捏脊疗法对颈椎病模型大鼠椎间盘软骨细胞外基质及基质金属蛋白酶的影响

发布时间：2017-09-23 16:39

  本文关键词：捏脊疗法对颈椎病模型大鼠椎间盘软骨细胞外基质及基质金属蛋白酶的影响

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【摘要】：目的：观察捏脊疗法对颈椎病模型大鼠椎间盘软骨细胞外基质代谢及MMPs/TIMPs的影响。方法：40只健康的SD大鼠,雌雄各半,随机分为假手术对照组(简称假手术组)10只,造模组30只。造模组参照动静力失衡性颈椎间盘退变的造模方法进行造模；假手术组仅是将皮肤切开后直接缝合,并没有切断肌肉组织,仅当作空白对照。造模后的大鼠常规给予饲养3个月,再采用甲苯胺蓝进行染色,通过观察椎间盘组织的形态学结构改变,来判断造模的成功与否。确定造模成功后将造模组的大鼠,按照随机数字表法,分成模型对照组(简称模型组)、模型捏脊组(捏脊组)、模型莫比可组(简称莫比可组),每组各8只。捏脊组大鼠采用自制的松紧带进行固定,捏脊治疗手法如下：用一只手固定好大鼠而另一只手的示指与拇指的指腹同时轻轻地将大鼠脊柱两侧的皮肤提起,从脊中线的尾根部交替地捻动向前一直至“大椎”穴处为一次,总共14次；从第8次开始,用双手拇指的桡侧缘顶住大鼠的皮肤,示指与中指向前按,三指需同时提拿大鼠皮肤,双手从脊中线的尾根部交替地捻动向前一直至“大椎”穴,并且要做到捏三提一,力量要以大鼠较为平静且不吵闹为度,每天捏脊治疗一次,连续2周为一个疗程,间隔2天后,再开始进行下一个疗程,总共有2个疗程。莫比可组每天给予莫比可片按0.7878 mg/kg进行灌胃干预,治疗的疗程与捏脊组一致；假手术组与模型组只做固定不予其它的治疗处理,其固定的时间与捏脊组一致。治疗结束后,取椎间盘,通过免疫组织化学法检测颈椎间盘软骨细胞内MMP-1、MMP-3、MMP-13,TIMP-1, COL-Ⅱ的表达,采用Western blot半定量检测法检测椎间盘软骨细胞内的ECM蛋白表达水平。结果：(1)甲苯胺蓝染色：在假手术组中,软骨终板的染色呈深蓝紫色,软骨的终板厚度较厚,软骨细胞的数目较多,软骨细胞的细胞外基质也较丰富。而在造模组中,软骨终板的染色变淡,厚度变薄,软骨细胞的数目以及细胞外基质变少。(2)免疫组织化学检测：与假手术组的相比,模型组中MMP-1、MMP-3、MMP-13表达均升高,COL-Ⅱ、 TIMP-1表达均降低,差异均有统计学意义(P0.05)；与模型组比较,捏脊组与莫比可组中MMP-1、MMP-3、MMP-13的表达量均减少,COL-Ⅱ、 TIMP-1表达均升高,差异均有统计学意义(P0.05)。(3) Western blot检测：与假手术组进行比较,在模型组中大鼠的椎间盘软骨组织中ECM蛋白表达量显著性降低,差异具有统计学意义(P0.05)；而捏脊组与莫比可组中的ECM蛋白表达量较模型组中的均升高,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论：(1)捏脊疗法能够有效抑制退变的大鼠颈椎间盘软骨细胞中MMP-1、MMP-3以及MMP-13的表达。(2)捏脊疗法能够有效促进退变的大鼠颈椎间盘软骨细胞中ECM、TIMP-1、COL-Ⅱ蛋白的表达。(3)捏脊疗法可能是通过调节了MMPs/TIMPs的平衡从而影响椎间盘软骨细胞外基质的代谢,进而达到延缓颈椎间盘退变的目的。
【关键词】：捏脊疗法 颈椎病 COL-Ⅱ MMPs/TIMPs ECM
【学位授予单位】：福建中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R244.1;R-332
【目录】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 材料与方法12-19
• 1 实验材料12-13
• 1.1 实验动物12
• 1.2 主要实验仪器12
• 1.3 主要实验药物12
• 1.4 主要实验试剂12-13
• 2 实验方法13-19
• 2.1 实验分组13
• 2.2 动物造模13
• 2.3 造模是否成功的验证13-14
• 2.4 干预方法14-15
• 2.5 标本的采集与处理15
• 2.6 免疫组织化学法检测15-16
• 2.7 Western Blot法检测16-18
• 2.8 统计学处理18-19
• 结果19-28
• 1 免疫组化检测19-26
• 1.1 各组大鼠椎间盘软骨细胞中MMP-1、MMP-3以及MMP-13表达的比较19-23
• 1.2 各组大鼠椎间盘软骨细胞中COL-Ⅱ表达的比较23-24
• 1.3 各组大鼠椎间盘软骨细胞中TIMP-1表达的比较24-26
• 2 各组大鼠椎间盘软骨组织中ECM蛋白表达的比较26-28
• 讨论28-34
• 1 颈椎病的发病机制28-29
• 2 捏脊疗法治疗颈椎病的相关中医依据29
• 3 捏脊疗法治疗颈椎病的相关现代医学依据29-30
• 4 细胞外基质对颈椎间盘退变的影响30-31
• 5 MMPs/TIMPs对细胞外基质的影响31-34
• 结论34
• 不足与展望34-35
• 参考文献35-39
• 附录39-40
• 致谢40-41
• 文献综述41-45
• 参考文献43-45
• 作者简历45

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本文编号：906355