藏族药灰兜巴下调Nox4表达减轻糖尿病肾病大鼠肾脏氧化应激损伤
发布时间：2021-12-18 04:29
目的:从减轻糖尿病肾病（DN）大鼠肾脏氧化应激损伤角度探讨藏族药灰兜巴的肾脏保护作用,为其治疗DN提供科学依据。方法:本实验采取高脂饮食喂养加腹腔注射链脲佐菌素（STZ）65 mg·kg-1法诱导DN大鼠模型,空白组注射等体积溶媒并饲以大鼠维持饲料。将造模成功DN大鼠随机分为DN模型组(10 mL·kg-1·d-1),二甲双胍组(0.045 g·kg-1·d-1),灰兜巴组(0.18 g·kg-1·d-1),每组8只,分别以溶媒或相应药物灌胃给药干预6周。动态监测各组大鼠体质量、血糖变化,并于药物干预前后收集24 h尿液,检测24 h尿微量白蛋白（mAlb）;实验取材后,计算肾脏质量指数（KI）;并利用全自动生化分析仪检测大鼠血肌酐（SCr）和血尿素氮（BUN）水平;马松（Masson）染色观察肾组织病理学改变;脂质氧化丙二醛（MDA）测定试剂盒检测肾组织MDA含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）和免疫荧光法检测肾组织烟酰...
【文章来源】：中国实验方剂学杂志. 2020,26(18)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
灰兜巴对DN大鼠肾小球病理结构的影响（Masson，×400)
BROSIUS等[15]发现饮食可对DN产生影响，本实验采用高脂饮食喂养预造模大鼠，饮食干预6周后，其体质量明显高于正常维持饲料喂养的空白组。又有研究发现，非基因源糖尿病肾病大鼠模型经常出现不同程度的STZ诱导的β细胞衰竭[16]，美国国立卫生研究所组建的糖尿病并发症动物模型工作组推荐使用低剂量STZ诱导DN模型，但课题组前期预实验发现，低剂量STZ(35 mg·kg-1）诱导DN成模率较低。因此本课题组采用高剂量STZ(65 mg·kg-1）诱导DN大鼠模型。但实验中发现，注射高剂量STZ后3周，大鼠体质量迅速下降，且少动，不排除存在明显β细胞急性损害的可能性。在DN进展为终末期肾病（ESRD）的过程，足细胞损伤所引起的蛋白尿和肾小球滤过率（GFR）下降是2个重要的临床表现[17]。血尿生化检测结果表明灰兜巴可明显降低DN大鼠24 h mAlb和SCr,BUN水平。DN高糖氧化应激环境加重肾间质纤维化，其典型的病理特征即肾小球基底膜（GBM）增厚，细胞外基质（ECM）积聚增加致系膜区扩张[18-19]，而减轻足细胞损伤降低蛋白尿是抑制ECM积聚的有效途径[20]，肾脏组织Masson染色结果显示，灰兜巴可明显减轻肾小球ECM积聚和肾小球系膜增生，降低DN大鼠蛋白尿，发挥肾脏保护作用。图3 肾脏组织Nox4蛋白表达电泳
图2 灰兜巴对DN大鼠肾组织Nox4免疫荧光表达的影响（免疫荧光，×400)多项研究表明，DM持续高糖环境可诱发细胞氧化应激，使细胞内产生过多活性氧（ROS）加速细胞凋亡[21-23]。MDA作为脂质过氧化主要产物之一，已成为机体发生氧化应激的公认评价指标之一，实验研究结果表明灰兜巴可明显减轻DN大鼠体内氧化应激状态，降低肾组织MDA含量。NADPH氧化酶（Nox）是不同细胞中氧化应激的主要诱导者，Nox家族有7个亚型，Nox1-Nox5和Duox1,Duox2，其中Nox1,Nox2和Nox4主要表达于肾皮质[24-25]，而肾组织中表达最丰富的的就是Nox4[26]。有研究报道，在培养的足细胞和糖尿病鼠模型中，葡萄糖刺激均可激活Nox4诱导细胞凋亡[27-29]。为从源头挖掘足细胞损伤致蛋白尿的始动因素，课题组通过Western blot和免疫荧光检测了DN大鼠肾脏Nox4表达，发现DN模型组Nox4蛋白水平显著上升。灰兜巴可明显下调Nox4蛋白表达水平，减轻DN大鼠肾脏氧化应激损伤，从而起到DN肾脏保护作用。
