中药分析新思路及其质量控制

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中药分析新思路及其质量控制_16300字

日期:2015-08-28 全文8页 共16380字

大学心理委员竞选演讲稿 尊敬的各位领导、各位老师和亲爱的同学们： 大家好! 我是***选手，我*是成功、勇敢、收获的象征，先来作一下自我介绍! 我是来自*****，现年**岁，性格活泼开朗，好了，开始我的竞职演说： 马，只有跑过千里，才能知其是否为…

目录 第一章 变分法 1.1 变分法的定义和定理 1.2 泛函与变分 1.3 欧拉方程 1.4 横截条件 1.5泛函的局部极值 1.6变分法求解最有控制问题 第二章 极值原理 2.1 极值原理 2.1.1积分型最优控制问题的最小值原理 2.1.2积分…

学年第A答案 适用班级：金融2003级、人力资源管理2003级 一、名词解释(每小题4分，共20分) 1、风险投资：风险投资是将资本投入到新兴的、迅速发展的、有巨大增长潜力（1分）的未上市的中小企业（1分）的一种承担高风险、追求高回报（1分）的权益投…

第33卷第2期2014年2月分析测试学报FENXICESHIXUEBAO（JournalofInstrumentalAnalysis）Vol.33No.2119～126

櫏櫏櫏殽櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏殽

：“这两种方法实际上可归结于一位西方科学家在谈到现代医药与中医药的对比时，略带揶揄地说道

一个简单的问题：即对每一种疾病是采用像西方世界现行治疗方法那样，通过一个已确知该物质分子作用目标的银弹（Silverbullet）定射方法，还是像传统中药那样，对待疾病采用服用一组作用并不十分清楚收稿日期：2013－12－31；修回日期：2014－01－06

基金项目：国家自然科学基金项目（21275164；21105129）

*通讯作者：梁逸曾，教授，研究方向：化学计量学、中药现代化及代谢组学，Tel：13808416334，E－mail：yizeng_liang@263.net櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏殽专题策划:现代分析技术在中药检测及质量控制中的应用doi：10.3969/j.issn.1004－4957.2014.02.001编者按：随着社会的发展，我国传统医学正发挥着越来越重要的作用。但由于中药成分复杂且部分有效成分含量低，因此，如何采用现代分析技术和科学方法有效提取、分离中药活性成分，开展中药标准化工作，并实现对中药质量及安全性的有效评价，已成为发展中药、实现中药现代化系统工程的重要因素。针对当前这一研究热点及难点，本刊特推出专题。希望本专题能有助于进一步完善中策划“现代分析技术在中药检测及质量控制中的应用”药检测技术与标准体系，促进我国中药现代化发展。中药分析新思路及其质量控制1*1梁逸曾，易伦朝，黄2熙，王櫏櫏櫏殽杨2（1．中南大学中药现代化研究中心，湖南长沙410083；2．中南大学长沙410008）湘雅医院摘中药药理研究室，湖南要：随着国家对中药现代化的重视，为了更好地诠释中药药性的本质，研究者从不同角度对中药进行研究。分析化学、药学、生物学等多学科的多种不同的技术在这里融合，一些新的思路和方法正在不断涌现，中药的分析与质量控制正沿着综合且全面的方向在不断地发展和前进。该文对当前中药分析新思路及其质量控制进行了简要评述，在此基础上，对中药质量控制的色谱指纹图谱进行了分类说明与研究，表明采用现代分析手段，可以实现对中药质量的有效控制。关键词：中药；质量控制；新型分析技术中图分类号：O657.7；TQ460.72文献标识码：A文章编号：004－4957（2014）02－0119－08NewTechniquesinAnalysisofTraditionalChineseMedicinesandTheirQualityControlLIANGYi-zeng1*，YILun-zhao1，HUANGXi2，WANGYang2（1．ＲesearchCenterofModernizationofChineseMedicines，CentralSouthUniversity，Changsha410083，China；2．LaboratoryofEthnopharmacology，XiangyaHospital，CentralSouthUniversity，Changsha410008，China）Abstract：WiththestrongsupportfromChinesegovernment，lotsofnewresearchersontraditionalChinesemedicines（TCMs）fromdifferentaspectshavebeendevelopinginordertoexploretheworkingmechanismofChinesemedicines．TheanalysisandqualitycontrolofChinesemedicinesaresteadilymovingtowardsanintegrativeandcomprehensivedirection，inordertobetteraddresstheinherentho-listicnatureofTCMswiththehelpofnewanalyticaltechniques，includingchemicalandbiologicalones．ThenewtechniquesinanalysisoftraditionalChinesemedicinesandtheirqualitycontrolarefirstlyreviewedbrieflyinthepaper．SeveraltechniquesforqualitycontrolofChinesemedicinesarediscussedinsomedetail．ItisillustratedthatthequalityofChinesemedicinescouldbeefficientlycontrolledwiththehelpofmodernanalyticaltechniques．Keywords：Chinesemedicines；qualitycontrol；newanalyticaltechniques

