siRNA干扰EGFR表达对食管鳞癌和腺癌放射敏感性影响

发布时间：2016-08-06 21:04

  本文关键词：郝迎旭教授中医药防治肿瘤化疗毒副反应临证经验总结及临床研究，由笔耕文化传播整理发布。

《福建医科大学》 2015年

siRNA干扰EGFR表达对食管鳞癌和腺癌放射敏感性影响

邱子丹  

【摘要】：目的探讨小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)抑制表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达对食管鳞癌和食管腺癌放射敏感性的影响。方法体外培养食管鳞癌ECa109和食管腺癌OE19细胞株作为研究对象。脂质体lipo2000介导化学合成的带荧光Cy3-si RNA、不同序列EGFR-si RNA(EGFR-si RNA1:UGAUCUGUCACCACAUAAUUACGGG,CCCGUAAUUAUGUGGUGACAGAUCA;EGFR-si RNA2:UUAGAUAAGACUGCUAAGGCAUAGG,CCUAUGCCUUAGCAGUCUUAUCUAA;EGFR-si RNA3:UUUAAAUUCACCAAUACCUAUUCCG,CGGAAUAGGUAUUGGUGAAUUUAAA)和阴性-si RNA。通过荧光显微镜检测细胞转染效率,通过RT-PCR及Western blotting检测转染前后EGFR基因和蛋白的表达情况变化,CCK8法分析转染对两株细胞增殖活性影响,最终确定最优转染条件。设空白对照组、单纯照射组及EGFR-si RNA1照射组。采用克隆形成实验计算两株细胞存活率及放射增敏比,多靶单击模型和LQ模型绘制细胞存活曲线。流式细胞仪检测EGFR-si RNA联合放射对ECa109和OE19细胞各个时期(G0,G1,S,G2/M)的分布状态和细胞凋亡的影响。结果1.ECa109和OE19细胞均表达EGFR,转染Cy3-si RNA 4h后在荧光显微镜下观察发现两株细胞均易被转染,能满足实验要求;2.在最优转染条件下,通过RT-PCR和Western blotting检测得出EGFR-si RNA可明显下调两株细胞EGFR基因和蛋白的表达,且转染对细胞增殖抑制率低于5%;3.克隆形成实验结果显示,ECa109细胞经2、4、6、8Gy照射条件下EGFR si RNA组与对照组相比各剂量点SF明显下降(P值均小于0.05);而OE19细胞在相同处理条件下EGFR si RNA组与对照组相比各剂量点SF下降不明显(P值均大于0.05)。细胞存活曲线显示,无论ECa109或OE19细胞,EGFR-si RNA组细胞存活参数均低于对照组;ECa109和OE19细胞EGFR si RNA组与空白对照组相比,SERD0分别为1.40和1.01;4.流式细胞术分析结果显示,6Gy X线照射后细胞培养24h,发现单纯照射可明显影响ECa109细胞周期分布和细胞凋亡(P0.05),表现为G2/M期增加及S期下降,细胞凋亡率升高,但对OE19细胞周期分布和细胞凋亡影响较小(P0.05);干扰联合X线照射可使ECa109和OE19细胞周期分布和细胞凋亡均发生较大幅度改变,但对ECa109细胞影响更显著,其差异具有统计学意义。结论si RNA干扰EGFR表达对食管鳞癌和食管腺癌均起一定的放射增敏作用,但食管鳞癌比食管腺癌放射增敏性更显著,放射生物学改变更明显,体现在:更有效地抑制了细胞对亚致死性损伤的修复能力;明显影响细胞周期分布,使更多肿瘤细胞进入对放射敏感的G2/M期,并且较大幅度地增加细胞凋亡率。总之,干扰EGFR表达后食管鳞癌细胞株的放射敏感性显著高于食管腺癌细胞株。

【关键词】：
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.1
【目录】：

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