脊柱推拿对脑瘫幼鼠脑白质炎症的拮抗作用与机制研究

发布时间：2017-04-28 18:14

  本文关键词：脊柱推拿对脑瘫幼鼠脑白质炎症的拮抗作用与机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的观察脊柱推拿对脑瘫(Cerebral palsy,CP)幼鼠脑白质炎症细胞因子白介素6(IL-6)和白介素10(IL-10)的影响,为脊柱推拿重建脑瘫炎症稳态的分子机制提供前期研究基础。方法将108只3日龄SD幼鼠,随机分为3组:空白对照组(共40只)、模型对照组(共40只)和实验组(共28只),模型对照组和实验组采用左侧颈总动脉结扎联合缺氧3h的方法制备脑瘫模型,空白对照组不予处理,只正常喂养。造模后24h时,从空白对照组和模型对照组中各随机取出6只处死用于做TTC染色,再各随机取出6只处死用于做脑干湿重比检测;同日,实验组开始用脊柱推拿的方法进行早期干预,1次/日,15 min/次,空白对照组和模型对照组剩余幼鼠不予任何干预。三组维持相同的温度、适度生存环境及喂养方法,相同时间点检测并记录幼鼠的精神状态、毛发润泽程度及体重等一般情况。第4周(Postnatal 28days,P28)和第8周(P56)两个时间点,每组各随机取出7只处死,用HE染色观察脑白质的病理改变;每组剩余的7只用免疫荧光法检测脑白质区内IL-6和IL-10的蛋白表达水平。处死前1周进行平衡木实验(Beam Balance Test,BBT)以观察其运动平衡能力。结果1.实验组4周时的精神状态、反应等一般情况良好,与空白对照组相比无明显差异;与模型对照组相比,模型对照组幼鼠反应较迟钝、双眼不等大。实验组8周时毛发光泽油亮、精神状态良好、反应灵敏、发育正常,与空白对照组相比几乎无差异;而模型对照组幼鼠毛色暗淡,反应迟钝、发育迟缓、双眼不等大(睁眼后左侧眼裂变小)。每日体重增加量:空白对照组均较模型对照组显著增加(P0.05)。P13、P17、P19、P21、P23、P25,实验组4周时体重日变化量均较模型对照组显著增加(P0.05);P7、P11、P17、P19、P21、P23、P27、P29、P31、P33、P35、P37、P39、P41、P43、P45、P47、P53,实验组8周时体重日变化量均较模型对照组显著增加(P0.05)。说明脊柱推拿能加快促进脑瘫幼鼠的体重增长速度,且对推拿时间具有一定的依赖性,随着推拿次数的增加,体重增长速度越快。2.平衡木实验显示,实验组4周时,通过平衡木的时间和双后肢下滑的次数方面与8周时比较发现:通过平衡木的时间无显著差异(P0.05),但双后肢下滑的次数差异非常显著(P0.001);4周时,与空白对照组比较,各项指标均无显著差异(P0.05),与模型对照组比较,通过平衡木的时间显著缩短(P0.05)、双后肢下滑次数显著减少(P0.05);8周时,与空白对照组比较,各项指标均无显著差异(P0.05),与模型对照组比较,通过平衡木的时间显著缩短(P0.05)、双后肢下滑次数显著减少(P0.05)。说明脊柱推拿能促进脑瘫幼鼠的运动平衡能力的改善,且与推拿时间长短有关,推拿时间越长,改善效果越好。3.HE染色显示,实验组4周时,脑白质区内部分神经元细胞存在不同程度的水肿、坏死和核固缩现象。实验组8周时与4周时进行比较发现部分受损神经元细胞的水肿、坏死和核固缩现象均有明显改善。4周时发现,脑白质区内部分神经元细胞存在不同程度的水肿、坏死和核固缩现象,4周时与空白对照组比较,差异无统计学意义,与模型对照组比较,神经元细胞的水肿、坏死和核固缩现象相对较轻;8周时与空白对照组比较,几乎无异,与模型对照组比较,神经元细胞的水肿、坏死和核固缩现象相对较轻。说明脊柱推拿可促使脑白质区内神经元细胞的修复与再生,且推拿时间越长,恢复效果越明显。4.免疫荧光检测显示,实验组4周时脑白质内部分炎症细胞因子IL-6、IL-10的异常表达均发生了明显改善。实验组8周时与4周时比较发现IL-6、IL-10炎症因子蛋白水平表达的改善程度差异非常显著(P0.01)。4周时,与空白对照组比较,IL-6和IL-10蛋白表达均显著增高(P0.05),与模型对照组比较,IL-6蛋白表达显著降低(P0.05),IL-10蛋白表达显著增高(P0.05);8周时,与空白对照组比较,IL-6和IL-10蛋白表达均显著增高(P0.05),与模型对照组比较,IL-6蛋白表达显著降低(P0.05),IL-10蛋白表达显著增高(P0.05)。说明脊柱推拿可有效降低脑白质内IL-6的蛋白表达水平,同时提高IL-10的蛋白表达水平。说明通过推拿可有效参与调节炎症细胞因子IL-6和IL-10异常表达,通过脊柱推拿可以调节促炎因子IL-6与抗炎因子IL-10的蛋白水平表达,且其调节效果与推拿时间有关,推拿时间越长,效果越好。结论1.脊柱推拿能有效促进脑瘫幼鼠的各项生长发育指标,如体重、饮食、精神状态等。且与推拿时间长短有关,推拿时间越长,生长发育状况越好。2.脊柱推拿能有效促进脑瘫幼鼠运动平衡能力的提高,且与推拿时间长短有关,推拿时间越长,改善效果越好。3.脊柱推拿可改善脑白质区内神经元细胞的病理形态,降低脑白质促炎因子IL-6蛋白水平表达,增加抗炎因子IL-10的蛋白水平表达,重建炎症的相对稳态。这与文献报道中提及的血清中炎症因子表达的方式一致,提示脊柱推拿对脑白质的病理改变及脊柱推拿对CP幼鼠运动平衡能力的改善和炎症细胞因子的表达有关。4.脊柱推拿可通过降低脑白质内促炎因子IL-6、提高抗炎因子IL-10蛋白表达来重建脑瘫炎症稳态,进而促进运动及其它功能的全面康复,为进一步研究调控机制奠定前期基础。
【关键词】：脊柱推拿 脑瘫 炎症 脑白质 IL-6 IL-10
【学位授予单位】：云南中医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R244.1
【目录】：

• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 中英文缩写对照表13-14
• 引言14-16
• 1.材料16-17
• 2.方法17-21
• 2.1 实验分组17
• 2.2 各组动物处理方法17-18
• 2.3 检测方法18-21
• 2.3.1 脑组织TTC染色法18-19
• 2.3.2 脑干湿重检测法19
• 2.3.3 平衡木实验19-20
• 2.3.4 HE染色法20
• 2.3.5 免疫荧光检测法20-21
• 2.3.6 统计学分析21
• 3.结果21-32
• 3.1各组生长发育情况比较21
• 3.2 各组幼鼠日体重变化比较21-24
• 3.3 脑组织TTC染色结果比较24
• 3.4 脑组织干湿重比结果比较24-25
• 3.5 各组幼鼠平衡木实验检测结果比较25-27
• 3.6 各组幼鼠脑白质HE染色结果比较27-28
• 3.7 各组幼鼠脑白质免疫荧光检测IL-6 蛋白表达结果比较28-29
• 3.8 各组幼鼠脑白质免疫荧光检测IL-10蛋白表达结果比较29-32
• 讨论32-38
• 结论38-39
• 问题与展望39-40
• 参考文献40-44
• 本课题国内外目前研究状况(文献综述)44-51
• 参考文献48-51
• 发表文章51-52
• 附件52-57
• 致谢57

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本文编号：333322