120分析测试学报第33卷

”实际上，到底哪种方法较好应是依据时间、地点和条件的不同而变的药剂式的散弹猎枪的办法来解决。

化的。诚然，如从纯粹科学的角度来看，西方的医药学系统，特别是从理论水平来看，的确是一门具有严格基础且内容十分广阔的科学；而传统中医药则主要依赖对人体的一个非解剖的整体理解而产生的经验学科，这是一门具有悠久历史，而且对中华民族繁衍生息作出了巨大贡献的医药学科。孰优孰劣，断不可简单处之，这主要是由于现代医药学的发展还有很多未知领域，仍需继续不断地实践。

撇开大量使用中医药的中国大陆的有关中草药安全有效的报道不谈，仅就西方的报道而言，有关

sai-中草药安全有效的报道就不少。如一个在日本进行的随机非盲的临床实验就报道了小柴胡汤（Sho-

ko-to）对预防肝癌和治疗肝硬化有效［1］；在英国进行的两个双盲、安慰剂控制的临床实验亦证明了草

［2－3］。在这两个试验中，中药复方药Zemaphyte（一种含10种中草药的复方）对某种皮肤病的治疗效果

在治疗严重的、广泛传播的，但对常规激素治疗有抗药性的播散性神经性皮炎（Atopiceczema）方面，表现出了让人印象非常深刻的疗效。因此，一些西方科学家认为中药的药效应是多个活性组分协同作

［4－6］。从这一视点出发，如只遵循传统西医药的还原主义（Ｒeductionist）者的观点来对中药进行用所致

研究，只关注在中药中分离出单一活性化合物的思路不一定对中药的开发研究有效。自然杂志药物发

：“忘记那些精心为一个特殊目标分子设计的药物，一现评论专栏的主编SimonFrantz也发表个人意见

。”（“Forgetdrugscarefully个更好的治疗如癌症这种复杂疾病的设计思路，应该可针对多个目标分子

designedtohitoneparticularmolecule—abetterwayoftreatingcomplexdiseasessuchascancermaybetoaimforseveraltargetsatonce．”）［7］。他认为，这样做的理由很简单：因为这些复杂疾病，如癌症、心血管疾病和忧郁型倾向疾病，多由多种分子不正常而不是一种分子不正常所致。更有甚者，只针对一个特殊目标设计的药物在很多情况下并无多大帮助，实因细胞总是能为这个受药物影响的蛋白质找到补偿之通路，这一现象在医学中称为冗余（Ｒedundancy）补偿。这样，若采用所谓的神奇的鸟枪（Magicshotguns），即散弹猎枪，来达到对复杂体系的同时多目标攻击的效果，还可能比只完全阻滞一个目标化合物获得更好的治疗效果。精心为一个特殊目标分子设计的神奇子弹（Magicbullet）应可继续成为药

［7］物设计的很好方法，但这种方法很可能对复杂疾病并不是可取之道。实际上，现在已有很多药物公

司和研究小组在对多个目标同时进行攻击的混杂药物（Promiscuousdrugs）进行研究。现在对混杂药物研

［8］究最多的领域是针对癌症的治疗。值得指出的是，日本科学家Kitano还提出了一个崭新的观点，他

orienteddrugdesign）的研究。他指出，中药可能为研究者创造认为应展开面向系统药物设计（Systems-

一种新型的药物发现的策略提供灵感（Inspiration），这可以用大量的活性化合物来系统地控制复杂的人体网络系统［9］。如果说稳定性是生物系统的基本特性，那么，面向系统的药物设计就应将稳定作为其设

