美洲大蠊提取物对实验性溃疡性结肠炎的治疗作用及机理探讨

发布时间：2017-07-08 16:04

  本文关键词：美洲大蠊提取物对实验性溃疡性结肠炎的治疗作用及机理探讨

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【摘要】：溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)是一种发病原因尚未完全明确、病程迁延的慢性非特异性结直肠炎症,是消化系统常见的难治性疾病。近年来,国内外UC的发病率快速增长,相关的治疗药物也成了学者研究的热点。目前,临床上治疗UC常配合中药口服或灌肠,这不仅可以提高疗效、减少复发率,而且还可以减少西药用量及减轻长期服用的副作用。美洲大蠊(Periplaneta americana L.)为我国传统的动物类中药,具有通利血脉之功效。近年来,以美洲大蠊为原料制成的制剂在防治消化系统疾病方面效果显著,如放射性食管炎、急性糜烂性胃炎、溃疡性结肠炎等各类消化性溃疡,但对其作用机理的相关报道和基础研究甚少。因此,本试验首先以美洲大蠊乙醇提取物为研究对象,通过动物试验探讨其对UC的治疗作用,并探讨对UC时细菌易位的干预作用;其次进一步以美洲大蠊乙醇提取物及其各极性部位为研究对象,分别探讨各极性部位对成纤维细胞功能、免疫活性的影响,以期阐明抗UC的机理。主要研究内容结果如下:(1)美洲大蠊乙醇提取物化学成分分析结果:多肽(17.59 mg/g)、氨基酸(5.75mg/g)、多元醇(11.60 mg/g)、粘糖氨酸(4.65 mg/g)、尿嘧啶(0.189 mg/g)。(2)以2,4-二硝基氯苯+乙酸复合法建立的UC大鼠为模型,探讨美洲大蠊乙醇提取物抗UC的疗效。将42只SD大鼠随机分为6组(n=7):正常对照组、模型组、美洲大蠊提取物三组(20,40,80 mg/kg)、柳氮磺胺吡啶(SASP)组。造模完成次日,给予药物干预,连续给药10 d。每天记录大鼠体重、大便性状,并计算疾病活动指数(DAI)。实验结束后,解剖收集肛门以上约3 cm处的直肠,用于MPO水平及病理学检测,结果表明:美洲大蠊提取物能降低大鼠DAI、减轻肠道炎症指标水平并且能够改善上皮细胞缺损、腺体破坏、杯状细胞消失、炎细胞浸润等病理变化。(3)以绿色荧光蛋白标记并且耐氨苄西林的大肠杆菌为示踪菌,结合动物模型,研究美洲大蠊提取物对UC大鼠细菌易位的干预作用。将24只无抗药性的UC模型大鼠连续给药4 d,同时灌服示踪菌,每天一次。实验结束后,解剖收集大鼠结肠、肠系膜淋巴结、肝、脾、肾。结果表明:与模型组相比,美洲大蠊提取物高剂量组(80 mg/kg)能显著降低UC大鼠肠道细菌易位率(p0.05)。(4)从细胞水平探讨美洲大蠊提取物及其各极性部位对NIH3T3成纤维细胞功能的影响。采用MTT法检测不同浓度PAE及各极性部位对NIH3T3细胞增殖的影响,其中PAE终浓度为250μg/m L时,促增殖作用达到高峰。采用羟脯氨酸试剂盒测定药物对细胞胶原合成的影响,结果表明PAE对胶原蛋白合成具有促进作用。考马斯亮蓝测定细胞总蛋白合成,结果表明PAE能够促进细胞总蛋白的合成。划痕实验表明PAE能使较多的细胞进入创口模型,加速细胞愈合速度,促进细胞的迁移。(5)以环磷酰胺(80 mg/kg)诱导的免疫力低下小鼠为模型,研究美洲大蠊提取物及其各极性部位对机体免疫功能的影响。结果表明:BuOH部位能够提高胸腺和脾脏指数,并对小鼠的细胞免疫和体液免疫有较好的激活作用,可见美洲大蠊具有较好的免疫调节作用,以Bu OH部位活性最好。
【关键词】：美洲大蠊 溃疡性结肠炎 细菌易位 成纤维细胞 免疫调节
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R259
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-7
• 缩写注释7-12
• 第一章 绪论12-26
• 1.1 美洲大蠊的研究概况12-19
• 1.1.1 美洲大蠊药材简介12
• 1.1.2 美洲大蠊化学成分研究12-17
• 1.1.3 美洲大蠊药理活性17-18
• 1.1.4 美洲大蠊的毒性与安全性18-19
• 1.2 溃疡性结肠炎（UC）的研究概况19-23
• 1.2.1 UC的临床表现19
• 1.2.2 UC的发病机理19-20
• 1.2.3 UC的药物治疗20-23
• 1.3 细菌易位与肠黏膜屏障23-24
• 1.4 本论文的研究背景、意义24-25
• 1.5 本论文的研究内容25-26
• 第二章 美洲大蠊提取物化学成分的研究26-37
• 2.1 材料26-27
• 2.1.1 仪器设备26
• 2.1.2 药品与试剂26-27
• 2.2 方法27-32
• 2.2.1 美洲大蠊提取物（PAE）的制备27
