目的通过自制颈椎前屈位装置,造成兔骨骼肌静力性损伤,观察理筋手法对受损骨骼肌外周疼痛物质、组织形态学、肌细胞骨架蛋白Desmin和α-Actin的表达的影响,从组织生物分子学方面探讨理筋手法治疗静力性骨骼肌损伤的机制。方法60只普通级大耳朵兔随机抽取18只为正常组(Normal,Nor组),随机抽取6只采用颈椎前屈45°进行造模,建立骨骼肌静力性损伤模型,建模成功后,其作为模型组(Model set,MS组),剩余36只按照以上方法进行造模,根据随机数字表法分为理筋手法组(Li jin,LJ组,18只)和自然恢复组(Self repairing,SR组,18只)。理筋手法组在造模结束后行理筋手法治疗,正常组和自然恢复组不做治疗,分别在伤后7d、14d和21d各随机选取6只兔子取材。耳缘静脉采集血液,用酶联免疫吸附测定5-羟色胺(5-HT)、β-内啡肽(β-EP)和P物质(SP)的含量;透射电镜观察组织的超微结构,HE染色观察组织病理变化,免疫组织化学法检测阳性肌纤维,免疫印迹法检测Desmin和α-Actin的表达水平。实验数据采用SPSS22.0统计软件进行分析。结果1.模型评估颈后肌僵硬程度的变化情况:造模过程中,模型组颈部肌肉组织逐渐变僵硬;造模结束后可触及结节或条索状物,说明本实验兔骨骼肌静力性损伤模型是成功的。肌组织形态学变化:纵切面上观察,大部分肌纤维排列紊乱,扭曲变形、断裂,大量炎性细胞浸润,横切面上肌细胞萎缩,肌细胞间隙明显增宽,说明本实验兔骨骼肌静力性损伤模型是成功的。2.实验兔一般情况各组实验兔均存活至实验结束,实验兔在造模前,反应灵敏,双眼有神,对捕捉有明显的逃避反应;造模结束后,兔精神状态不佳,反应迟钝,毛发松散无光泽,形体消瘦,饮食减少。3.外周血检测指标:β-EP结果:模型组、理筋手法组和自然恢复组在造模后,β-EP含量变化无统计学意义(P0.05),说明实验具有可比性,与正常组比较,β-EP含量明显降低(P0.05);理筋手法组和自然恢复组在治疗前后β-EP含量变化有统计学差异(P0.05);损伤治疗14d,理筋手法组的β-EP含量高于自然恢复组(P0.05);损伤治疗21d,理筋手法组的β-EP含量明显高于自然恢复组(P0.05)。5-HT检测结果:模型组、理筋手法组和自然恢复组在造模后,5-HT含量变化无统计学意义(P0.05),说明实验具有可比性,与正常组比较,5-HT含量明显升高(P0.05);理筋手法组和自然恢复14d、21d在治疗前后5-HT含量变化具有统计学差异(P0.05);损伤治疗7d,理筋手法组的5-HT含量比自然恢复组的低(P0.05);损伤治疗14d,理筋手法组的5-HT含量比自然恢复组明显低(P0.05);损伤治疗21d,理筋手法组与自然恢复组比较,5-HT含量没有明显差异(P0.05)。SP检测结果:模型组、理筋手法组和自然恢复组在造模后,SP含量变化无统计学意义(P0.05),说明实验具有可比性,与正常组比较,SP含量明显升高(P0.05);理筋手法组和自然恢复14d、21d在治疗前后SP含量变化具有统计学差异(P0.05);损伤治疗7d,理筋手法组的SP含量比自然恢复组低(P0.05);损伤治疗14d,理筋手法组的SP含量比自然恢复组明显低(P0.05);损伤治疗21d,理筋手法组的SP含量变化与自然恢复组有显著差异(P0.05)。4.组织形态病理观察:HE染色观察结果:正常组肌纤维整齐排列,肌细胞结构完整。模型组大部分肌纤维排列紊乱,肌纤维扭曲变形、断裂,炎性细胞浸润。损伤治疗7d,理筋手法组和自然恢复组肌纤维断裂扭曲,炎性细胞浸润,有少量空泡样肌细胞。损伤治疗14d,理筋手法组肌纤维肿胀,仍有炎性细胞浸润,但肌纤维结构明显比自然恢复组有所改善。损伤治疗21d,理筋手法组肌细胞较整齐紧密,有新生肌细胞,肌纤维肿胀明显消退,自然恢复组仍有少量的炎性细胞浸润,肌纤维结构好转。透射电镜观察肌纤维超微结构:正常组可见致密且排列整齐肌纤维,清晰的看到完整的Z线和M线;模型组肌纤维疏松,扭曲变形断裂,找不到完整的肌节,M线和Z消失不见;损伤治疗7d,理筋手法组肌纤维疏松,有一小部分完整的肌节,可见部分Z线,自然恢复组肌节宽度大小不等,肌纤维疏松;损伤治疗14d,理筋手法组可见大部分清晰Z线和M线,大量的线粒体较均匀的分布在肌纤维之间,自然恢复组肌纤维疏松程度比理筋手法组较重,可见大部分Z线,有少量的线粒体分布;损伤治疗21d,理筋手法组大部分完整的肌节,肌纤维致密,少部分Z线和M线仍有破坏,肌纤维明显好转,自然恢复组仍有一小部分肌纤维处于扭曲状态,Z线清楚,少量完整肌节。