：“应该建立一种新的，可控制复杂和稳定生物体系的高复杂度药物设计计的中心框架。因此Kitano认为

方法，实因复杂性的体系必须由复杂性药物方可进行控制。但要实现这样的稳健药物设计方法将会面临

。以上讨论，很多挑战，而这也将引起在制药工业和医药实践中的基础转变（Fundamentaltransformation）”

实际上可以看成是在科学哲学层面上的一种讨论。相信以后这种讨论还将继续。

然而，不管采用什么样的医药学系统，对药物的质量控制总是保证安全有效的重要前提。一般说来，质量控制就是采用现代分析技术识别真假，检测不纯物和鉴定活性化合物的结构，并在此基础上测定其浓度。近年来，人们已普遍认识到，对于传统中药，有必要从整体的角度来看待其质量问题。所以，采用色谱指纹图谱以及尽量做到同时检测多种活性化学成分的方法来进行中药质量控制，已成为当前发展的主要趋势［10－15］。

1中药色谱指纹图谱技术及其新发展

谢培山先生曾对中药色谱指纹图谱给出了如下定义：中药色谱指纹图谱是一种综合的、可量化的

［16］色谱鉴定手段。用以鉴别真伪，评价原料药材、半成品和成品的质量均一性和稳定性，其基本属性

。这说明中药色谱指纹图谱是一种综合的、整体的鉴定手段，其功用在于是“整体性”和“模糊性”

鉴别真伪，还可评价中药的质量均一性和稳定性。从其综合和整体性能看，它可准确且又可量化地对中药进行真伪鉴别和质量评价，而从细节上看，中药色谱指纹图谱还存在模糊性，尤其是对生药因为有“道地性”和“采集时间因素”的实际情况，因此很难给出一个对所有药品都适用的共有峰和非共有峰的比例，更不能象西药那样能一一对应。

第2期梁逸曾等：中药分析新思路及其质量控制121

［17－22］从本课题组已分析的近50多种中草药样本所得结果来看，虽色谱指纹图谱复杂、峰多，且

同种药材的指纹图谱也不尽相同，但用它们来鉴定同种药材和异种药材及辨认药材真伪具有很高的准确度。一般说来，植物等价性（Phytoequivalence）是中药指纹图谱对不同药材种属进行鉴别、对同种药材质量是否均一及其质量优劣进行评价的物质基础（如图1）。图1A显示了33个灯盏细辛（Erigeronbreviscapus）在波长为280nm的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱。从图中可看出，这些从云南省不同产

［21］地收集而来的灯盏细辛样本具有相同的整体相似特性。图1B显示了32个由气相色谱－质谱仪所测

得的川芎的色谱指纹图谱，样本皆从四川省不同产地收集而得。从这些色谱图可清晰看到它们的整体相似性。当归（ChineseAngelica，CA）、日本当归根（AngelicaＲadix，JA）、川芎（ＲhizomaChuanxiong，SL）和日本芎草穷（CnidiiＲhizoma，CＲ），这几种草药的化学成分较为类似，但药效不同。为了对其进行识别，收集了40个当归样本及其相应草药（图1C），采用高效液相色谱法（HPLC）对样本进行检测，结果显示，采用色谱指纹图谱方法可以对其进行区分。在当归（CA）中川芎内酯（SenkyunolideA）的含量是川芎（SL）和日本芎草穷（CＲ）的1/30，这可作为区分它们的化学标志物。而通过色谱指纹图谱的整体模式，或采用阿魏酸盐（Coniferylferulate）的含量也可以很容易将日本当归根与当归（CA）、川芎（SL）和日本芎草穷（CＲ）进行区分［22］

。

Fig.1图1中药指纹图谱对不同药材种属的鉴别IdentificationofTCMs’speciesbychromatographicfingerprints

A．33HPLCfingerprintsofErigeronbreviscapuscollectedfromdifferentregionsofYunanprovince（由云南省不同产地收集的33个灯盏细辛的高效液相色谱指纹图谱）；B．32GCfingerprintsofLigusticumchuanxiongcollectedfromdifferentregionsofSichuanprovince

