巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠骨质疏松症的作用及机理探讨(PDF).pdf

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1.2药物………………………………………………………………………………………….29 1.3主要试剂…………………………………………………………………………………29 1.4主要仪器…………………………………………………………………………………29 2方法………………………………………………………………………………………………………………………30 2.1分组及处理………………………………………………………………………………30 2.2指标的检测方法…………………………………………………………………………30 2.3统计学分析………………………………………………………………………………34结果……………………………………………………………………………………………………………………..35 1巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠胫骨骨组织形态计量学指标的影响………..35 1.1巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠胫骨TBV%的影响…………………………35 1.2巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠胫骨TRS%的影响…………………………36 1.3巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠胫骨TFS%和MAR的影响……………….37 1.4巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠胫骨mAR和OSW的影响……………….38 2巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠胫骨OB和MSC OPG和RANKL蛋白表达的影响…………………………………………………………………………………………………………………………40 2.1巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠胫骨OB和MSC OPG蛋白表达的影响…40 2.2巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠胫骨OB和MSC RANKL蛋白表达的影响41 3巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠外周血清中IL.1、IL.6含量的影响………..43讨论……………………………………………………………………………………………………………………..45 1中医机理的探讨…………………………………………………………………………一45 2巴戟天、葫芦巴和补骨脂对破骨细胞分化调控因子OPG、RANKL的调节作用………47 3巴戟天、葫芦巴和补骨脂对外周血清中IL一1、IL一6的调节作用……………………48参考文献……………………………………………………………………………………..49结论……………………………………………………………………………………………………………………..51致谢………………………………………………………………………………………..53个人简历……………………………………………………………………………………..55巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠骨质疏松症的作用及机理探讨摘要目的采用骨组织形态计量学的方法,观察具有温补肾阳作用的单味中药.巴戟天、葫芦巴和补骨脂,对去卵巢所致大鼠骨质疏松症的作用,以筛选出对其具有预防作用的药物;并从破骨细胞分化调控因子OPG/RANKL和对骨代谢具有重要调节作用的IL.1、IL.6的角度,初步阐明其作用机理,进一步为中医药治疗骨质疏松症提供实验依据。方法选用雌性Wistar大鼠83只,随机分为3组:空白对照组12只,假手术组12只,造模组59只。在术后1个月,将造模组大鼠随机分为5组,即模型组、阳性对照组、巴戟天组和葫芦巴组,每组各12只,补骨脂组11只。然后,开始灌胃给药:各中药组给予浓度为19生药/ml的水煎剂,给药体积为5.6ml/kg体重,即给药剂量均为5.69生药/kg体重;阳性对照组给予0.008mg/ml的己烯雌酚,给药体积为5.6ml/kg体重。以上给药1天1次,连续6天,休息1天后,如此给药3个月。空白对照组、假手术组、模型组按同法灌服等体积的蒸馏水。各组大鼠于处死前15天和前3天分别腹腔注射盐酸四环素30mg/kg体重,对骨进行荧光标记。给药结束后,将大鼠以45mg/kg剂量的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,股动脉取血,用于检测外周血清中IL.1、IL.6的含量。然后,将各组大鼠处死,取右侧胫骨制作不脱钙骨切片,用于骨组织形态计量学指标的检测;取左侧胫骨制作冰冻切片,用于成骨细胞和骨髓基质细胞OPG和RANKL蛋白表达的检测。统计学处理方法:实验结果皆以均数4-标准差(x士s)表示,采用单因素方差分析(ANOVA)进行处理,组间两两比较,采用g检验。结果1巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠胫骨骨组织形态计量学指标的影响1.1巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠胫骨TBV%的影响模型组大鼠胫骨TBV%较假手术组明显降低。