大鼠皮肤切创后E-选择素表达及死后稳定性研究

发布时间：2018-01-28 20:40

  本文关键词： 免疫组织化学 E-选择素 皮肤切伤 死后稳定性　出处：《重庆医科大学》2009年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】： 研究背景及目的:皮肤作为人体最大的器官,与外界直接接触,对机体具有重要的屏障和保护作用,其最易遭受机械性损伤.在法医学实践中,皮肤损伤时间的推断常是法医工作者需要解决的关键问题。正因为如此,关于皮肤损伤时间推断方面的研究,一直以来是国内外法医病理学者的研究热点问题之一。E-选择素是细胞粘附分子(adhesion molecule,AM)中选择素家族(selectin family,SF)成员之一。在体内分布非常局限,主要由毛细血管、后微静脉的内皮细胞分泌,其胞内无储存。它只在外伤、炎症等刺激后在血管内皮细胞表面表达,且具有特异性。E-选择素产生后,参与记忆T淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞的聚集,以及内皮细胞增殖、迁移、管状形成和毛细血管的生成,但最主要是介导血液中中性粒细胞粘附。E-选择素参与损伤早期修复作用,目前国内外对E-选择素的研究多侧重于临床方面,而对于它在法医学领域方面对皮肤损伤后不同时间的表达变化及死后稳定性的研究甚少。尤其是国内对E-选择素在皮肤机械性损伤修复时间的推断方面几乎未见报道。本研究通过建立大鼠皮肤切创损伤模型,运用免疫组化技术及其阳性细胞计数法对损伤组织进行E-选择素的检测与分析,探讨在皮肤创伤愈合过程中其表达的时序性变化规律,以及死后稳定性状况,有可能为法医病理学皮肤损伤时间的推断,鉴别生前伤和死后伤提供一个新的理论依据。 方法:采用完全随机分组方法,分为实验组和对照组。实验组又分为生前造创组、死后造创组、死后稳定性-20℃和25℃组。根据造创后处死时间不同,将实验大鼠随机分为伤后30min、1h、2h、3h、5h、7h、9h、12h、1d、3d、5d、7d共12亚组;死后造创组分为0.5h,1h,3h共3亚组;另设一组为正常对照组,即未造创组。生前造创组在大鼠头部制做全层切创,在预定时间分别颈椎脱臼法处死后即刻取材;死后造创组于处死大鼠后在预定时间造创取材。死后稳定性组中将大鼠造创后于1d将它们颈椎脱臼法处死。随机分为14亚组,其中9亚组置于-20℃环境中,于6h、12h和1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d取材;另5亚置于25℃环境中,于6h、12h和1d、2d、3d取材。取材皮肤组织用多聚甲醛-PBS液中固定后,石蜡包埋切片,进行常规HE染色光镜观察;采用免疫组织化学染色法进行E-选择素染色,采用SPSS11.0统计软件包对所得数据进行统计分析。 结果:1、HE染色观察:伤后1h,创口周围毛细血管扩张、充血,组织间水肿;伤后12h内,可见大量炎性细胞游出,主要以中性粒细胞浸润为主;伤后1～3d,肉芽组织逐渐形成并大量增生,炎性细胞以单核-巨噬细胞为主;伤后5～7d,肉芽组织成熟,成纤维细胞生成,炎性细胞消失,创口基本愈合。死后造创组及正常对照组镜下无上述改变。死后在-20℃下6小时至7d,皮肤损伤部位组织结构与断颈处死即刻基本一样,没有发生明显变化,在第6、7d可见其内极少数炎症细胞结构欠清晰,核固缩、粹裂,但边缘、组织结构较清楚;在25℃下,皮肤损伤部位组织中炎症细胞、部分组织细胞逐渐自溶;以至损伤边缘结构模糊不清。2、免疫组织化学SABC法染色观察:伤后1h,创缘周围毛细血管内皮细胞可见棕黄色阳性表达,以后持续升高,至伤后1d,阳性表达达到高峰;以后表达逐渐减弱,至伤后7d,仍可见有少量阳性表达。-20℃死稳定性组中,不同时间阳性表达与伤后1d处死即刻没有明显变化;25℃环境中,随着时间延长,组织及细胞的自溶,各亚组的表达情况与伤后1d处死即刻有明显变化,阳性表达逐渐减少,在2d时未见表达。在正常对照组及死后伤组中均未见E-选择素表达。3、阳性细胞计数法结果:阳性细胞率(PR值)在伤后1h到伤后1d逐渐上升,伤后1d达到高峰,伤后3d～7d,PR值逐渐下降。4、统计学处理结果:方差分析结果表明生前创伤各相邻两组之间E-选择素PR值相比均具有显著差异(P0.01)。其中生前创伤1d组与其他各时间组相比均有显著差异(P0.01)。 结论:大鼠皮肤切创后E-选择素可迅速增量表达,且与时间相关,呈一定规律性,呈上升-高峰-下降的时序变化;在伤后1d达到高峰。E选择素在生前及死后均不表达,选择素在皮肤创伤后表达的时序性变化规律并具有特异性,有望作为皮肤损伤发生后个体存活时间推断的一个客观有效的指标。且在死后E选择素表达稳定性与否受温度影响很大,在-20℃下,其稳定性好,但在25℃环境中,其稳定性差。
[Abstract]:Background and purpose: the skin is the largest organ in the body, direct contact with the outside world, with a barrier and an important protective effect on the body, the most vulnerable to mechanical injury. In forensic practice, skin injury time estimation is often the key issues of forensic practitioners need to solve. Because of this, the research on the skin the time of injury, has been a research focus at home and abroad scholars of forensic pathology.E- selectin is a cell adhesion molecule (adhesion, molecule, AM) in the selectin family (selectin family, SF). A member of the in vivo distribution is very limited, mainly composed of capillaries, venules of endothelial cell secretion. No storage in the cells. It is only after trauma, inflammation stimulated expression in vascular endothelial cells, and the specificity of.E- selectin was produced, in memory T cells, monocytes, eosinophils Neutrophils and basophils aggregation, and endothelial cell proliferation, migration, tube formation and capillary formation, but the most important is mediated by blood neutrophil adhesion.E- selectin is involved in the repair of early damage, both at home and abroad on the study of E- focused on the clinical aspects, and to learn it in the field of forensic Research on expression and death in different time after skin injury after stability is little. Especially for the domestic E- selectin in time to repair the skin mechanical injury that was rarely reported. This study established a rat skin wound injury model, using immunohistochemical technique and positive cell counting method E- choice of detection and Analysis on tissue injury, to investigate the healing time regularity of its expression in the process of skin wound, and after the death of stability condition, are possible for the method A new theoretical basis is provided to identify the time of pathological skin injury and to differentiate between pre - and postmortem injuries.
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本文编号：1471509