（四川省32个不同产地收集所得到的川芎的气相色谱指纹图谱）；C．HPLCfingerprintsofAngelicasinensis

fromdifferentoriginsandspecies（不同产地与不同种属当归的高效液相色谱指纹图谱）

随着分析技术的不断发展，为更好诠释中药药性的本质，一些新的分析方法，如固定化亲和色谱（Immobilizedaffinitychromatography）、生物指纹图谱（Biofingerprintanalysis）、代谢指纹图谱（Metabolicfingerprint）也在不断涌现［22］。结合色谱指纹图谱对中药的鉴别能力，为进一步消除色谱指纹图谱的模糊性，更好地定量控制中药活性化合物的含量，多组分同时定量的方法也被广泛用于中药分析。需提出的是，联用技术（如HPLC－MS、GC－MS、HPLC－NMＲ等）与化学计量学的结合，以及化学和生物

［23］方法的结合，使得中药的分析与质量控制正沿着综合且全面的方向在不断地发展和前进。

灵敏与全面定性定量的分析技术为人们更好理解中药的药理学基础并进行质量控制提供了可能。近几年，由于质谱技术的飞速发展，如三重四极杆质谱、离子阱质谱、飞行时间质谱、傅立叶变换离子回旋共振质谱、多级质谱等，为液相色谱的在线定性分析提供了新技术，使得中药成分，甚至痕量物

［24］n质的HPLC色谱的在线定性分析、中药活性物质筛选也成为可能。利用HPLC－MS/MS对中药活性物

质进行定性分析，包括多酚类（包括黄酮）化合物、皂甙类化合物、生物碱、单萜、双萜及三萜类化合物、甾族化合物等天然产物，皆有可能对它们进行快速结构鉴定，从而使得中药在化合物的检测以及物质在线结构定性方面均取得了长足进步。此外，为能对中药分析体系进行更全面的定性定量分析，有效地利用不同分离方法（HPLC、GC、CE等），以及色谱指纹图谱结合不同的检测和分离技术，如色谱指纹图谱结合多检测器以及色谱指纹图谱结合多种分离技术（多维色谱）等，可望更进一步解决中药复杂体系的定性定量问题。然而，尽管在上述研究领域已取得了较大进步，梁鑫淼先生仍然认为，在中药研究中，如何快速获得中药活性成分的标准物质、如何解决中药中极性成分和低含量成分的快速定性定量分析的

［25］问题，将成为中药分析与分离科学未来研究的重点，也是难点问题。

随着国家对中药现代化研究的高度重视，在中药的定性定量分析及结构测定方面已取得了显著的［25］［25］进步，大量的研究者亦从不同侧面来研究中药，包括中药分类学、中药鉴定、化学成分的分离检测、

122分析测试学报第33卷

药学、毒理学、活性成分筛选等，虽然包含了不同学科和不同技术的融合，但大部分的技术和研究方法学主要还是采用西方化学药物的研究模式来研究中药，其出发点大都采用现代常用的化学和分子生物学方法，而忽视了中医学理论和古老的中国哲学。为此，谢培山先生认为，中药现代化不仅要依赖飞速