• 2.2.2 PAE的分步萃取27-28
• 2.2.3 TLC鉴别28
• 2.2.4 含量测定28-32
• 2.3 结果32-36
• 2.3.1 提取物浸膏得率32-33
• 2.3.2 PAE的TLC鉴别33
• 2.3.3 PAE各极性部位中多肽含量33-34
• 2.3.4 PAE各极性部位中游离氨基酸含量34
• 2.3.5 PAE各极性部位中多元醇含量34
• 2.3.6 PAE各极性部位中粘糖氨酸含量34-35
• 2.3.7 PAE各极性部位中尿嘧啶含量35
• 2.3.8 PAE及各极性部位中各成分含量的汇总表35-36
• 2.4 本章小结36-37
• 第三章 美洲大蠊提取物对UC大鼠的疗效研究37-45
• 3.1 材料37-38
• 3.1.1 实验动物37-38
• 3.1.2 实验试剂38
• 3.1.3 主要仪器设备38
• 3.1.4 主要溶液配制38
• 3.2 方法38-41
• 3.2.1 动物模型的复制方法38
• 3.2.2 实验剂量的确定38-39
• 3.2.3 供试药物的制备39
• 3.2.4 分组处理39
• 3.2.5 观察指标39-41
• 3.3 统计学分析41
• 3.4 结果41-44
• 3.4.1 各组大鼠的一般状态41-42
• 3.4.2 肉眼观察各组大鼠直肠组织42-43
• 3.4.3 光学显微镜观察（HE染色）各组大鼠直肠组织43-44
• 3.4.4 直肠MPO活性44
• 3.5 本章小结44-45
• 第四章 美洲大蠊提取物对UC大鼠细菌易位的干预45-50
• 4.1 材料46
• 4.1.1.实验动物46
• 4.1.2 示踪菌46
• 4.1.3 实验试剂46
• 4.1.4 主要仪器46
• 4.1.5 主要溶液配制46
• 4.2 方法46-47
• 4.2.1 动物模型的复制方法46-47
• 4.2.2 实验剂量的确定及供试药物的制备47
• 4.2.3 分组处理47
• 4.2.4 观察指标47
• 4.3 统计学分析47-48
• 4.4 结果48-49
• 4.4.1 大鼠体重变化48
• 4.4.2 细菌培养及鉴定48-49
• 4.4.3 肠道细菌易位率及组织细菌含量49
• 4.5 本章小结49-50
• 第五章 美洲大蠊提取物对NIH3T3成纤维细胞功能的影响50-58
• 5.1 主要仪器与试剂50-52
• 5.1.0 仪器50
• 5.1.1 试剂50
• 5.1.2 主要试剂的配置50-51
• 5.1.3 细胞培养51
• 5.1.4 供试药物的制备51-52
• 5.2 方法52-53
• 5.2.1 最佳接种浓度确定52
• 5.2.2 最佳培养时间的确定52
• 5.2.3 细胞增殖的测定52
• 5.2.4 胶原合成量的测定（羟脯氨酸试剂盒法）52-53
• 5.2.5 细胞总蛋白含量测定（考马斯亮蓝染色法）53
• 5.2.6 体外细胞迁移能力53
• 5.3 统计学处理53-54
• 5.4 结果54-57
• 5.4.1 最佳接种浓度的确定54
• 5.4.2 最佳培养时间的确定54-55
• 5.4.3 PAE各极性部位对NIH3T3增殖的影响55
• 5.4.4 PAE各极性部位对NIH3T3胶原合成的影响55-56
• 5.4.5 PAE各极性部位对NIH3T3总蛋白含量的影响56
• 5.4.6 PAE对NIH3T3迁移的影响56-57
• 5.5 本章小结57-58
• 第六章 美洲大蠊提取物对免疫低下小鼠的免疫增强作用58-66
• 6.1 实验仪器与试剂58-60
• 6.1.1 仪器58-59
• 6.1.2 试剂59
• 6.1.3 实验动物59
• 6.1.4 相关溶液的配置59-60
• 6.2 实验方法60-62
• 6.2.1 实验剂量的确定及供试药物的制备60
• 6.2.2 实验分组与给药60
• 6.2.3 相关考察指标60-62
• 6.3 统计学处理62
• 6.4 实验结果与分析62-65
• 6.4.1 PAE各极性部位对小鼠体重的影响62-63
• 6.4.2 PAE各极性部位对小鼠免疫器官重量的影响63
• 6.4.3 PAE各极性部位对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响63-64
• 6.4.4 PAE各极性部位对小鼠淋巴细胞增殖的影响64
• 6.4.5 PAE各极性部位对小鼠血清溶血素水平的影响64-65
• 6.5 本章小结65-66
• 第七章 全文总结与展望66-68
• 7.1 主要结论66
• 7.2 创新点66-67
• 7.3 展望67-68
• 参考文献68-77
• 致谢77-78
• 攻读硕士期间发表的论文78

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