【参考文献】：
期刊论文
[1]淫羊藿苷对糖尿病肾病大鼠肾功能的保护作用及相关机制[J]. 赵锦,陈玮,魏杰,朱雯. 免疫学杂志. 2020(01)
[2]白藜芦醇对糖尿病肾病大鼠Wnt/β-catenin和TGF-β1-Smad2/3信号通路的影响[J]. 肖伟伟,奚悦. 中成药. 2019(12)
[3]藏药灰兜巴对STZ诱导的Ⅱ型糖尿病肾病小鼠的肾脏保护作用[J]. 周园里,贾晓斌,刘继平,封亮. 中成药. 2018(03)
[4]藏药灰兜巴治疗糖尿病的研究进展[J]. 杨坤宝,庞宗然. 中草药. 2017(08)
[5]ACE2内源性激动剂DIZE对糖尿病肾病大鼠的保护作用[J]. 王园园,曹新冉,杨旻,王晓琼,于奎鹏,董波,傅余芹. 中国病理生理杂志. 2017(03)
[6]益气养阴、活血通络法治疗早期糖尿病肾病的临床研究[J]. 张婷,高彦彬. 世界中医药. 2015(10)
[7]灰兜巴蛋白超声提取及其对α-葡萄糖苷酶的抑制[J]. 许伟,李锦,邵荣,颜秀花,韦萍. 食品工业科技. 2015(14)
[8]高效液相色谱法测定灰兜巴对α-葡萄糖苷酶的抑制作用[J]. 孙彦敏,彭亮,李知敏. 天然产物研究与开发. 2014(10)
[9]灰兜巴活性成分治疗Ⅱ型糖尿病效果研究[J]. 伍艳,王小楠,陈烽烽,陈又南,田淑琴. 中药材. 2013(08)
[10]灰兜巴提取物对四氧嘧啶诱发糖尿病模型小白鼠降血糖的探索[J]. 成英,宋九华,杨孝容,刘素君. 时珍国医国药. 2013(04)
博士论文
[1]PPARs筛选模型的构建及抗糖尿病天然药物活性成分的筛选[D]. 林叶新.重庆大学 2013
本文编号：3541632
【文章来源】：中国实验方剂学杂志. 2020,26(18)北大核心CSCD
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
灰兜巴对DN大鼠肾小球病理结构的影响（Masson，×400)
BROSIUS等[15]发现饮食可对DN产生影响，本实验采用高脂饮食喂养预造模大鼠，饮食干预6周后，其体质量明显高于正常维持饲料喂养的空白组。又有研究发现，非基因源糖尿病肾病大鼠模型经常出现不同程度的STZ诱导的β细胞衰竭[16]，美国国立卫生研究所组建的糖尿病并发症动物模型工作组推荐使用低剂量STZ诱导DN模型，但课题组前期预实验发现，低剂量STZ(35 mg·kg-1）诱导DN成模率较低。因此本课题组采用高剂量STZ(65 mg·kg-1）诱导DN大鼠模型。但实验中发现，注射高剂量STZ后3周，大鼠体质量迅速下降，且少动，不排除存在明显β细胞急性损害的可能性。在DN进展为终末期肾病（ESRD）的过程，足细胞损伤所引起的蛋白尿和肾小球滤过率（GFR）下降是2个重要的临床表现[17]。血尿生化检测结果表明灰兜巴可明显降低DN大鼠24 h mAlb和SCr,BUN水平。DN高糖氧化应激环境加重肾间质纤维化，其典型的病理特征即肾小球基底膜（GBM）增厚，细胞外基质（ECM）积聚增加致系膜区扩张[18-19]，而减轻足细胞损伤降低蛋白尿是抑制ECM积聚的有效途径[20]，肾脏组织Masson染色结果显示，灰兜巴可明显减轻肾小球ECM积聚和肾小球系膜增生，降低DN大鼠蛋白尿，发挥肾脏保护作用。图3 肾脏组织Nox4蛋白表达电泳
