运脾化浊法对血脂异常大鼠microRNA及其靶基因表达的影响

发布时间：2017-05-17 01:06

  本文关键词：运脾化浊法对血脂异常大鼠microRNA及其靶基因表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的基于血脂异常大鼠动物模型,以化浊调脂方进行干预,利用生物信息学方法探讨运脾化浊法对血脂异常大鼠microRNA及其靶基因表达的影响。方法1.将84只雄性Wistar大鼠按体重随机分为正常组(n=10)与高脂组(n=74),正常组大鼠给予普通饲料喂养,高脂组大鼠给予高脂饲料喂养,4周后测量血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C含量。建立血脂异常大鼠模型后,以不同剂量化浊调脂1号方、化浊调脂2号方干预8周,普伐他汀钠片、血脂康胶囊作为阳性对照药。2.提取大鼠肝脏组织miRNAs，Fold-change筛选两个样品间(没有重复)的差异表达miRNAs(上调时Fold-change≥2.0,下调时Fold-change≤0.5)。利用生物信息学数据库检测差异表达的miRNAs,筛选出与脂质代谢关系密切的miRNAs,并预测得到相关靶基因。3.实时荧光定量PCR法检测miRNAs的表达。结果l.miRNA表达谱使用GenePix Pro 6.0提取芯片扫描图像上的探针表达信息,经筛选共得到700个miRNA信息。2.差异表达的miRNAs①高脂模型组大鼠肝脏差异表达的miRNAs:与普通组相比,血脂异常可以改变大鼠肝脏miRNA表达谱,其中10个miRNA上调,42个miRNA下调。上调最明显的是mo-miR-342-5p,下调最明显的是rno-miR-10a-3p。②普伐他汀钠片对miRNA表达的影响：与高脂模型组相比,普伐他汀钠片可以影响大鼠肝脏组织miRNA的表达,使71个miRNA上调,35个miRNA下调。其中上调最明显的是rno-miR-10a-3p,与脂代谢密切相关的miRNA,如rno-miR-214-5p表达同样上调。下调最明显的是rno-miR-9a-5p,rno-miR-155-5p,rno-miR-148b-3p亦有明显下调。③血脂康胶囊对miRNA表达的影响：与高脂模型组相比,血脂康胶囊可以影响大鼠肝脏组织miRNA的表达,使93个miRNA上调,76个miRNA下调。其中上调最明显的是rno-miR-10a-3p,与脂代谢密切相关的miRNA,如rno-miR-214-5p,表达同样明显上调。下调最明显的是rno-miR-184, rno-miR-155-5p、rno-miR-122-5p等也出现明显的表达下调。④化浊调脂1号方对miRNA表达的影响：化浊调脂1号方可改变大鼠肝脏组织的miRNA表达谱,与高脂模型组相比,使53个miRNA上调,24个miRNA下调。上调最明显的是rno-miR-10a-3p,rno-miR-214-5p、rno-miR-30b-5p也有明显的上调。下调最明显的是rno-miR-7a-1-3p,rno-miR-122-5p表达亦有明显下调。与普伐他汀组相比,使42个miRNA上调,69个miRNA下调。上调最明显的是rno-miR-9a-5p,no-miR-27b-3p、 rno-miR-148b-3p、rno-miR-30b-5p等亦出现明显表达上调。下调最明显的是mo-miR-471-3p,rno-miR-122-5p也有明显表达下调。与血脂康组相比,使82个miRNA上调,159个miRNA下调。上调最明显的是rno-miR-880-3p,rno-miR-148b-3p、 rno-miR-155-5p、rno-miR-30b-5p同样明显上调。下调最明显的是rno-miR-193a-5p, rno-miR-33-3p亦出现明显下调。⑤化浊调脂2号方对miRNA表达的影响：化浊调脂2号方可以改变大鼠肝脏组织的miRNA表达谱。与高脂模型组相比,运脾化浊2号方使99个miRNA上调,63个miRNA下调。上调最明显的是rao-miR-10a-3p,rno-miR-214-5p、rno-miR-30b-5p同样明显上调。下调最明显的是rno-miR-184,而miR-155-5p也出现明显下调。与普伐他汀组相比,运脾化浊2号方使50个miRNA上调,29个miRNA下调。上调最明显的是rno-miR-122-3p,rno-miR-30b-5p表达同样明显上调。下调最明显的是rno-miR-1b,而rno-miR-155-5p表达也出现明显下调。与血脂康组相比,运脾化浊2号方使54个rniRNA上调,45个miRNA下调。上调最明显的是mo-miR-144-3p,rno-miR-30b-5p表达同样明显上调。下调最明显的是mo-miR-193a-5p，，rno-miR-155-5p表达也明显下调。