与模型组比较,巴戟天组、补骨脂组和阳性对照组的大鼠胫骨TBV%显著增加;而葫芦巴组则无显著性差异。巴戟天组、葫l中国中医科学院-'-OO九级硕士研究生学位论文芦巴组和补骨脂组大鼠胫骨TBV%明显低于假手术组;阳性对照组较假手术组则无显著性差异。结果见表1。表1各组大鼠胫骨TBV%的变化注:与假手术组比较:木P<0.05,枣木尸<O.01;与模型组比较:△P<0.05,△△P<0.01。下同。1.2巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠胫骨TRS%的影响与假手术组相比,模型组大鼠胫骨TRS%明显增高。巴戟天组、补骨脂组和阳性对照组较模型组大鼠胫骨TRS%明显降低;葫芦巴组较模型组无显著性变化。巴戟天组、葫芦巴组和补骨脂组大鼠胫骨TRS%较假手术组显著增高;阳性对照组较假手术组则无显著性差异。结果见表2。表2各组大鼠胫骨TRS%的变化1.3巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠胫骨TFS%和MAR的影响模型组大鼠胫骨TFS%和MAR均明显高于假手术组。与模型组相比,巴戟天组、2巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠骨质疏松症的作用及机理探讨补骨脂组和阳性对照组大鼠胫骨TFS%和MAR显著降低;葫芦巴组无显著性差异。与假手术组相比,巴戟天组、葫芦巴组和补骨脂组大鼠胫骨TFS%均显著增高:阳性对照组无明显差异。巴戟天组、葫芦巴组和补骨脂组大鼠胫骨MAR高于假手术组;阳性对照组则无明显差异。结果见表3。表3各组大鼠胫骨TFS%和MAR的变化1.4巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠胫骨mAR和OSW的影响与假手术组相比,模型组大鼠胫骨mAR显著升高。与模型组相比,阳性对照组大鼠胫骨mAR明显降低:巴戟天组、葫芦巴组和补骨脂组无明显差异。葫芦巴组和补骨脂组大鼠胫骨mAR明显高于假手术组;巴戟天组和阳性对照组较假手术组无显著性差巳开。与假手术组相比,模型组大鼠胫骨OSW显著升高。与模型组相比,阳性对照组大鼠胫骨OSW明显降低;巴戟天组、葫芦巴组和补骨脂组无明显差异。葫芦巴组OSW明显高于假手术组;巴戟天组、补骨脂组和阳性对照组较假手术组无显著性差异。结果见表4。中国中医科学院-:-OO九级硕士研究生学位论文表4各组大鼠胫骨mAR和OSW的变化2巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠胫骨OB和MSC OPG和RANKL蛋白表达的影响2.1巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠胫骨OB和MSC OPG蛋白表达的影响与假手术组相比,模型组大鼠胫骨成骨细胞和骨髓基质细胞OPG蛋白表达均明显下调。与模型组相比,补骨脂组和阳性对照组大鼠胫骨成骨细胞和骨髓基质细胞0PG蛋白表达明显上调;巴戟天组和葫芦巴组无显著差异。巴戟天组、葫芦巴组和补骨脂组较假手术组明显下调:阳性对照组与假手术组相比,无明显差异。结果见表5。表5 各组大鼠胫骨成骨细胞和骨髓基质细胞OPG蛋白表达的变化2.2巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠胫骨OB和MSC RANKL蛋白表达的影响模型组大鼠胫骨成骨细胞和骨髓基质细胞RANKL蛋白表达明显高于假手术组。巴戟天组、补骨脂组和阳性对照组大鼠胫骨成骨细胞和骨髓基质细胞RANKL蛋白表达较4巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠骨质疏松症的作用及机理探讨模型组显著下调;葫芦巴组无显著性变化。与假手术组相比,葫芦巴组大鼠胫骨成骨细胞RANKL蛋白表达上调;巴戟天组、葫芦巴组和补骨脂组大鼠胫骨骨髓基质细胞RANKL蛋白表达上调;巴戟天组和补骨脂组大鼠胫骨成骨细胞RANKL蛋白表达较假手术组无显著性差异。阳性对照组大鼠胫骨成骨细胞和骨髓基质细胞RANKL蛋白表达与假手术相比,均无明显差异。结果见表6。表6各组大鼠胫骨成骨细胞和骨髓基质细胞RANKL蛋白表达的变化3巴戟天、葫芦巴和补骨脂对去卵巢大鼠外周血清中IL.1、IL.6含量的影响与假手术组相比,模型组大鼠外周血清中IL.1含量显著增高。与模型组相比,补骨脂组和阳性对照组大鼠外周血清中IL.1含量明显降低;其它各给药组则无显著性变化。巴戟天组、葫芦巴组以及补骨脂组大鼠外周血清中IL.1含量较假手术组均显著升高;阳性对照组无明显差异。模型组大鼠外周血清中IL.6含量高于假手术组。与模型组相比,巴戟天组、补骨脂组及阳性对照组大鼠外周血清中IL.6含量较模型组明显降低;葫芦巴组则无显著性差异。与假手术组相比,巴戟天组、葫芦巴组以及补骨脂组大鼠外周血清中IL.6含量明显增高:阳性对照组无明显差异。结果见表7。中国中医科学院二oo九级硕士研究生学位论文表7各组大鼠外周血清中IL.1、IL.6含量的变化结论(1)巴戟天和补骨脂能在一定程度上抑制去除大鼠卵巢所致的骨的高转换,阻止骨量丢失,对骨质疏松症具有一定的预防作用;葫芦巴对去卵巢所致的大鼠骨质疏松症无明显的预防作用。(2)补骨脂不仅能够提高成骨细胞和骨髓基质细胞OPG的蛋白表达,而且能抑制其RANKL的蛋白表达;此外,还可降低外周血中IL.1、IL.6的水平,从而达到对骨质疏松症的预防作用。(3)巴戟天的作用途径是通过降低成骨细胞和骨髓基质细胞RANKL的蛋白表达,使之与RANK的结合减少,进而抑制破骨细胞的分化、成熟及活性,防止骨的过度吸收,并对IL.6也有一定的抑制作用。(4)葫芦巴对成骨细胞和骨髓基质细胞OPG和RANKL的蛋白表达以及IL.1、IL.6水平均无明显影响。关键闸:巴戟天;葫芦巴;补骨脂;去卵巢大鼠;骨质疏松症

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