［26］发展的分析化学、药学和生物学等技术，还需考虑建立起一座连接传统医学和现代科学的桥梁。

2

2.1色谱指纹图谱在中药质量控制领域的应用液相色谱指纹图谱

2.1.1含诃子属中药产品的质量控制诃子未成熟果实含有相对高得多的3，4，5-三羟基苯甲酰糖苷脂（Polygalloylglucoseesters），如诃子林鞣酸（Chebulinicacid）、诃子鞣酸（Chebulagicacid）及单体鞣花酸（Monomergallicacid）。鞣花酸常被用作诃子属质量控制的定性定量检测标志物。然而，单独采用鞣花酸作为诃子属质量控制的定性定量检测标志物是不完备的。因不适宜的诃子未成熟果实提取工艺可能产生比原药材浓度高出许多的鞣花酸，另外多聚糖苷脂的水解也可导致鞣花酸的浓度增高。图2显示的诃子原药材色谱指纹图谱实际上提供了进行诃子未成熟果实质量控制的整体模式。为方便比较，整个指纹图谱分成三段：第一段覆盖保留时间区域2～10min，包含1～5号色谱峰，其中第3号峰为鞣花酸；第二段覆盖保留时间区域11～22.5min，包含6～11号色谱峰；第三段覆盖保留时间区域23～40min，包含12～15号色谱峰，其中第13号峰对应于诃子鞣酸（Chebulagicacid），而第15号峰即为诃子林鞣酸（Chebulinicacid）。从图中可清楚看出（图2下部），不同段的特点很容易识别，这也可用作诃子未成熟果实的特征指纹。将此药材的HPLC指纹图谱（图2A）与一些提取物的HPLC指纹图谱（图2B）进行比较，可发现第3号峰即鞣花酸峰显著增高，而在第三段的第13、15号峰则几乎成比例地降低。这导致提取物的HPLC指纹图谱与原药材的指纹图谱发生了显著变化。这些变化的原因应该是在提取过程中，一些化学活性成分发生了降解。通过改变工艺，发现提取物的HPLC指纹图谱与原药材的指纹图谱又具有了相同模式（图2C）。此研究结果充分说明，HPLC指纹图谱完全可以而且有必要用于指导中药的提取工艺

。

图2诃子未成熟果实原药材（A）、未优化工艺的提取物（B）和优化工艺的提取物（C）的HPLC指纹图谱及其线性图

Fig.2HPLCfingerprintsandlineplotsofimmaturefruitsofterminaliachebularetz（A），terminaliachebula

retzextractwithunoptimized（B）andoptimizedextractionconditions（C）

HPLCcolumn：Lichrospher100ＲP－18，columntemperature：20℃；mobilephase：A．0.05%phosphoricacidsolutionand

0.05%KH2PO4solution；B．methanol；C．ethylacetate；nonlineargradientelution；detectionwavelength：280nm

2.1.2硫磺熏制白芷的色谱指纹图谱分析采用硫磺燃烧来熏制（干）一些带有肉质纹理或富含淀粉或多糖的中草药，从而使其干燥过程缩短，漂白原生药的灰暗表面和防止蛾虫，是近年来一些中药饮片工厂经常采用的方法。然而，在此过程中存在一些潜在不良因素。通过对白芷（Dahurianangelicaroot）在硫磺燃烧熏制过程的色谱指纹图谱比较分析发现，在此硫磺燃烧熏制的过程中，不但由此产生的二氧化硫与白芷中一些成分发生了反应，而且，还使白芷中的一些具有活性的主要呋喃香豆素类化

第2期梁逸曾等：

中药分析新思路及其质量控制123

合物，如欧前胡素、异欧前胡素和氧化前胡

［27］素等严重丢失。

对经过或不经过硫磺燃烧熏制的白芷进

行色谱指纹图谱分析发现，如采用峰面积积

分来表示相对含量，有60%的呋喃香豆素类

化合物损失。不稳定的香豆素（如氧化前胡

素）在指纹图谱中消失，同时伴随少数呋喃

香豆素类化合物的微弱增加，从而使得白芷

的HPLC指纹图谱发生重大变化（见图3）。

白芷的HPLC指纹图谱包含22个色谱

峰，其中有10个峰是通过比较标准物质的

保留时间和紫外光谱来确定其归属，有些则

［28］是通过与文献对照比较分析而得。这10

个色谱峰对应的化合物分别为：腺嘌呤核苷图3不经过（A）或经过（B）硫磺燃烧熏制的白芷色谱指纹图谱比较分析Fig.3Comparativeanalysisofchromatographicfingerprintsofradixangelicaebefore（A）andafter（B）sulfursmoked

（Adenosine，1）、花椒毒酚（Xanthotoxol，tenpeakswereidentified：1．adenosine，6．xanthotoxol，10．xanthotoxin，12．oxypeucedaninhydrate，14．isopimpinellin，16．bergapten，18．oxypeucedanin，19．imperatorin，

