Rotor-Gene链融解曲线法甲基化标记筛选技术的建立

发布时间：2018-03-14 15:26

  本文选题：DNA甲基化　切入点：链融解曲线法　出处：《郑州大学学报(医学版)》2008年01期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的:建立基于Rotor-Gene的链融解曲线法的甲基化标记筛选技术,分析各种影响因素,评估其实用性。方法:克隆Hela细胞雄激素受体基因外显子-1的Bisulfite-PCR产物,挑出经测序证实的可以代表不同甲基化程度的一组质粒,并以之为模板,在Rotor-Gene3000实时定量PCR仪进行扩增和链融解,分析融链温度、链融解曲线与甲基化程度、甲基化模式的相关性及各种影响因素。结果:基于Rotor-Gene的链融解曲线法,不仅可以区分甲基化与非甲基化,而且能够鉴别片段内细微的甲基化差异;主要的影响因素有升温幅度、缓冲液离子强度、产物浓度等。结论:基于Rotor-Gene的链融解曲线法,可以集扩增和链融解于一体,是一种经济简便的甲基化分析技术,可用于样品的甲基化筛选。
[Abstract]:Aim: to establish a methylation marker screening technique based on Rotor-Gene chain fusion curve, analyze various influencing factors and evaluate its practicability. Methods: Bisulfite-PCR products of androgen receptor gene exon 1 were cloned from Hela cells. A group of plasmids identified by sequencing as representing different levels of methylation were selected and used as templates for amplification and chain fusion using Rotor-Gene3000 real-time quantitative PCR apparatus to analyze the melting chain temperature, chain melting curve and methylation degree. Results: the chain fusion curve method based on Rotor-Gene could not only distinguish methylation from demethylation, but also distinguish the slight difference of methylation within segments. Conclusion: the chain melting curve method based on Rotor-Gene can integrate amplification and chain fusion. It is an economical and simple methylation analysis technique and can be used for methylation screening of samples.
【作者单位】： 华中科技大学同济医学院法医学系 河南科技大学法医学院 河南科技大学法医学院 华中科技大学同济医学院法医学系 华中科技大学同济医学院法医学系
【分类号】：D919

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：1611802