通过对HK-2细胞的EMT机制探讨化瘀降浊汤对梗阻性肾病研究

发布时间：2017-05-29 10:01

  本文关键词：通过对HK-2细胞的EMT机制探讨化瘀降浊汤对梗阻性肾病研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的：1、采用分子生物学的技术,研究化瘀降浊汤对肾小管上皮细胞(HK-2) EMT相关形态、分子标记、浸润能力及TGF-β/Smad信号通路活性的影响。2、揭示化瘀降浊汤抑制HK-2细胞EMT和抗肾小管纤维化的分子机制。研究意义：1、证实化瘀降浊汤通过抑制TGF-β/Smad信号通路逆转HK-2细胞EMT,具有抗肾小管纤维化作用。2、深入探讨化瘀降浊汤的治疗梗阻性肾病的生物学特征,为中医药治疗梗阻性肾病提供可借鉴的治疗方法。研究方法：1、化瘀降浊汤对TGF-β诱导的HK-2细胞形态学的研究：显微镜下直接观察细胞外观,判断化瘀降浊汤对HK-2细胞形态影响。2、化瘀降浊汤对TGF-β诱导的HK-2细胞浸润能力的研究：将不同浓度的化瘀降浊汤处理的肾小管上皮细胞在Matrigel transwell小室中培养后,通过穿透Matrigel的细胞数量,比较各组间浸润能力的差异。3、化瘀降浊汤对TGF-β诱导的HK-2细胞EMT特征性分子标记的影响：用不同浓度化瘀降浊汤处理诱导后HK-2细胞,通过RT-PCR检测HK-2细胞E-cadherin mRNA. Snail mRNA、a-SMA mRNA、FSP-1 mRNA表达：通过Western blot检测E-cadherin、 Snail、a-SMA、FSP-1等蛋白的表达。4、化瘀降浊汤通过抑制TGF-β/Smad信号通路逆转HK-2细胞EMT的体外研究：通过RT-PCR检测HK-2细胞α-SMAmRNA、Snail mRNA、E-cadherin mRNA、Smad2 mRNA、Smad3 mRNA、Smad7 mRNA表达；通过Western blot检测E-cadherin. Smad2、 Smad7、α-SMA、Smad3、Snail等蛋白的表达。研究结果：1、化瘀降浊汤能够抑制TGF-β诱导的HK-2细胞增殖,并随着浓度增加,抑制率增加,根据统计结果,运用MTT比色法得出IC50为472.017 μg/ml,为便于计算取500 u g/ml。低剂量取取1/2倍值250μg/ml,高剂量取2倍值1000 μ g/ml。2、Transwell迁移实验结果显示：诱导组(255.89±15.726)与正常组(25.72+5.976)比较,具有显著的统计学意义(P0.01),说明HK-2细胞发生EMT的模型成功：高剂量(155.39±20.201)与诱导组(255.89±15.726)比较,具有显著的统计学意义(P0.01)。3、RT-PCR结果显示：对于FSP-1 mRNA、α-SMA mRNA、E-cadherin mRNA、Snail mRNA表达,高剂量组与诱导组比较时,有显著性统计学意义(P0.01); Western Blot结果显示：对于FSP-1、α-SMA、E-cadherin、Snail蛋白的表达,高剂量组与诱导组比较时,有显著性统计学意义(P0.01)。4、通过多因素方差分析,RT-PCR结果显示：α-SMA mRNA、Snail mRNA、E-cadherin mRNA、Smad2 mRNA、Smad3 mRNA、Smad7 mRNA的表达,在48h时,高剂量组较诱导组比较时,两者有显著性统计学意义(P0.01)；Western Blot结果显示：α-SMA、Snail、E-cadherin、Smad2、Smad3、Smad7蛋白的表达,在48h时,高剂量组组较诱导组比较时,两者有显著性统计学意义(P0.01)。结论及意义：TGF-β能够诱导的HK-2细胞发生EMT,化瘀降浊汤能够在抑制TGF-β诱导HK-2发生EMT后的细胞增殖,呈现出一定的量效关系；Transwell实验结果显示化瘀降浊汤能够抑制TGF-β诱导的HK-2细胞浸润能力；化瘀降浊汤能够抑制TGF-β诱导的HK-2细胞发生EMT后α-SMA、Snail、FSP-1蛋白的表达,增加E-cadherin蛋白的表达；化瘀降浊汤能增加TGF-β诱导的HK-2细胞TGF-β/Smad信号通路中E-cadherin、 Smad2、Smad7蛋白及基因表达,减少α-SMA、Smad3、Snail蛋白以及基因表达,随着时间改变有差异。表明化瘀降浊汤可能是通过调节HK-2细胞中的由TGF-β/Smad信号介导的EMT达到抑制甚至逆转肾小管上皮细胞转分化。因此化瘀降浊汤保护肾功能的机制可能是通过调控上述途径实现。
【关键词】：梗阻性肾病 化瘀降浊汤 上皮间质转分化 TGF-β/Smad信号通路
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R277.5
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 英文缩略语9-11
• 综述：中西医对梗阻性肾病所致EMT机制的研究回顾11-19
• 1. EMT是肾间质纤维化的重要机制11-12
• 2. TGF-β/Smad信号通路与EMT12-14
• 3. 中医药治疗梗阻性肾病的优势14-16
• 4. 结论16-17
• 参考文献17-19
• 前言19-20
• 实验一 化瘀降浊汤对TGF-β诱导HK-2细胞细胞增殖的影响20-27
• 1.1 实验材料20-21
• 1.2 实验方法21-25
• 1.3 实验结果25-26
• 1.4 讨论26
• 1.5 结论26-27
• 实验二 tanswell侵袭实验测定化瘀降浊汤对TGF-β1诱导的HK-2细胞的浸润影响27-31
• 2.1 实验材料27
• 2.2 实验方法27-28
• 2.3 统计分析28-29
• 2.4 实验结果29-30
• 2.5 讨论30
• 2.6 结论30-31
• 实验三 化瘀降浊汤体外对肾小管上皮细胞EMT调节作用的研究31-44
• 3.1 实验材料31-33
• 3.2 实验步骤33-39
• 3.3 统计方法39-40
• 3.4 结果40-42
• 3.5 讨论42-43
• 3.6 结论43-44
• 实验四 化瘀降浊汤体外调控TGF-β/Smad信号通路的研究44-53
• 4.1 实验材料44
• 4.2 实验步骤44
• 4.3 统计方法44-45
• 4.4 结果45-51
• 4.5 讨论51-53
• 结语53-54
• 参考文献54-56
• 致谢56-57
• 个人简历57

