温经通络法治疗类风湿关节炎的预后分析及对滑膜血管新生的干预机制研究

发布时间：2020-09-01 20:21

　　 第一部分 文献综述围绕RA滑膜血管新生与lncRNA HOTAIR的关系的相关研究进展及“从络治痹”对RA的认识、治疗和中医药对RA预后的影响等做以详细论述。第二部分 临床研究目的:对接受过温经通络法治疗的RA寒湿痹阻证患者进行随访,分析患者预后情况,考察温经通络法的远期有效性及影响RA预后的因素。方法:对参加过北京中医药大学自主选题项目(2013-ZYLC-010)的84例患者进行随访,对患者疾病活动度、中医证候积分、HAQ评分进行评估,并记录患者随访期限内的诊治及用药、合并症、关节锻炼等情况,采用logistic回归法分析与RA预后相关的因素。结果:治疗组患者的ESR、RF、压痛关节数、VAS评分、DAS28水平、中医证候积分及HAQ评分低于对照组(P0.05),两组间CRP、肿胀关节数、晨僵时间方面相比无统计学差异;两组患者在既往病史、新发疾患、BMI、不良生活习惯方面无显著差异,但治疗组口服中药及中医外治的应用较对照组为多,定期门诊、规律复查、关节锻炼等情况优于对照组(P0.05)。Logistic回归法检验发现,采用以温经通络法为主的中药治疗及关节锻炼进入回归方程(P0.05),对RA临床缓解及低疾病活动度的维持具有保护性意义。结论:温经通络法能通过良好疗效提高患者依从性,对RA预后起到了积极的作用;以温经通络为法的中医治疗和关节锻炼能改善RA寒湿痹阻证患者的远期预后。第三部分 实验研究实验一目的:构建并筛选过表达HOTAIR及阴性对照稳定株,为后续温经通络法干预研究提供实验材料。方法:经过慢病毒载体的构建、包装、纯化、滴度测定构建过表达HOTAIR质粒,选择最适感染复数(MOI)后转染HFLS-RA细胞,经嘌呤霉素筛选2周,最后对得到的稳定株HOTAIR表达情况进行qPCR验证。结果:构建好的过表达HOTAIR慢病毒滴度为1.54×108IU/mL,经转染并筛选后,倒置显微镜下观察可见过表达HOTAIR和阴性对照稳转株的EGFP荧光率均达到98%以上,嘌呤霉素抗性明显,空白组无荧光表达,qPCR结果显示过表达组与阴性对照及空白组相比HOTAIR相对表达量显著升高(P0.05)。结论:过表达HOTAIR及阴性对照稳定株(分别记为HOTAIR(+)和HOTAIR-NC细胞)构建成功。实验二目的:探讨HOTAIR在RA发病中的作用以及温经通络法对RA滑膜血管新生的干预机制,丰富温经通络法治疗寒湿痹阻型RA的理论依据。方法:Il-1β诱导构建好的HOTAIR(+)和HOTAIR-NC细胞造模,分空白组、诱导组、雷公藤组、芍甘附子汤加味小、中、大剂量组含药血清干预;采用CCK-8法检测细胞增殖,qPCR法和WB法检测细胞内HIF-1α、VEGF、VEGFR-2、Ang-1、Ang-2mRNA相对表达量和蛋白表达量,ELISA法检测细胞培养上清液中HIF-1α、VEGF、VEGFR-2、Ang-1、Ang-2的含量。结果:诱导后HOTAIR(+)组细胞较HOTAIR-NC组细胞具有更高的增殖率,与诱导组相比,两种细胞各剂量治疗组均表现出了对细胞增殖的抑制作用,其中大剂量组与雷公藤组效果类似,但差异不显著(P0.05);QPCR结果显示,随HOTAIR水平升高,诱导组HIF-1α、VEGFA、VEGFR-2、Ang-1、Ang-2mRNA表达水平均有显著升高(P0.05),HOTAIR(+)细胞更为显著,治疗后各因子表达量均有所下降,各中药含药血清治疗组的效果基本呈剂量依赖性,HOTAIR(+)和HOTAIR-NC细胞除Ang-2外,其余各血管生成相关因子mRNA及HOTAIR的表达差异不显著(P0.05);蛋白表达结果显示,HOTAIR(+)诱导组HIF-1α、VEGFR-2、Ang-2蛋白表达水平显著增高(P0.05),而HOTAIR-NC细胞仅Ang-2的结果具有统计学差异(P0.05);与诱导组相比,两种细胞大剂量组对Ang-2蛋白表达水平具有显著抑制作用(P0.05),各中药治疗组在Ang-2蛋白表达水平的抑制方面效果较明显,结果与药物血清浓度呈正相关(P0.05);NC组VEGFA水平高于过表达组(P0.0.05),而IL-1β诱导后VEGFR-2、Ang-1、Ang-2水平则低于HOTAIR(+)细胞,这一情况在Ang-1组的对比中较为显著(P0.05);诱导组经IL-1β刺激后,上清液均中可检出显著高于空白组的HIF-1α、VEGFA、VEGFR-2、Ang-1、Ang-2浓度(P0.05),各治疗组含药血清干预后各因子水平均有减低(P0.05),各中药干预组间的疗效基本呈剂量依赖性,剂量越高改善越明显;两种细胞经刺激后,HOTAIR-NC细胞上清内VEGFA、VEGFR-2、Ang-1含量低于过表达组(P0.05)。结论:HOTAIR可能通过促进HIF-VEGF-Ang轴相关血管新生因子的表达,促进RA滑膜成纤维细胞增殖,影响RA的预后;加味芍甘附子汤作为温经通络法的代表,可能是通过下调细胞内HOTAIR的表达,抑制HIF-VEGF-Ang轴相关血管新生因子和RA滑膜成纤维细胞的增殖以发挥其改善预后的效果,其中大剂量药物的干预作用最为显著。
【学位单位】：北京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R259
【部分图文】：

