基于16S rDNA和~1H NMR技术探讨隔药饼灸对肠易激综合征大鼠肠道菌群和代谢物的影响

发布时间：2020-10-30 04:52

　　 目的:采用乙酸灌肠+捆绑束缚的方法制备腹泻型肠易激综合征大鼠模型,运用隔药饼灸对腹泻型肠易激综合征大鼠进行干预治疗,应用16S rDNA技术和核磁共振氢谱技术探讨隔药饼灸对腹泻型肠易激综合征大鼠的肠道菌群和代谢物的影响。方法:48只SPF级雄性SD大鼠,适应性喂养一周后,分为正常组(12只)和模型组(36只),模型组大鼠予以乙酸灌肠,7天后行束缚应激2周,验证模型后原模型组大鼠随机分为模型组、西药组和隔药饼灸组,每组12只。正常组不予以任何干预,模型组予以捆绑,不进行治疗;隔药饼灸组予以隔药饼灸治疗,西药组予以匹维溴铵片灌胃。治疗2周后,从Bristol粪便性状评分、粪便含水量和内脏敏感性评价等方面评价疗效,并用无菌EP管每只大鼠采集2颗粪便样本,进行代谢组学和肠道菌群检测。应用16S rDNA技术研究各组大鼠肠道菌群丰度和多样性的变化情况,以及观察在隔药饼灸干预后肠道菌群的恢复情况,通过LEfSe分析,找出干预后显著差异的菌群。应用核磁共振氢谱技术对各组大鼠的粪便样本进行代谢组学研究。核磁谱图采用MestReNova软件进行预处理并归一化,导入至SIMCA-P 14.1软件进行多维统计分析,通过PLS-DA模型中的VIP值结合t检验,筛选大鼠粪便样品中的特征代谢物。通过生物功能分析,寻找相关代谢通路。结果:1.模型组的粪便性状评分和粪便含水量均较正常组升高、AWR评分为3分时的注水量与正常组比较明显下降(P0.01),经过隔药饼灸的干预后均出现一定程度的回调。说明隔药饼灸对乙酸灌肠+束缚应激制备的IBS-D大鼠模型的腹泻和内脏高敏感性具有良性的调节作用。2.α多样性分析结果表明隔药饼灸对肠道菌群的多样性具有良性调节作用。ANOSIM相似性分析和β多样性分析表明模型组与正常组的肠道菌群存在明显的差异。LEfSe分析结果表明隔药饼灸可以调节Akkermansia muciniPhila、Prevotella、Bacteroidetes等的含量使其恢复正常。3.腹泻型肠易激综合征大鼠经过乙酸灌肠和捆绑束缚造模后,粪便样品的代谢物改变包括苏氨酸和尿苷二磷酸葡萄糖浓度增加以及亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、2-羟基丁酸、缬氨酸、乳酸、乙醇、精氨酸、2-氧代异戊酸和胆汁酸浓度降低,主要涉及精氨酸和脯氨酸代谢,丙酸盐代谢以及缬氨酸,亮氨酸和异亮氨酸降解三条主要代谢通路。而经过隔药饼灸的干预后,可以使IBS组大鼠紊乱的代谢状态一定程度上恢复至正常状态。结论:1.隔药饼灸对乙酸灌肠+束缚应激制备的IBS-D大鼠模型的腹泻症状和内脏高敏感性状态具有良性的调节作用。2.隔药饼灸对IBS-D肠道菌群多样性具有良性调节作用。隔药饼灸可以调节部分菌群,通过影响黏蛋白降解、肠道的屏障功能、炎症反应等起作用。3隔药饼灸干预可以使IBS-D大鼠表现的代谢紊乱部分恢复到正常状态,通过调节部分代谢物从而影响免疫应答、肠道屏障完整性、肠上皮细胞炎症、胆汁酸的重吸收等以改善IBS的症状。
【学位单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R245.8
【部分图文】：

2 结果与分析2.1 模型评价指标模型组大鼠粪便性状评分和粪便含水量均较正常组比较升高（P<0.01），说明模型组大鼠腹泻症状明显；而引起大鼠腹壁撤退反射评分为 3 分时的注水量较正常组比较明显下降（P<0.01），这与模型组大鼠内脏敏感性增高密切相关。见表 1-2 和图 1-1。表 1-2 大鼠粪便性状评分、粪便含水量和注水量比较分组 n 粪便性状评分 粪便含水量（%） 注水量（ml）正常组 12 4.20±1.03 45.80±1.98 2.84±0.34模型组 36 5.63±1.01** 49.90±2.30** 1.62±0.26**注：与正常组比较 P<0.01**

10图 1-2 大鼠粪便性状评分、粪便含水量和注水量比较注：与正常组比较 P<0.01**，与模型组比较 P<0.01＃＃.3 治疗后各种大鼠粪便的含水量与正常组比较，模型组粪便含水量明显增加（P<0.01），隔药饼灸组、西大鼠粪便含水量与模型组比较明显下降（P<0.01），见表 1-4 和图 1-3。

11图 1-3 大鼠粪便性状评分、粪便含水量和注水量比较注：与正常组比较 P<0.01**，与模型组比较 P<0.01＃＃疗后各种大鼠内脏敏感性的评分正常组比较，测量模型组大鼠 AWR 评分为 3 时（腹背部肌肉较强烈收缩部抬离地面）的注水量较低，这与模型组大鼠的内脏敏感性升高有关，而药饼灸和匹维溴铵的干预后，注水量上升，说明隔药饼灸和匹维溴铵对 大鼠内脏高敏感状态有较好的良性调整作用，见表 1-5 和图 1-4。
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本文编号：2862015