藏药如意珍宝丸介导PKA-CREB信号通路对偏头痛模型大鼠PACAP、PAC1的影响

发布时间：2020-11-13 17:40

　　目的研究藏药如意珍宝丸介导偏头痛模型大鼠下行痛觉调节通路中蛋白激酶A(Protein kinase A,PKA)-反应元件结合蛋白(CAMP response element-binding protein,CREB)变化来探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽(Pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)及受体PAC1的影响,以探究其干预偏头痛的有效机制。方法 SPF级SD雄性大鼠90只随机等分为6组:空白组、模型组、阳性药组(琥珀酸舒马普坦片; 9.72 mg/kg)、藏药如意珍宝丸组(预防组、治疗1组、治疗2组,500 mg/kg)。藏药如意珍宝丸(治疗1组、治疗2组)、空白组及模型组灌胃等体积蒸馏水,阳性药组、藏药如意珍宝丸预防组分别灌胃琥珀酸舒马普坦片、藏药如意珍宝丸进行药物干预,连续7 d;于末次给药1 h后,除空白组大鼠颈部皮下注射生理盐水外,其余各组同部位注射硝酸甘油(Nitroglycerin,NTG,10 mg/kg)以制备偏头痛模型,治疗1组造模1 h后灌胃藏药如意珍宝丸,各组均进行标本采集。而治疗2组需连续灌胃2 d藏药如意珍宝丸后再收集样本。酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorb-ent assay,ELISA)法检测血清中PACAP和PAC1的蛋白含量,应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)检测PACAP、AC、PAC1、CREB、PKA m RNA表达变化。结果与正常组比较,模型组大鼠血清PACAP、PAC1的蛋白表达显著升高(P 0.05)。与模型组比较,阳性药组PAC1蛋白表达明显降低(P 0.05),而PACAP含量仅呈下调趋势;藏药如意珍宝丸(预防组、治疗1组) PACAP蛋白水平差异性减少,且预防组PAC1蛋白表达显著下降(P 0.05,P 0.01)。与正常组比较,模型组大鼠中脑PACAP、AC、PAC1、CREB、PKA基因表达含量均明显上调(P 0.01),提示造模成功。与模型组比较,阳性药组、藏药如意珍宝丸(预防组、治疗1组、治疗2组) CREB、PKA基因表达变化均不同程度地下调,而PACAP、AC基因表达差异性降低见于藏药如意珍宝丸(预防组、治疗2组),PAK基因水平变化明显减少见于阳性药组、藏药如意珍宝丸预防组(P 0.05,P 0.01)。结论藏药如意珍宝丸可通过调节中脑内PKA-CREB信号通路以介导PACAP、PAC1含量变化来缓解偏头痛的发作。
【部分图文】：

血清,蛋白,藏药,基因表达

与正常组比较，模型组大鼠中脑PACAP、AC、PAC1、CREB、PKA基因表达含量均明显上调(P<0.01)，提示造模成功。与模型组比较，阳性药组、藏药如意珍宝丸(预防组、治疗1组、治疗2组)CREB、PKA基因表达变化均不同程度地显著性下调，而PACAP、AC基因表达差异性降低仅见于藏药如意珍宝丸(预防组、治疗2组)，PAK基因水平变化明显减少的仅见于阳性药组、藏药如意珍宝丸预防组(P<0.01,P<0.05)，故从基因层面而言，藏药如意珍宝丸可通过调节中脑中PKA-CREB信号通路以介导PACAP、PAC1含量变化来缓解偏头痛的发作。结果见图2。图2 各组大鼠中脑PACAP、AC、PAC1、CREB、PKA基因表达变化

中脑,基因表达,血清,蛋白