21．cnidilin，22．isoimperatorin

6）、花椒毒素（Xanthotoxin，10），水合氧化前胡素（Oxypeucedaninhydrate，12）、异茴芹内酯（Isopimpinellin，14）、佛手内酯（Bergapten，16）、氧化前胡素（Oxypeucedanin，18）、欧前胡内酯（Imperatorin，19）、8-氧甲基异欧前胡内酯（Cnidilin，21）和异欧前胡内酯（Isoimperatorin，22）。第10、12、16、17、18、19、21、22号色谱峰占据了非硫磺燃烧熏制（日晒干燥）的白芷的HPLC指纹图谱主要部分，其中19号峰最高最明显（图3）。而硫磺燃烧熏制（日晒干燥）的白芷的HPLC指纹图谱中，19号峰的欧前胡内酯（Imperatorin，19）几乎损失60%；17号峰和18号峰的氧化前胡素几乎完全消失。然而，在3～11号峰的吸收区间（保留时间为18～44min）的色谱峰有一定程度的升高。这些结果说明，硫磺燃烧熏制严重损害白芷药材的生物活性，需引起注意。

现代有关呋喃香豆素类化合物的药理药效和临床研究也表明，白芷药材中含有的呋喃香豆素类化合物具有不同的生物活性，如抗炎、抗肿瘤、抗微生物、止痛效应和护肝效应（Hepatoprotective）等。而这些呋喃香豆素类化合物却在硫磺燃烧熏制过程中严重损失，另据文献报道，经硫磺燃烧熏制的白芷的止痛效应显著下降，说明采用这种方法来处理中药值得商酌。

2.1.3淫羊藿种属色谱指纹图谱的模式分析淫羊藿是一种使用非常广泛的中草药。它包含了很多小檗科（Berberidaceae）种属，而且分布十分广泛，几乎大部分省份都有，如粗毛淫羊藿（Epimediumacu-minatumFranch．）、短茎淫羊藿（EpimediumbrachyrrhizumStearn）、绿药淫羊藿（EpimediumchlorandrumStearn）、宝兴淫羊藿（EpimediumdavidiiFranch．）、长蕊淫羊藿（EpimediumdolichostemonStearn）、无距淫羊藿（EpimediumecalcaratumG.Y.Zhong）、川西淫羊霍（EpimediumelongatumKom．）、紫距淫羊藿（EpimediumepsteiniiStearn）等几十种。

在药典中规定5种可以入药，即淫羊藿（EpimediumbrevicornuMaxim．）、朝鲜淫羊藿（Epimediumko-reanumNakai）、三枝九叶草淫羊藿（Epimediumsagittatum（Sieb.etZucc．）Maxim．）、柔毛淫羊藿（Epime-diumpubescensMaxim．）和巫山淫羊藿（E.wushanenseT.S.Ying）。对淫羊藿药材的市场调查结果显示，淫羊藿和柔毛淫羊藿是中国中药材市场的主流商品。除了这5种药典指定的淫羊藿药材外，粗毛淫羊藿（EpimediumacuminatumFranch．）和黔岭淫羊藿（EpimediumleptorrhizumStearn）也出现在一些地区的中药材市场。药典指定的淫羊藿药材通常含有异戊烯苯丙类黄酮皂苷甙。此类化合物有很强的免疫调制作用、成骨细胞的增生作用以及类似性激素的活性作用。其中淫羊藿甙（Icariin）、淫羊霍定A（Epime-dinA）、朝藿定B（EpimedinB）、淫羊霍定C（EpimedinC）均被作为淫羊霍的生物活性标志物来进行质量控制。因此，对淫羊藿药材进行色谱指纹图谱分析时，可选择富含异戊烯苯丙类黄酮皂苷甙的淫羊藿药材作为其质量控制的标准。

有关药典中规定的5种可入药的淫羊藿的HPLC指纹图谱示于图4。从图可以看出，在保留时间37～50min区间内的5～7个峰中，包含了4个最重要的异戊烯苯丙类黄酮皂苷甙，即2号峰（淫羊霍