5.骨骼肌肌组织Desmin、α-Actin阳性肌纤维(AOD值):正常组分别与模型组、理筋手法治疗7d和14d、自然恢复组各组比较,正常组的Desmin、α-Actin阳性肌纤维AOD值明显升高(P0.05);损伤治疗7d,理筋手法组的骨骼肌纤维Desmin、α-Actin阳性肌纤维AOD值高于自然恢复组(P0.05);损伤治疗14d,理筋手法组的骨骼肌纤维Desmin、α-Actin阳性肌纤维AOD值高于自然恢复组(P0.05);损伤治疗21d,理筋手法组的骨骼肌纤维Desmin、α-Actin阳性肌纤维AOD值高于自然恢复组(P0.05)。6.骨骼肌组织Desmin、α-Actin表达(免疫印迹法):正常组分别与模型组、理筋手法治疗7d和14d、自然恢复组各组比较,正常组的Desmin、α-Actin表达水平明显较高(P0.05);损伤治疗7d,理筋手法组的骨骼肌纤维Desmin、α-Actin表达水平高于自然恢复组(P0.05);损伤治疗14d,理筋手法组的骨骼肌纤维Desmin、α-Actin表达水平高于自然恢复组(P0.05);损伤治疗21d,理筋手法组的骨骼肌纤维Desmin、α-Actin表达水平高于自然恢复组(P0.05)。1.理筋手法通过调节外周血清β-EP、5-HT、SP的含量,达到镇痛效果。2.理筋手法通过增加肌纤维细胞骨架蛋白Desmin、α-Actin的表达,促进损伤骨骼肌组织形态和结构的修复。
【学位单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R244.1
【部分图文】：
硕士学位论文 骼肌静力性损伤模型建立颈肌损伤的动物模型建立符合人类长期伏案工作或反复低头的单易于操作，而且无损伤皮肤的特点，这样有利于后期手法治疗方法进行改造[15-16]造模，改良模具参照刘志华[14]模型架建立骨骼韧性较好的铁丝固定架绑在实验兔身上，使颈部前屈 45°，颈部部用松紧绳将铁丝固定，松紧度以不影响正常呼吸为宜，且兔四按照此方法造模。每日 1 次，每次固定 5h，连续 2 个月。每天造中单独饲养，观察兔的精神状态、反应性等一般情况。
图 4 各组实验兔颈部骨骼肌肌组织 HE 染色病理结构（200×）：正常组（A1-A2），正常肌纤维；模型组（B1-B2）；理筋手法治疗 7d 肌纤维（C1-C2）；自然恢复 7d 肌纤维D1-D2）；理筋手法治疗 14d 肌纤维（E1-E2）；自然恢复 14d 肌纤维（F1-F2）理筋手法治疗 21d 肌纤维（G1-G2）然恢复 21d 肌纤维（H1-H2）。.2 骨骼肌纤维超微结构透射电镜观察肌纤维超微结构（图 5），正常组（A 图）可见大量致密且排列整齐肌丝组成的肌纤维，能清晰的看到完整的 Z 线和 M 线，线粒体结构完整，肌浆网清可见；模型组（B 图）肌纤维疏松，扭曲变形断裂，排列紊乱，找不到完整的肌节， 线消失不见，Z 线部分消失，线粒体结构完整；损伤治疗 7d，理筋手法组（C 图）肌维疏松，可看到一小部分完整的肌节，部分 Z 线清晰可见，局部 M 线清晰，自然恢组（D 图）肌节宽度大小不等，肌纤维明显疏松，可见部分 Z 线，能找到大量线粒体
图 6 各组实验兔颈部骨骼肌免疫组织化学 Desmin 表达（200×）注：正常组（A1-A2），正常肌纤维；模型组（B1-B2）；理筋手法治疗 7d 肌纤维（C1-C2）；自然恢复 7d 肌纤（D1-D2）；理筋手法治疗 14d 肌纤维（E1-E2）；自然恢复 14d 肌纤维（F1-F2）理筋手法治疗 21d 肌纤维（G1-G自然恢复 21d 肌纤维（H1-H2）。5.2 骨骼肌α-Actin 表达的结果在光镜下观察α-Actin 免疫组织化学染色结果（图 7）：各组α-Actin 染色均以棕色为阳性表达，正常组（A1-A2）肌纤维染色较深均且分布均匀，肌纤维骨架完整，暗相间的横纹清晰可见，肌细胞形态完整，α-Actin 表达较强；模型组（B1-B2）肌纤明显扭曲、变形、肿胀，横纹消失，肌细胞染色变浅，α-Actin 染色表达较弱。损伤疗 7d，自然恢复组（D1-D2）组肌纤维变形，肌细胞染色不一，有空泡样淡染色区。筋手法组（C1-C2）肌纤维肿胀扭曲稍减，有一小部分可见横纹，结构的完整性优于
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本文编号：
2849809
