针刺对血管性痴呆大鼠NGB和HIF-1α的表达及其作用机制研究

发布时间：2020-09-18 16:48

　　目的:1、通过比较各组VD大鼠治疗后Morris水迷宫测试成绩,验证针刺对血管性痴呆大鼠认知记忆能力的影响。2、通过HE染色观察针刺对血管性痴呆大鼠脑海马组织形态学的影响。3、检测针刺对血管性痴呆模型大鼠的脑组织海马区Ngb和HIF-1α基因转录及蛋白表达的影响。方法:1、国际公认的4-VO方法改良后复制血管性痴呆大鼠模型。2、选取12只仅暴露4条血管的大鼠作为假手术组,另外将造模成功的36只大鼠随机分为模型组、电针组、药物组,每组各12只。电针组予以针刺百会、风府穴,同时予以电针刺激,刺激电流1m A,频率为2Hz,每天治疗1次,留针30分钟,从治疗开始每连续治疗6天后,休息一天,共治疗4周。药物组给予尼莫地平灌胃治疗,与电针组同时开始治疗,每天一次,每连续治疗6天后,休息一天,共治疗4周。模型组和假手术组只做抓取、固定而不给予任何治疗。3、于造模后、治疗后,分别进行Morris水迷宫测试,筛选大鼠及检测大鼠认知记忆能力的改善。4、使用HE染色观察海马神经元的形态学改变。5、采用Western blot法,进行Ngb和HIF-1α蛋白的定性、定量分析(神经元:采用神经丝蛋白(Neurofilament,NF),星形胶质细胞:采用神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP))。6、采用RT-PCR方法检测Ngb、HIF-1α和p53RFPm RNA的表达。结果:模型组与假手术组相比,大鼠水迷宫测试逃避潜伏期明显延长,跨越平台次数明显减少(p0.05);治疗后,电针组、药物组与模型组相比,逃避潜伏期明显缩短,跨越平台次数明显增多,差异明显(p0.05),其中电针组比药物组改善更加明显(p0.05)。HE染色于400倍显微镜下观察神经细胞,可见模型组大鼠海马CA1区神经细胞数量明显减少,部分神经元突起出现病理性缩短甚至消失。电针组、药物组与模型组大鼠相比海马CA1区神经细胞数量增加,排列相对整齐,细胞结构及形态基本正常,细胞水肿程度较轻,且电针组更明显。电针组和药物组较模型组,大鼠脑神经元损伤程度明显减轻,Ngb、HIF-1α、NFm RNA与蛋白的表达明显增加,p53m RNA、GFAPm RNA与蛋白的表达明显降低,有显著差异(p0.05);电针组与药物组相比,改善更加显著(p0.05)。结论:针刺“百会”、“风府”能提高血管性痴呆大鼠水迷宫成绩,改善其学习记忆能力,并能通过促进大脑海马中Ngb、HIF-1α、NF的表达,降低P53、GFAP的含量,来抑制神经元细胞的凋亡。
【学位单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R245
【部分图文】：

跨越平台,次数,电针,统计学意义

实验结果4.实验结果4.1 水迷宫实验检测结果从图 1 和表 1 中各组大鼠水迷宫测试逃避潜伏期及跨越平台次数比较可与假手术组相比，模型组逃避潜伏期明显延长，跨越平台次数明显减少，差统计学意义（p<0.05）；与模型组相比，电针组、药物组大鼠逃避潜伏期明显缩跨越原平台次数明显增多，差异具有统计学意义（p<0.05）；而其中电针组改鼠的学习记忆及认知效果明显好于药物组（p<0.05）。

HE染色,脑组织,电针,海马神经细胞

电针组、药物组与模型组大鼠相比，海马神经细胞分布相对规则整齐，细胞水肿减弱，细胞染色相对均匀，数量有一定的增加，且电针组改变比药物组更明显。假手术组模型组

蛋白表达,电针

图 3 各组大鼠海马组织中 Ngb、HIF-1α、NF、GFAP 蛋白表达比较（x±s,n=12）ig3 :Comparison of Ngb, HIF-1α, NF and GFAP protein expression in hippocampus of each g(x±s, n=12)表 2 各组大鼠海马组织中 Ngb、HIF-1α、NF、GFAP 蛋白表达比较（x±s，n=12）ab 2: Comparison of Ngb,HIF-1α,NFandGFAP protein expression in hippocampus of each gr（x±s,n=12）组别 nNGB 平均相对表达量HIF-1α平均相对表达量NF 平均相对表达量GFAP表假手术组 12 0.42±0.02 0.54±0.02 1.36±0.04 0.4模型组 12 0.58±0.02*0.74±0.04*0.51±0.01*1.1电针组 12 1.15±0.04* 1.31±0.03* 1.07±0.02* 0.53药物组 120.96±0.04* 1.07±0.05* 0.92±0.01* 0.71

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