124分析测试学报第33卷

定A，EpimedinA）、3号峰（朝藿定B，EpimedinB）、4号峰（淫羊霍定C，EpimedinC）和6号峰（淫羊藿甙，Icariin）。这些异戊烯苯丙类黄酮皂苷甙化合物的相对浓度比率基本决定了这5种淫羊藿指纹图谱的基本特征。在此区域若4号峰占主导则表示为巫山淫羊藿（E.w.pattern）；而若第6号峰为最强峰，则为朝鲜淫羊藿（E.k.pattern）的提取物；而当第3号峰与6号峰具有相同强度时，则为淫羊藿（E-.b.pattern）的指纹特征；4号峰和6号峰相对较强则是柔毛淫羊藿（E.p.pattern）和三枝九叶草淫羊藿（E.s.pattern）的基本特征，如4号峰大于6号峰，则为三枝九叶草淫羊藿（E.s.pattern），反之则为柔毛淫羊藿（E.p.pattern）

。

Fig.4淫羊藿（E.brevicornuMaxim．）、朝鲜淫羊藿（E.koreanumNakai）、三枝九叶草淫羊藿（E.sagittatum（Sieb.etZucc.）Maxim.）、柔毛淫羊藿（E.pubescensMaxim．）和巫山淫羊藿（E.wushanenseT.S.Ying）的HPLC指纹图谱HPLCchromatographicfingerprintsoffivespeciesherbaepimediiincludingE.brevicornuMaxim．，E.koreanum

Nakai，E.sagittatum（Sieb.etZucc．）Maxim.，E.pubescensMaxim.andE.wushanenseT.S.Ying图4

2．EpimedinA（淫羊霍定A），3．EpimedinB（朝藿定B），4．EpimedinC（淫羊霍定C），6．icariin（淫羊藿甙）

通过对所收集的46个淫羊藿样本进行主成分分

析，可观察到这5种淫羊藿药材的分类很明显（见图

5）。从图可以看出，如以朝鲜淫羊藿（E.k.pattern）

为基准，可看到不同模式的变化趋势，即E-

.w.pattern←E.s.pattern←E.p.pattern←E.k.pattern。

值得指出的是，此变化趋势与图4中4号峰从小变大

的趋势相一致。已有的对淫羊藿HPLC指纹图谱的研

究［29－32］，主要集中在植物的分类和质量分析方面，

［29－32］如Guo等着重描述了35个淫羊藿样本的分类情

［33－34］提出的形态分类学原理，对淫况，根据Stearn

羊藿的亚类进行了更严格的分类。而本课题组认为，

如从实用角度出发，如何将淫羊藿按其药效来进行

分析和讨论可能是进行淫羊藿色谱指纹图谱研究的

一个更重要的问题。图546个淫羊藿样本的主成分分析投影图Fig.5Projectionplotofprincipalcomponentanalysisof46herbaepimediisamples

2.2干鲜鱼腥草的气相色谱指纹图谱

按中国药典，鱼腥草的鲜草和干草均可入药，但在我国众多制药企业中，既有采用鲜草（主要为南方的生产厂家），也有采用干草入药的（主要为北方的生产厂家）。本课题组对鱼腥草鲜草和干草的区

［35］别以及制成成品后的区分进行了系统研究。

分别考察了21个不同厂家鱼腥草注射液（200mL）的GC－MS指纹图谱（图6），其中，1～10号厂家所用的原料为新鲜鱼腥草，11～21号厂家所用的生产原料为干草。为使样品具有代表性，每个厂家注射液各取10批，经GC－MS分析后，对10批注射液的指纹图谱求均值，各均值指纹图谱代表各厂家注射液的指纹图谱。从图中可看出，干草注射液指纹图谱和鲜草注射液指纹图谱存在较大差异。