图2 灰兜巴对DN大鼠肾组织Nox4免疫荧光表达的影响（免疫荧光，×400)多项研究表明，DM持续高糖环境可诱发细胞氧化应激，使细胞内产生过多活性氧（ROS）加速细胞凋亡[21-23]。MDA作为脂质过氧化主要产物之一，已成为机体发生氧化应激的公认评价指标之一，实验研究结果表明灰兜巴可明显减轻DN大鼠体内氧化应激状态，降低肾组织MDA含量。NADPH氧化酶（Nox）是不同细胞中氧化应激的主要诱导者，Nox家族有7个亚型，Nox1-Nox5和Duox1,Duox2，其中Nox1,Nox2和Nox4主要表达于肾皮质[24-25]，而肾组织中表达最丰富的的就是Nox4[26]。有研究报道，在培养的足细胞和糖尿病鼠模型中，葡萄糖刺激均可激活Nox4诱导细胞凋亡[27-29]。为从源头挖掘足细胞损伤致蛋白尿的始动因素，课题组通过Western blot和免疫荧光检测了DN大鼠肾脏Nox4表达，发现DN模型组Nox4蛋白水平显著上升。灰兜巴可明显下调Nox4蛋白表达水平，减轻DN大鼠肾脏氧化应激损伤，从而起到DN肾脏保护作用。
【参考文献】：
期刊论文
[1]淫羊藿苷对糖尿病肾病大鼠肾功能的保护作用及相关机制[J]. 赵锦,陈玮,魏杰,朱雯. 免疫学杂志. 2020(01)
[2]白藜芦醇对糖尿病肾病大鼠Wnt/β-catenin和TGF-β1-Smad2/3信号通路的影响[J]. 肖伟伟,奚悦. 中成药. 2019(12)
[3]藏药灰兜巴对STZ诱导的Ⅱ型糖尿病肾病小鼠的肾脏保护作用[J]. 周园里,贾晓斌,刘继平,封亮. 中成药. 2018(03)
[4]藏药灰兜巴治疗糖尿病的研究进展[J]. 杨坤宝,庞宗然. 中草药. 2017(08)
[5]ACE2内源性激动剂DIZE对糖尿病肾病大鼠的保护作用[J]. 王园园,曹新冉,杨旻,王晓琼,于奎鹏,董波,傅余芹. 中国病理生理杂志. 2017(03)
[6]益气养阴、活血通络法治疗早期糖尿病肾病的临床研究[J]. 张婷,高彦彬. 世界中医药. 2015(10)
[7]灰兜巴蛋白超声提取及其对α-葡萄糖苷酶的抑制[J]. 许伟,李锦,邵荣,颜秀花,韦萍. 食品工业科技. 2015(14)
[8]高效液相色谱法测定灰兜巴对α-葡萄糖苷酶的抑制作用[J]. 孙彦敏,彭亮,李知敏. 天然产物研究与开发. 2014(10)
[9]灰兜巴活性成分治疗Ⅱ型糖尿病效果研究[J]. 伍艳,王小楠,陈烽烽,陈又南,田淑琴. 中药材. 2013(08)
[10]灰兜巴提取物对四氧嘧啶诱发糖尿病模型小白鼠降血糖的探索[J]. 成英,宋九华,杨孝容,刘素君. 时珍国医国药. 2013(04)
博士论文
[1]PPARs筛选模型的构建及抗糖尿病天然药物活性成分的筛选[D]. 林叶新.重庆大学 2013
本文编号：3541632
本文链接：https://www.wllwen.com/zhongyixuelunwen/3541632.html
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