后肢肌注(左右后肢交替注射)每日1次,连续14天建立肾阳虚大鼠模型。造模完成后,剔除不符合要求及死亡的大鼠,剩下造模成功的40只大鼠同样按随机数字表分成2组,分别是模型对照组(20只),艾条悬灸组(20只)。艾条悬灸组从实验第15天起开始介入艾条悬灸,悬灸前预先剪去穴位处的毛发,用江西中医药大学附属医院特制的艾条(直径8mm,长12mm)悬于关元穴、肾俞穴(双)上,先回旋灸2min预热局部皮肤,再固定于上述穴位施行温和灸,实施者将食指放于穴位四周,以有温热感为宜。艾条悬灸20min,每日一次,7次为一疗程,疗程间隔休息2日,再进行第二疗程,共治疗14次。其他两组大鼠进行与艾条悬灸组大鼠同样的捆绑固定及备皮操作。两个疗程结束后,取材。采用ELISA法检测大鼠血清中ACTH、CRH、CORT指标含量,采用RT-PCR技术,Western blot技术检测观察各组大鼠海马和杏仁核中MR和GR mRNA及蛋白的表达。结果:1.体重比较:(1)造模前各组大鼠体重相比较,差异均无统计学意义(P0.05)具有可比性;(2)造模14天,与模型对照组比较,空白对照组大鼠增长明显,有显著性差异(P0.01)。2.血清指标检测:(1)与空白对照组比较,模型对照组大鼠血清ACTH、CRH、CORT表达均下降,均有显著性差异(P0.01);(2)与模型对照组比较,艾条悬灸组大鼠血清CRH、CORT表达均有不同程度的上升,有显著性差异(P0.01),血清ACTH的表达也具有显著性差异(P0.05);(3)艾条悬灸组与空白对照组比较,上述各指标均无显著性差异(P0.05)。3.基因(mRNA)表达:(1)海马:(1)与空白对照组比较,模型对照组海马MR mRNA表达虽有下降但差异无统计学意义(P0.05),而GR mRNA表达下降,差异有显著性意义(P0.05);(2)与模型对照组相比较,艾条悬灸组海马MR、GRmRNA表达虽有不同程度的上升,但是差异未达至统计学意义(P0.05);(2)杏仁核:(1)与空白对照组比较,模型对照组杏仁核MR、GR mRNA表达下降,极具显著性差异(P0.01);(2)与模型对照组比较,艾条悬灸组杏仁核MR mRNA表达上升,差异有统计学意义(P0.01),GR mRNA表达升高,具有显著性差异(P0.05);(3)与空白对照组比较,艾条悬灸组杏仁核MR、GR mRNA表达无显著性差异(P0.05)。4.蛋白表达:(1)海马:(1)与空白对照组比较,各组大鼠海马MR蛋白表达差异无统计学意义(P0.05),但模型对照组大鼠海马GR蛋白表达明显下调,差异有统计学意义(P0.05),艾条悬灸组大鼠海马GR蛋白表达差异无统计学意义(P0.05);(2)与模型对照组比较,艾条悬灸组大鼠海马GR蛋白表达上调,差异有统计学意义(P0.05);(2)杏仁核:(1)与空白对照组相比,模型对照组大鼠杏仁核MR、GR的蛋白表达明显下降,均有显著性差异(P0.05),艾条悬灸组大鼠杏仁核MR、GR蛋白表达基本达至正常水平并无显著性差异(P0.05);(2)与模型对照组比较,艾条悬灸组杏仁核MR、GR蛋白表达上升,有显著性差异(P0.05)。结论:1.本实验在查阅各类肾阳虚大鼠造模方法文献后,选用肌注氢化可的松注射液方法成功建立皮质酮肾阳虚大鼠模型,为本实验的展开奠定良好基础。2.艾条悬灸肾俞穴(双)、关元穴能有效改善肾阳虚大鼠的阳虚症状,在艾灸的温热刺激和特定穴位效应干预下HPA轴上ACTH、CRH、CORT的激素水平升高,HPA轴相关调节功能渐趋正常。3.艾条悬灸使海马、杏仁核GR mRNA及蛋白表达上调,同样帮助杏仁核的MR mRNA及蛋白表达水平上调,从而参与到HPA轴的负反馈调控中,这可能是艾灸改善肾阳虚证的分子机制之一。
【学位授予单位】：江西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R245
【图文】：

图 1 造模图（给大鼠注射氢化可的松）ig.1 Modeling diagram (injection of hydrocortisone物模型成功的判断者通过动物实验研究证实，采用氢化可的松注射液对大鼠

图 3 血清 ACTH 检测步骤Fig.3 Serum ACTH Detection step的实际浓度：我们先用标准物的浓度以及 OD 值计算出标式，再将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，最样品的实际浓度。：加样过程中尽量不要碰触孔壁，应直接加于孔底；浓洗，在稀释时可在水浴中加温助溶；加样操作中应使用加控制在 5 分钟内，并经常校对其准确性，避免误差；每线，最好做复孔；封板膜只限一次性使用，以避免交叉洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

总RNA提取步骤Fig.4RNAextractionstep

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本文编号：2762775