第2期梁逸曾等：

中药分析新思路及其质量控制125

那么这种差异是否由鱼腥草药材造成？是否鱼

腥草新鲜药材与干燥药材之间也相应存在同样的差

异？故取鱼腥草在（24±2）℃条件下自然阴干，药材

被分成7份，分别干燥0、0.5、1、2、4、8、16d。

然后提取挥发油进行分析，其GC－MS指纹图谱见

图7。从图7可看出，鱼腥草药材在干燥过程中发生

了一些化学成分的变化。根据定性定量结果，可找

出鱼腥草药材中的组分随干燥时间的变化规律。由

于挥发油含量会随着干燥时间的延长而降低，所以

大部分组分在干燥过程中也逐渐减少。表1列出了最图6不同厂家鱼腥草注射液的均值指纹图谱具有代表性的4种化合物（即保留时间分别为13.7、Fig.6Meanchromatographicfingerprintsofhouttuynia

cordatainjectionsfromdifferentcompanies21.7、22.3、23.6min的β-香叶烯、石竹烯、4-

十三

酮及山萮酸乙酯）的变化趋势。这4种物质含量在前

2d下降很快，随后则基本稳定。值得注意的是，此

前对鲜草注射液的指纹图谱分析却发现这4个组分含

量与干草注射液中的相同。但在鲜药材中这4个组分

的含量均较大，其原因可能是在鲜草注射液生产过

程中，从药材的采集到最后进蒸馏釜蒸馏中，由于

洗涤、运输等需要1～2d时间。而这个过程类似于

自然干燥过程，从而导致了这4个组分在鲜草注射液

中的含量与在干草注射液中一样低。药材挥发油含

量在干燥的前2d急剧下降也证实了该推论。相反，

从表1可见，保留时间分别为17.2、20.4、23.9min

的壬醇、n-癸酸和石竹烯氧化物的含量则随着干燥时

间的延长而增加。通过比较鲜草注射液和干草注射

液的指纹图谱（图6），发现这2大类注射液指纹图谱

的最大区别在于干草注射液在保留时间17.0～17.2、

20.2～20.4、23.9～24.0min处的3个峰较鲜草注射

液的大得多（见图7e、f、g峰）。鱼腥草药材干燥时

间影响的研究结果为此提供了有力的证据。

Table1表1鱼腥草药材中主要组分的相对百分含量随干燥时间的变化Ｒelativepercentagechangesofseveralmaincomponentsinhouttuyniacordatawiththeextensionofdryingtime（%）

Compound

Myrcene（β-β-香叶烯）

Caryophyllene（石竹烯）β-

4-Tridecanone（4-十三酮）

Docosanoicacidethylester（山嵛酸乙酯）

Nonanol（壬醇）

n-Decanoicacid（n-癸酸）

Caryophylleneoxide（β-β-石竹烯氧化物）04.42.38.38.51.314.21.00.51.92.05.22.51.816.11.311.01.54.11.82.017.21.6Dyingtime（day）20.91.62.91.73.218.02.040.81.51.91.64.825.33.180.71.41.81.57.427.43.5160.61.31.71.49.230.04.2图7不同干燥时间的鱼腥草药材的指纹图谱Fig.7Chromatographicfingerprintsofhouttuyniacordatawithdifferentdyingtimedyingtime（1－7）：0，0.5，1，2，4，8，16day；a．myrcene（β-caryophyllene（石竹烯），香叶烯），b．β-c．4-tridecanone（4-十三酮），d．docosanoicacidethylester（山嵛酸乙酯），e．nonanol（壬醇），f．n-decanoicacid（n-caryophyllene癸酸），g．β-oxide（β-石竹烯氧化物）

3结论与展望

随着分析技术的不断发展，中药分析在我国已取得显著进步，有关中药“膏丹丸散，神仙难辨”的时代现已一去不返，这种进步还将不断持续。然而，如何采用新型分析技术，特别是如何将分析技术与生物学方法相结合，在解析中药的作用机理及发现中药的协同作用机制方面作出贡献，并在此基础上，找到更有效的中药组分新方剂或发现新一代的具有中药哲学思路的混合药剂仍是亟待解决的问

126分析测试学报第33卷

题。笔者认为，谢培山先生提出的“中药现代化不仅要依赖飞速发展的分析化学、药学和生物学等技

［26］术，还需考虑建立起一座连接传统医学和现代科学的桥梁”的建议很值得深思。

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第33卷第2期2014年2月分析测试学报FENXICESHIXUEBAO（JournalofInstrumentalAnalysis）Vol.33No.2119～126 櫏櫏櫏殽櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏殽 ：“这两种方法实…

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