3.miRNA靶基因预测①化浊调脂1号方组：将筛选出的差异表达较显著的miRNAs:rno-miR-411-3 p、 rno-miR-329-3p、rno-miR-877、mo-miR-345-5p、rno-miR-30b-5p、rno-miR-20b-5p、 mo-miR-122-5p、mo-miR-214-5p等在数据库进行预测,共检测到miRNA相关的777个靶基因。②化浊调脂2号方组：将筛选出的差异表达较显著的miRNAs:rno-miR-10a-3p、 rno-miR-147、rno-miR-142-3p、rno-miR-300-5p、rno-miR-125b-5p、mo-miR-324-3p、 rno-miR-199a-3p、mo-miR-340-5p、rno-miR-17-5p、mo-miR-339-5p、mo-miR-148b-3p、 rno-miR-184等在数据库进行预测,共检测到miRNA相关的1109个靶基因。③综合预测结果,进行GO/KEGG分析,筛选出PPARD、ABCG1及LDLR等3个与脂代谢密切相关的靶基因。4.PCR验证结果①rno-miR-155-5p:与高脂组比较,各给药组表达下调,差异无统计学意义(P0.05) ；② rno-miR-10a-3p:与高脂组比较,各给药组表达下调,差异无统计学意义(P0.05)；③ rno-miR-214-5p:与高脂组比较,各给药组表达下调,P=0.013,差异具有统计学意义。其中,与高脂组比较,化浊调脂1号方组、2号方组表达明显下调,差异有统计学意义(P=0.008,0.014)；④ rno-miR-148b-3p:与高脂组比较,各给药组表达下调,差异无统计学意义(P0.05) ；⑤ rno-miR-33-3p:与高脂组比较,各给药组表达下调,差异无统计学意义(P0.05)；但与高脂组比较,化浊调脂2号方组表达明显下调,P=0.028,差异具有统计学意义；⑥ rno-miR-33-5p:与高脂组比较,各给药组表达下调,差异无统计学意义(P0.05)；⑦no-miR-122-5p:与高脂组比较,各给药组表达下调,P=0.048,差异具有统计学意义；其中,运脾化浊1号方组与2号方组表达明显下调,差异有统计学意义(P=0.039,0.006)；⑧ rno-miR-30b-5p:与高脂组比较,各给药组表达上调,差异无统计学意义(P0.05) 。结论：1.血脂异常可以影响大鼠肝脏组织多种microRNA的表达；2.运脾化浊法可以干预血脂异常大鼠肝脏组织多种microRNA的表达；3.运脾化浊法对脂代谢的调节作用可能是通过抑制mo-miR-122-5p、rno-miR-33-3p的表达而实现的。
【关键词】：动物实验研究 miRANs调控网络 血脂异常 运脾化浊法
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R259
【目录】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 符号说明12-13
• 第一部分 文献综述13-29
• 综述一 中医复方治疗血脂异常研究进展及思考13-22
• 1. 血脂异常中医病因病机13-14
• 2. 中药复方治疗血脂异常临床研究14-16
• 2.1 经典名方治疗血脂异常临床研究14-15
• 2.2 自拟经验方治疗血脂异常临床研究15-16
• 3. 中医复方治疗血脂异常动物实验研究16-17
• 4. 思考17-19
• 参考文献19-22
• 综述二 血脂异常中成药配伍规律研究22-29
• 1. 材料与方法22-23
• 1.1 纳入标准22
• 1.2 排除标准22
• 1.3 数据录入及统计分析22
• 1.4 一般资料22-23
• 2. 结果23-25
• 2.1 血脂异常中成药主治证候分布情况23
• 2.2 血脂异常中成药常见药物分析23-24
• 2.3 血脂异常中成药药对配伍规律分析24
• 2.4 血脂异常中成药角药配伍规律分析24-25
• 2.5 基于聚类分析的血脂异常中成药配伍规律研究25
• 3. 讨论25-28
• 参考文献28-29
• 前言29-30
• 第二部分 实验研究30-88
• 一 实验材料30-32
• 1. 实验动物30
• 2. 动物饲料30
• 3. 实验药物30
• 4. 实验仪器与试剂30-32
• 二 实验方法32-39
• 1. 血脂异常大鼠模型构建32
• 2. 药物干预32-33
• 3. 实验过程观察33
• 4. 标本取材、检测指标及检测方法33-37
• 5. 统计方法37-39
• 三 实验结果39-83
• 1. miRNA表达谱39
• 2. 差异表达的miRNAs39-69
• 3. 差异表达的miRNA靶基因预测结果69-72
• 4. PCR验证结果72-83
• 四 讨论83-88
• 结语88-89
• 1. 结论88
• 2. 创新点88
• 3. 存在问题与不足88-89
• 参考文献89-93
• 致谢93-94
• 在学期间主要研究成果94

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本文编号：372247