“醒脑开窍”针法对大脑中动脉闭塞大鼠不同时相ICAM-1、MMPs-9表达的影响
【部分图文】：
大鼠造模后4 h、1 d、7 d及20 d，实验组与对照组相比较，实验组相应时间点ICAM-1表达均小于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表2,pcr溶解曲线及扩增曲线分别见于图1、图2;大鼠造模后4 h、1 d、7 d及20 d，实验组与对照组相比较，实验组相应时间点MMPs-9表达均小于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表3,pcr溶解曲线及扩增曲线分别见于图3～4。3 讨论
经过大量查阅文献笔者选择体质量为(280±20) g的SD大鼠作为研究对象，原因如下:第一，体质量过小(<250 g)的大鼠对于麻药耐受性比较差，增加了死亡率，而且体质量较小的大鼠血管也较细，导致碳素鱼线难以插入;第二，体质量过大(>300 g)的大鼠血管变异的可能性大大增加，会使手术难度增加;第三，体质量>300 g的大鼠血管相应要粗很多，MCA的血流不能被线栓充分阻断，从而导致造模成功率下降。除此之外，性别对于该模型的影响不容小觑，笔者选择雄性大鼠是由于已有研究表明[7]，雌激素对神经具有保护作用，且雌激素的分泌具有周期性，而目前的技术尚不能准确计算雌激素水平，即实验干预因素不可控，而雄激素的分泌周期并不显著且对神经生理指标无太大影响。故体质量为(280±20) g的雄性SD大鼠更适合MCAO模型的制备。在前期造模预实验过程中，笔者发现尽管线栓已完全且顺利插入，但并未出现神经功能缺损症状，对此类造模不成功的大鼠进行解剖发现，是由于个别大鼠血管变异，需要插入线栓的深度与理论有一定的差距;另有大鼠在麻醉清醒时评分达3分，却于次日或隔日死亡，解剖发现大鼠颅底可见血凝块，推测由于线栓过程中手法太重，造成了蛛网膜下腔出血，因此在此实验过程中，不仅要明确实验动物的选择，亦要对造模插线的手法及时间予以精确掌握。本实验之所以选用MMPs-9、ICAM-1两个炎症因子作为观察指标是因为近年来，随着对脑缺血损伤机制的研究愈加深入，进行的相关研究亦随之表明，炎症因子的产生和发生作用是脑缺血损伤时的重要病理环节，因炎症因子会导致脑组织代谢异常，引起神经元损伤和凋亡[8]。ICAM-1能够在血管内皮细胞上表达，在炎性细胞因子以及内毒素等物质的刺激下表达率大幅度升高，当脑发生损伤时，TNF-αm RNA的表达会增加，进而对组织造成损伤，具体的机制:血管内皮细胞受损，通透性增加并产生凝血活性物质，导致内皮细胞表现为促凝状态，最终诱发血管出血及血栓[9];刺激ICAM-1异常增高，使血管舒缩活性物质不能正常表达，致使血管异常收缩，进一步使得脑缺血以及局部卒中的危险系数增加;触发神经细胞凋亡机制导致细胞凋亡;而MMPs来源于血管平滑肌细胞、单核巨噬细胞以及内皮细胞中，其中与脑缺血及再灌注密切相关的主要为明胶酶A(MMP-2)、明胶酶B(MMP-9)。这两种MMPs被激活或活性上调，导致血脑屏障结构破坏，功能损伤，继而引起脑水肿和出血[10-11]。本实验中缺血再灌注损伤后4 h时，实验组、对照组大鼠脑组织MMPs-9 m RNA、ICAM-1 m RNA已大量表达，再灌注1 d时两组大鼠的两种炎症因子表达到最高峰，7～20 d，随时间的延长，两组大鼠脑组织MMPs-9m RNA、ICAM-1 m RNA表达逐渐降低，且实验组低于对照组(P<0.05);再灌注20 d时，实验组大鼠脑组织MMPs-9 m RNA、ICAM-1 m RNA的表达明显低于对照组(P<0.05)。因此，本实验证明，“醒脑开窍”针法可以通过抑制血清及脑组织中炎症因子ICAM-1、MMPs-9的表达，从而发挥对脑组织的保护作用，并且针刺时间越早、周期越长，其疗效也就越明显。但在脑缺血损伤过程中，影响血脑屏障的因素很多，本实验中笔者所涉及检测到的指标有限，然而体内微环境复杂，“醒脑开窍”针刺疗法是否通过其他方式减轻脑损伤，这些问题都需要在后续的研究中以待完善。图3 MMPs-9Real-time溶解曲线
MMPs-9Real-time溶解曲线
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