谈细胞因子五味子多糖的提取纯化及其对肠道免疫功能的影响硕士论文答辩技巧

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谈细胞因子五味子多糖的提取纯化及其对肠道免疫功能的影响硕士论文答辩技巧

论文导读：

摘要：近年来，大量的探讨表明五味子多糖具有多种生理保健功能，但是，五味子多糖对肠道免疫功能的影响尚不清楚。本探讨从五味子干果为主要原料，采取超滤的办法制备了具有较高纯度的五味子精多糖，探讨了五味子精多糖诱导肿瘤细胞凋亡，从及对小鼠肠道免疫调节的意义。主要探讨结果如下：1.确定五味子精多糖的最佳制备工艺。五味子干粉脱脂后，于55℃热水中浸提2h；将提取液通过100Ku的超滤膜进行分离纯化，最佳的超滤压力是0.207Mpa，操作温度为20℃，超滤时间30min膜通量基本稳定；超滤液除去蛋白后经过巴氏灭菌和冻干后得到平均分子量为210ku的五味子精多糖。2.将制备的五味子精多糖溶于培养基使终浓度分别为0、0.05、0.1、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2mg/L意义于SMMC7721肝癌细胞，结果显示，在短时间处理（24~48h）时，五味子多糖对肝癌细胞没有明显的抑制生长意义(P＞0.05)，较高剂量在24h时甚至有一定推动增殖意义，在较长处理时间（72h）时，五味子多糖体现明显的肝癌细胞生长抑制和推动凋亡意义(P＜0.05)，其剂量大小与细胞生存率呈负相关。吖啶橙、溴化乙锭染色多糖意义肝癌细胞72h显示，空白组细胞几乎都呈绿色，形态完整，贴壁生长，多糖浓度0.05、0.5、2.0mg/L组别的橙黄色死亡细胞数量显著增多，细胞的形态和大小杂乱无章，贴壁生长的细胞边缘变得模糊不清，细胞发生凋亡现象，并与剂量呈正相关，进一步说明了五味子精多糖能够抑制SMMC7721肝癌细胞的生长。3.分别利用高（500mg/Kg d）、中（200mg/Kg d）、低剂量（50mg/Kg d）五味子多糖粉对BALB/c小鼠进行灌胃15天。小肠肠液中SIgA、小肠组织中各主要细胞因子含量经过前7天左右波动期后，基本处于稳定。在前七天免疫应答高峰期，IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10等细胞因子先后出现峰值，小鼠肠道黏膜免疫体系先后出现细胞免疫占主导地位、体液免疫占主导地位后免疫应答逐渐趋缓。10~15天长期灌胃结果显示：五味子精多糖可从推动肠道SIgA的分泌量，其SIgA的含量与剂量呈正相关。流式细胞仪对肠系膜淋巴结（MLN）的T淋巴细胞表型分析显示，高、中剂量组均能明显增大CD3+CD4+与CD3+CD8+比例，结合之前细胞因子和SIgA含量变化，推断高、中剂量的五味子多糖

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谈细胞因子五味子多糖的提取纯化及其对肠道免疫功能的影响硕士论文答辩技巧(2)

论文导读：

是依靠增多CD3+CD4+表型辅助性T细胞不同亚群细胞数量来增大该比例的，其中高剂量组可从增多Th2亚群的细胞数量和活性，中剂量组可从增多Th1、Th2亚群细胞活性和数量，低剂量组的CD3+CD4+与CD3+CD8+比例同对照组差别不明显(P＞0.05)，但可从增多Th1、Th2细胞的活性。4.中剂量（200mg/Kg d）、低剂量（50mg/Kg d）五味子多糖灌胃可从推动肠道黏膜免疫水平，同时提升体液免疫和细胞免疫能力，，保持肠道免疫平衡，对抵抗外界异物感染、保证机体肠道健康最为有利；高剂量组（500mg/Kg d）可提升肠道体液免疫水平，但造成了肠道细胞免疫受到抑制，机体对外界异物不敏感，不利于机体肠道健康。 关键词：五味子