两组共有男性患者１２例，女性患者５０例，男女比例为１：４．１，其中治疗组男性５例，女逡逑性２７例，对照组男性７例，女性２３例。对两组纳入患者的性别进行比较，经卡方检验无显逡逑著组间差异（Ｐ＞０．０５），具有可比性，见表２、图２。逡逑表２两组患者性别比较（单位：例）逡逑组别逦ｎ逦男逦女逦ｘ２逦Ｐ逡逑治疗组逦３２逦５邋（１５．６３％）逦２７邋（８４．３７％）逡逑０．５８９逦０．４４３逡逑对照组逦３０逦７邋（２３．３３％）逦２３邋（７６．６７％）逡逑４０－｜逦ＣＺ３邋女逡逑口见逡逑ｃｚｚ逡逑｜邋－Ｐ曑逡逑ＪｆｌＪｒａｉ逦对照织逡逑图２两组患者性别比较（单位：例）逡逑１．４两组随访时年龄及分布情况逡逑经统计，治疗组及对照组纳入患者的平均年龄分别为５７．５９±１０．４５岁和６０．８７±１０．５０逡逑岁，其中治疗组忠者年龄最小３６岁，最大８３岁，对照组患者年龄最小３４岁，最大８０岁，逡逑两组患者年龄比较经检验无明显组间差异（Ｐ＞０．0５）；按２０－４０岁、４１－６０岁、６］－８０岁和逡逑大于８０岁对患者年龄进行分层分析显示，两组患者年龄主要分布于４１－６０岁和６１－８０岁，逡逑分别占９０．６３％和９３．３３％，卡方检验显示两组间在年龄分层上差异不明显（广ｆｔ５Ｖ９＞０．０５），逡逑具有可比性

大于８０岁对患者年龄进行分层分析显示，两组患者年龄主要分布于４１－６０岁和６１－８０岁，逡逑分别占９０．６３％和９３．３３％，卡方检验显示两组间在年龄分层上差异不明显（广ｆｔ５Ｖ９＞０．０５），逡逑具有可比性，见表３，图３、４。逡逑４７逡逑

逦温经通络法治疗类风湿关节炎的预后分析及对滑膜血管新生的干预机制研宄逦逡逑表３两组患者年龄比较（单位：岁）逡逑ｎ逦各年龄段ｎ邋（％）逡逑组别逦逦逦逦邋ｘ±ｙ逦ｔ邋Ｐ逡逑（例）逦２０－４０逦４１－６０逦６１－８０逦＞８０逡逑治疗组逦３２逦２邋（６．２５）逦１７邋（５３．１３）逦１２邋（３７．５０）逦１邋（３．１２）逦５７．５９±１０．４５逡逑－１．２２９逦０．２２４逡逑对照组逦３０逦２邋（６．６７）逦１２邋（４０．００）逦１６邋（５３．３３）逦０邋（０．００）逦６０．８７±１０．５０逡逑８0ｉ逦２０－１逡逑

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 徐小燕;周春亭;郑红卫;周宝灵;;温经通络散联合蜡疗治疗类风湿性关节炎41例疗效观察[J];浙江中医杂志;2017年07期