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 燕小霞;化瘀降浊法治疗慢性肾衰的疗效观察[J];河北中医;1996年03期

2 汪艳玫,马新娟;益肾化瘀降浊汤治疗老年性痴呆21例临床观察[J];现代中西医结合杂志;2001年03期

3 左恒;化瘀降浊法治疗男性自身免疫性不育症56例[J];安徽中医临床杂志;2003年02期

4 高菁,刘玉芹,任可,王秀琴;益肾化瘀降浊法治疗慢性肾功能不全86例[J];中国中医药信息杂志;2002年04期

5 邢鸿林;侯丽;张秋平;韦秀珍;;补虚化瘀降浊法治疗慢性肾功能不全60例临床观察[J];中医药信息;2006年01期

6 张文军;;健脾益气化瘀降浊法治疗慢性肾衰竭35例观察[J];实用中医药杂志;2010年04期

7 杨寒;健脾益肾化瘀降浊法治疗尿石症32例总结[J];湖南中医杂志;1998年03期

8 樊平;许文平;;补肾化瘀降浊汤化裁治疗慢性肾衰竭氮质血症期58例[J];陕西中医学院学报;2009年05期

9 耿建国,刘玉宁,李培旭;温阳化瘀降浊法治疗慢性肾功能衰竭的临床研究[J];浙江中医杂志;2003年12期

10 雷烨;;化瘀降浊方治疗2型糖尿病伴动脉粥样硬化62例[J];陕西中医学院学报;2011年05期

中国硕士学位论文全文数据库 前3条

1 吕济源;通过对HK-2细胞的EMT机制探讨化瘀降浊汤对梗阻性肾病研究[D];北京中医药大学;2016年

2 于瑞波;健脾益肾、化瘀降浊法治疗肾性贫血铁缺乏的临床研究[D];黑龙江中医药大学;2010年

3 冯涛;健脾益肾化瘀降浊颗粒联合缬沙坦治疗CKD2、3期—脾肾气虚、湿浊瘀阻证的临床研究[D];南方医科大学;2012年

  本文关键词：通过对HK-2细胞的EMT机制探讨化瘀降浊汤对梗阻性肾病研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：404621