短管兔耳草化学成分及其对XOD的抑制活性研究

发布时间：2020-10-21 11:15

　　 传统降尿酸药用植物中XOD抑制剂的筛选已成为研究热点。短管兔耳草系玄参科兔耳草属植物Lagotis brevituba Maxim.的干燥全草,其应用历史悠久,是著名藏药“洪连”的基原植物,具有极高的药用价值,被《四部医典》列为藏草药之首。课题组前期研究发现藏药短管兔耳草提取物具有良好的降尿酸效果,通过抑制肝脏XOD活性是其降尿酸重要途径,且靶向捕集分析结果发现其中的XOD抑制剂具有多种化学成分类型。在此基础之上,本文进一步考察了短管兔耳草提取物不同部位的降尿酸活性及XOD的抑制作用,然后对短管兔耳草提取物活性部位大孔树脂60%乙醇洗脱部位化学成分进行分离纯化,并研究了所分离成分的XOD抑制活性,主要方法与结果如下:1、采用氧嗪酸钾诱导小鼠高尿酸血症模型,研究了藏药短管兔耳草不同极性部位的降尿酸活性与肝脏XOD抑制活性。结果显示总提物低、中、高剂量,30%乙醇部位中、高剂量,60%乙醇部位低、中、高剂量,90%乙醇部位中、高剂量均具有降尿酸活性,其中60%洗脱部位对XOD抑制活性较好。而总提物低、中、高剂量,30%乙醇部位低、中、高剂量,60%乙醇部位低、中、高剂量,90%乙醇部位低、中、高剂量均对肝脏XOD具有抑制活性。2、根据药效研究结果,运用大孔树脂、正相硅胶、凝胶、ODS、制备HPLC等柱色谱方法,结合NMR、MS等波谱技术,从短管兔耳草60%乙醇提取物中分离鉴定了23个化合物,其中有:3个黄酮类化合物:木犀草素(4),柯伊利素-7-O-β-D-葡萄糖苷(5),香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷(6)。9个苯丙素类化合物:兔耳草苷E(1)、阿魏酸甲酯(7),3,4-二甲氧基苯丙酸(8),6'-O-(4-甲氧基-(Z)-肉桂酰基)-α/β-D-吡喃葡萄糖苷(9),6-O-(3,4-二甲氧基-(Z)-肉桂酰基)-α/β-D-吡喃葡萄糖苷(10),兔耳草苷B(11),6-O-(Z)-肉桂酰基-α/β-D-吡喃葡萄糖苷(12),松脂酚-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(13),syringaresinol-4'-O-β-D-monoglucoside(14)。9个环烯醚萜类化合物:兔耳草苷F(2)、兔耳草苷G(3)、6-O-[α-L-(3-3,4-二甲氧基肉桂酰)-吡喃鼠李糖基]-梓醇(15),baldaccioside(16),globularin(17),10-O-(3,4-二甲氧基-(Z)-肉桂酰基)-梓醇(18),10-O-(3,4-二甲氧基-(E)-肉桂酰基)-梓醇(19),globularidin(20),10-O-对甲氧基-(Z)-肉桂酰基-梓醇(21)。2个简单酚酸类化合物:3,4-二甲氧基苯甲醛(22),邻苯二甲酸二丁酯(23)。上述化合物1、2、3为新化合物,7、8、9、10、12、13、15、16、20、23为兔耳草属首次发现。11、14、17、18、19、21、22为首次从短管兔耳草植物中分得。3、采用紫外分光光度法对分离得到的23个化合物的XOD抑制活性进行筛选。结果显示:化合物1,4,5,6,9,10,23均具有XOD抑制活性(抑制率:9.7%-86.77%),选取抑制率高于50%的化合物4和化合物9测定其IC_(50)值,其IC_(50)值分别为26.6μM和73.8μM。
【学位单位】：江西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R29
【部分图文】：

色谱甲醇、乙腈（美国 TEDIA 有限公司）；甲醇、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇均为分析纯（西陇化工股份有限公司）；1.3 药材短管兔耳草购于成都荷花池药材市场，经江西中医药大学钟国跃研究员鉴定为玄参科兔耳草属植物短管兔耳草（Lagotis brevituba Maxim.）的干燥全草。2. 提取分离短管兔耳草的干燥全草 10 kg，粉碎，渗漉，提取液减压浓缩得浸膏，加水混悬至无明显颗粒，石油醚萃取，水层减压浓缩得浸膏 (1455 g )，浸膏经过 HP20大孔树脂柱层析，经过纯水、30%乙醇、60%乙醇，90%乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩，分别得到水部位 462g、30%乙醇部位 488g、60%乙醇部位 153g、90%乙醇部位 52g。见图 5。

图 7 短管兔耳草 Fr.6.5 分离图Fig 7 The separation process of Fr.6.5 Parts of the L.brevituba Maxim.流分 Fr.5 经硅胶柱层析 ( 200-300 目，CH2Cl2: CH3OH=10 : 1-1 : 5 )，得到Fr.5.1～Fr.5.10，Fr.5.6 经 ODS 柱层析 ( C18，CH3OH : H2O= 20 : 80-100 : 0 )，得到 Fr.5.6.1，化合物 4 ( 43.4 mg )，Fr.5.6.3 和 Fr.5.6.4，Fr.5.6.3 经过 Sephadex LH-20柱层 ( CH2Cl2: CH3OH=1 : 1 )，得到 Fr.5.6.3.1～Fr.5.6.3.3，Fr.5.6.3.2 经半制备高效液 ( CH3OH : H2O=40 : 60 )，得到化合物 12 ( tR=25 min, 13.6 mg )。见图 8。

图 8 短管兔耳草 Fr.5 部位分离图Fig 8 The separation process of Fr.5 Parts of the L.brevituba Maxim.Fr.5.8 经 ODS 柱层析( C18，CH3OH : H2O= 20 : 80-100 : 0 )，得到 Fr.5.8.1～Fr.5.8.4，Fr.5.8.1 经 Sephadex LH-20 柱层析 ( CH2Cl2: CH3OH=1:1)，得到化合物23 ( 10.1 mg)，Fr.5.8.3 经过 Sephadex LH-20 柱层析 ( CH2Cl2: CH3OH=1 : 1 )，得到 Fr.5.8.3.1～Fr.5.8.3.4，Fr.5.8.3.1 经半制备高效液相 ( CH3OH : H2O =40 : 60 )，得到化合物 10 ( tR=22 min, 57.9 mg )，Fr.5.8.3.3 经过半制备高效液相 ( CH3OH :H2O=45 : 55 )，得到化合物 16 ( tR=30 min, 21.8 mg )，化合物 5 (tR=20 min, 61mg)，6 (tR=22 min, 46.9 mg )，9 (tR=30.5 min, 32.9 mg )。见图 9。
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本文编号：2850050