2 孙文山;张建;侯全运;;温经通络法治疗急性腰椎间盘突出症疗效观察[J];中国中医急症;2015年05期

3 陈美谦;王春妹;林新新;;温经通络方联合硫酸镁预防奥沙利铂所致周围神经毒性的疗效观察[J];温州医学院学报;2012年03期

4 余冬梅;方立;;温经通络散治疗膝关节骨关节炎56例[J];中国中医急症;2006年05期

5 胡建兰;温经通络散对急性白血病化疗患者的静脉保护作用[J];中国中医急症;2005年09期

6 张世友;温经通络治疗雷诺氏病的体会[J];实用中医药杂志;1998年01期

7 张兴惠;新法治疗脉管炎80例临床报告[J];山东医药;1988年11期

8 周华龙;;试论拔火罐的临床运用[J];中国初级卫生保健;1989年09期

9 胡劲涛;刘宏;;自拟温经通络方治疗老年腰椎间盘突出症疗效观察[J];浙江中西医结合杂志;2015年01期

10 张贤;陈俊君;程盛;;温经通络法治疗腰椎间盘突出症伴下肢发凉23例[J];中国中医骨伤科杂志;2014年11期

相关会议论文 前10条

1 王春妹;陈美谦;陈妃寅;;温经通络方熏洗预防奥沙利铂所致神经毒性反应的效果研究[A];创新创业与科学发展——瑞安市第十届自然科学优秀论文集[C];2011年

2 张亚男;娄彦妮;贾立群;;温经通络法外治恶性肿瘤化疗性周围神经病变的随机交叉、安慰剂对照临床试验[A];第十五届全国中西医结合肿瘤学术大会论文集[C];2017年

3 李新华;;温经通络散外用治疗糖尿病合并下肢血管病变及神经病变举隅[A];重庆市中医药学会2011年学术年会论文集[C];2011年

4 刘纪彬;;温经通络麻疼丸治疗糖尿病周围神经病变36例观察[A];第六次中国中西医结合糖尿病学术会议论文汇编[C];2002年

5 张庆昌;李振国;;益气活血温经通络法治疗系统性硬皮病疗效观察[A];第四届全国中西医结合风湿类疾病学术会议论文汇编[C];2000年

6 李振国;张庆昌;;益气活血温经通络法治疗系统性硬皮病雷诺氏现象疗效观察[A];第四届全国中西医结合风湿类疾病学术会议论文汇编[C];2000年

7 李金花;李惠林;赵恒侠;刘燕平;李增英;;温经通络熏洗方治疗DPN疗效观察及机理探讨[A];内分泌代谢病中西医结合研究——临床与基础[C];2010年

8 艾双春;;针灸温经通络法缓解OP椎体压缩性骨折疼痛的临床研究[A];中华中医药学会第五次中医防治疼痛学术年会论文汇编[C];2014年

9 张晋芳;;圆利针加推拿治疗腰椎间盘突出症50例[A];2011中国针灸学会年会论文集（摘要）[C];2011年

10 王惠;;中药湿敷法结合场效应治疗仪促进偏瘫患者关节活动障碍的疗效观察[A];2013年河南省中风康复护理新业务、新技术学术会议论文集[C];2013年

相关重要报纸文章 前6条

1 ;温经通络散熏洗可防治糖尿病周围神经病变[N];中国中医药报;2004年

2 河南省中医院 郭会卿　李沛;李振华用养血温经通络法治寒痹[N];中国中医药报;2010年

3 (辽宁阜新市中医院 靳玉良 姜颖韶等);中药内服外敷治疗股骨头缺血性坏死[N];民族医药报;2010年

4 施志乐;服中药要忌口吗？[N];上海中医药报;2005年

5 江苏 副研究员 陈志春;欲进补 必须先识补[N];家庭医生报;2004年

6 湖北中医药大学 魏东生;针药并用治面瘫[N];中国中医药报;2010年

相关博士学位论文 前3条

1 丁明辉;温经通络法治疗类风湿关节炎的预后分析及对滑膜血管新生的干预机制研究[D];北京中医药大学;2019年

2 靖卫霞;温经通络法对类风湿关节炎滑膜血管新生的干预作用研究[D];北京中医药大学;2013年

3 王媛媛;温经通络散外用对奥沙利铂周围神经毒性干预的实验研究[D];北京中医药大学;2015年

相关硕士学位论文 前10条

1 张艳秀;温经通络方治疗中风恢复期痉挛性偏瘫的临床疗效观察[D];新疆医科大学;2018年

2 颜世昌;温经通络化痰法治疗急性痛风性关节炎的理论和实验研究[D];湖北中医学院;2009年

3 邓柏杨;温经通络对实验损伤性动脉硬化性闭塞症治疗作用的研究[D];北京中医药大学;2005年

4 何柳;益气温经通络方防治化疗患者奥沙利铂所致外周神经毒性的临床研究[D];湖北中医药大学;2010年

5 张亚男;温经通络法外治化疗性周围神经病变的交叉、安慰剂对照临床研究[D];北京中医药大学;2017年

6 付志敏;温经通络法治疗0级糖尿病足的临床研究[D];广州中医药大学;2011年

7 汤雨;温经通络法治疗化疗致周围神经毒性的临床研究[D];北京中医药大学;2016年

8 邓超;养血温经通络中药泡洗防治草酸铂所致神经毒性的临床研究[D];首都医科大学;2014年

9 何清香;温经通络外洗方治疗糖尿病周围神经病变的临床观察[D];广州中医药大学;2015年

10 李金花;温经通络熏洗方对糖尿病周围神经病变的疗效观察及机理探讨[D];广州中医药大学;2008年

本文编号：2810211