基于体内活性成分追踪的蒙药复方协日嘎-4药效物质基础研究

发布时间：2020-07-22 06:46

【摘要】：复方协日嘎-4药材法定质量标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》(蒙药分册)。本处方由姜黄、黄柏、栀子、蒺藜四味药材组成,具有抗炎、镇痛、解热的功效。用于治疗小便闭止,下尿路感染,膀胱刺痛~([1-2])。课题组前期对协日嘎-4网络药理学进行研究,建立了协日嘎-4的化学成分-靶点-疾病的网络模型,并通过分子对接理论,初步阐明了协日嘎-4与前列腺疾病相关靶点的相互作用及结合模式,确立了协日嘎-4的抗炎活性成分。本文通过建立大鼠非细菌性前列腺炎症模型,进一步探索协日嘎-4的抗炎作用机制。通过血清药物化学研究对协日嘎-4中总萜、总生物碱类抗炎活性成分在正常大鼠和非细菌性前列腺炎大鼠血清中的含量及移行情况进行研究。并对协日嘎-4中总萜、总生物碱类抗炎活性成分在正常大鼠和非细菌性前列腺炎大鼠尿液中的含量进行测定。本论文分为四个部分,对蒙药复方协日嘎-4的药效物质基础进行研究。第一部分分离、富集蒙药复方协日嘎-4的主要化学成分。对大孔吸附树脂富集得到的蒙药复方协日嘎-4有效部位进行分离,进一步分析鉴别其与功能主治相一致的化学成分,并对课题组前期已得到的物质进行富集,为蒙药复方协日嘎-4药效物质基础研究奠定基础。利用理化鉴别及现代波谱分析技术(MS、~1H-NMR、~(13)C-NMR等)鉴定化合物的结构。结果从蒙药复方协日嘎-4中共分离、富集得到6个化合物,分别为生物碱类化合物:小檗碱,酚酸类化合物:姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素,萜类化合物:栀子苷,柠檬苦素类化合物:黄柏内酯。第二部分对复方协日嘎-4的抗炎作用进行药理药效研究。本课题组前期通过网络药理学及分子对接研究,初步阐明了该复方中抗炎活性成分与炎症疾病靶点间的关系,现本文通过讨论该复方对非细菌性前列腺炎的治疗作用,进一步确证复方协日嘎-4的抗炎作用及作用机制。结果表明:蒙药复方协日嘎-4对大鼠非细菌性前列腺炎有治疗作用,协日嘎-4高、中、低剂量组与模型组比较,均对非细菌性前列腺炎有抑制作用(P0.05),其中协日嘎-4中剂量组效果最佳。ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、前列腺特异抗原(PSA)、白细胞介素4(IL-4)、睾酮(T)、雌二醇(E2)水平;测定组织研磨液中前列腺素E2(PGE-2)水平,结果表明:协日嘎-4各剂量组均能降低TNF-α、PSA、IL-4、E2、PGE-2因子水平,并使T水平升高。与模型对照组比较,协日嘎-4中、高剂量组存在显著性差异。差异有统计学意义(P0.01)。通过前列腺组织病理切片观察,进一步探讨协日嘎-4对非细菌性前列腺炎的治疗作用。结果表明:复方协日嘎-4高、中、低剂量组较模型组炎性特征均减轻,中剂量组效果最好,炎细胞数量明显减少,与阳性对照药结果相似。第三部分对复方协日嘎-4体内成分进行研究。复方协日嘎-4有效部位中主要化学成分有萜类、生物碱类、柠檬苦素类、酚酸类及挥发油等,国内外对萜类、生物碱类、酚酸类、柠檬苦素类化学成分进行了大量的药理研究,结果表明上述成分均具有抗炎的功效,是蒙药复方协日嘎-4抗炎镇痛、清热消淤的物质基础。本课题组前期对酚酸类抗炎活性成分在正常大鼠与非细菌性前列腺炎大鼠血清、尿液中的含量及血中移行情况进行研究。本文利用现代化手段,建立了协日嘎-4中总萜、总生物碱类抗炎活性成分在正常大鼠与非细菌性前列腺炎大鼠血清中的含量及移行情况的研究方法。建立了协日嘎-4中总萜和总生物碱类抗炎活性成分在正常大鼠和非细菌性前列腺炎大鼠尿液中含量的测定方法,探讨蒙药复方协日嘎-4与治疗非细菌性前列腺炎的相关性,并为该复方的药效物质基础提供科学依据。
【学位授予单位】：内蒙古医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R29
【图文】：

前列腺,形态学,大鼠前列腺

图 1 前列腺形态学考察A：模型组大鼠前列腺 B：正常组大鼠前列腺表 3-1. 前列腺指数计算=全前列腺重量（mg）/体重（g）（ x±s，n=10）Table 3-1. Prostate index calculation = total prostate weight (mg)/body weight (g)（ x±s，n=10）分组前列腺指数体积空白组 1.29±0.22 0.43±0.09模型组 2.75±0.43**0.84±0.19*高剂量组 2.11±0.49△△0.52±0.11△△中剂量组 2.07±0.14△△0.49±0.13△△低剂量组 2.47±0.39△0.71±0.21△非那雄胺组 1.57±0.14△△0.48±0.11△△癃闭舒组 2.18±0.23△0.53±0.07△△

大鼠前列腺,非那雄胺,低剂量,组结

图 2 前列腺组织病理切片观察A：正常组 B：模型组 C：协日嘎-4 高剂量组 D：协日嘎-4 中剂量组E：协日嘎-4 低剂量组 F：非那雄胺组 G：癃闭舒组结果表明，正常组大鼠前列腺呈粉红色，形状饱和且完整，排列单一，腺腔大小基本一致，腺管周围组织中，增生、炎症细胞浸润及充血等病理改变没有发生；在非细菌性前列腺炎模型组中，前列腺呈暗红色，前列腺腔的形状不规则并且大量炎性细胞如中性粒细胞、淋巴细胞等浸润在腺体和间质周围，血管扩张甚至充血，细胞排列紧密，部分腺上皮呈乳头状增生。协日嘎-4 中剂量组前列腺增生现象受到明显抑制，上皮和腺上皮恢复正常，未见明显的炎症细胞浸润。协日嘎-4 高、低剂量组大鼠前列腺组织上皮、腺上皮未见明显增生，腺上皮恢复正常，没有明显的炎症细胞浸润，间质内偶有血管充血。结果表明，协日嘎-4 高中

时间曲线,时间曲线,蒙药,总生物碱

图 3 模型组和正常组大鼠药物-时间曲线Figure 3 Drug curve of model group and normal group DAS 软件统计程序处理不同时间点的血药浓度数据得到药代 4-1-5。 4-1-5 大鼠灌胃药蒙药复方协日嘎-4 后总生物碱的主要药代动力学参数 ( x±s，n The main pharmacokinetic parameters of total alkaloids in rats treated with dictyostatin ( 参数正常组模型组t1/2k13.28±0.33▲▲20.55±0.90t1/2(min) 69.3147 69.3147V1/F(L.kg-1) 69564.86±2806.51▲▲86013.38±2323.55CL/F(L/min/kg) 187.07±11.60▲▲151.69±19.37

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