亚急性MA中毒大鼠相关脑区多巴胺能神经毒性研究
发布时间：2018-03-17 03:16
本文选题：亚急性甲基苯丙胺中毒Wistar大鼠模型 切入点：酪氨酸羟化酶 出处：《昆明医学院》2009年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】： 目的:建立亚急性甲基苯丙胺中毒大鼠模型(Rat Subacute MethamphetamineIntoxication Model),观察亚急性MA中毒大鼠行为学改变和脑内多巴胺能神经毒性的变化,探讨亚急性MA中毒大鼠行为学改变的神经生物学基础以及MA中毒多巴胺能神经毒性的损伤机制。 方法:腹腔注射甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)建立雄性Wistar大鼠亚急性MA中毒模型90只,随机分为对照组(n=30只)、低剂量组(n=30只)和高剂量组(n=30只)。实验组分别腹腔注射MA10mg/kg和20mg/kg,给药时间为20:00时,qd×4d;对照组相应给予同等剂量的生理盐水。观察并记录大鼠刻板行为以及条件位置偏爱性结果。分别于末次给药后1天,7天,14天处死实验大鼠,用抗酪氨酸羟化酶(tyrosinehVdroxylase,TH)和抗多巴胺-β-羟化酶(抗DBH)单克隆抗体,行免疫组化(S-P法),联合标记中脑黑质致密区(SNC)、中脑腹侧被盖区(VTA)、前额叶皮质(PFC)、尾壳核(CPu)、伏隔核(NAc)、杏仁核(AM)以及海马(Hi)七个脑区的多巴胺能神经元和神经纤维,进行定性及半定量检测。用光镜对大鼠中脑SNC和VTA的TH阳性细胞进行观察和计数,并对PFC,CPu,NAc,Hi,AM的TH阳性纤维密度和强弱进行定性和半定量检测;用图像分析系统对上述脑区的TH阳性细胞和TH阳性神经纤维进行定量分析;并利用多巴胺标准比对品,采用荧光分光光度计对七个脑区进行多巴胺的定量检测。 结果:(1)亚急性甲基苯丙胺中毒大鼠模型建立成功。刻板行为与对照组相比,高低剂量组均具有显著差异性(P＜0.05),并且高剂量组与低剂量组相比,差异亦具有显著性(P＜0.05)。CPP测试结果,与对照组相比,除低剂量d1组差异具有显著性(P＜0.05)外,其余各组在实验偏爱侧停留时间虽有不同程度的延长,但差异无显著性(P＞0.05)。 (2)黑质致密区和腹侧被盖区TH阳性细胞图像分析结果:黑质致密区和腹侧被盖区TH免疫反应阳性表达,低剂量d1组,出现一过性的升高(p＜0.05),d7组降低(P＜0.01),d14组有所恢复,差异无显著性(P＞0.05)。与对照组相比,高剂量组TH免疫反应阳性降低,差异具显著性(p＜0.05),d1组开始降低(p＜0.05),d7组达到低谷(p＜0.01),d14天组黑质致密区和腹侧被盖区TH免疫反应阳性有不同程度的恢复(P＜0.05)。 (3)中脑黑质致密区和中脑腹侧被盖区TH阳性细胞计数分析结果:黑质致密区TH阳性细胞数,与对照组相比,低剂量d1组增多(p＜0.05),低剂量d7组回减(p＜0.01)、d14组基本恢复(P＞0.05)。高剂量d1组开始减少(p＜0.05),d7组达到低谷(p＜0.01),d14组仍未恢复(P＜0.05)。在腹侧被盖区TH阳性细胞数,与黑质致密区TH阳性细胞数的变化基本相同,与对照组相比,低剂量d1组增多(p＜0.05),低剂量d7组回减(p＜0.01)、d14组基本恢复(P＞0.05)。高剂量d1组开始减少(p＜0.05),d7组达到低谷(p＜0.01),d14组仍未恢复(P＜0.05)。 (4)尾壳核、前额叶皮质、伏隔核、杏仁核以及海马TH阳性纤维图像定量分析结果:与对照组相比,低剂量d1天组尾壳核TH阳性免疫反应增强(p＜0.05),d7组阳性反应减弱(p＜0.01),d14组有所恢复。与对照组相比,高剂量组TH免疫反应阳性均减低(p＜0.05),d7组阳性反应最弱(p＜0.01),d14组仍未恢复(P＜0.05)。伏隔核、杏仁核与前额叶皮质TH免疫反应阳性的变化与尾壳核的变化基本一致,但程度较轻,伏隔核、杏仁核低剂量d14组基本恢复(P＞0.05),而前额叶皮质与海马低剂量d14组有所恢复但无统计学意义(P＜0.05)。 (5)前额叶皮质、尾壳核、伏隔核、杏仁核及海马TH阳性纤维密度和强弱半定量分析结果:与上述TH阳性纤维图像定量分析结果基本一致。 (6)黑质致密区、腹侧被盖区、尾壳核、伏隔核、前额叶皮质、杏仁核以及海马荧光分光光度计检测DA递质含量结果:与上述免疫组化结果基本一致。 (7)各脑区免疫组化,DBH反应均为阴性。各脑区TH免疫组化结果以及DA含量检测结果均呈剂量依赖性变化。 结论:1大鼠黑质致密区、腹侧被盖区、前额叶皮质、尾壳核、伏隔核、杏仁核以及海马TH阳性表达和各脑区的DA含量,除低剂量d1组一过性升高外,其余各组均出现不同程度的减低,并呈剂量依赖性改变。据此推测: 1.1亚急性MA中毒大鼠,行为学改变与黑质—纹状体多巴胺神经系统的TH活性以及DA递质含量的变化有关。 1.2亚急性MA中毒大鼠,精神活动异常(CPP效应)与中脑边缘多巴胺神经系统的TH活性以及DA递质含量的变化有关。 1.3 MA的药物依赖作用,可能与多巴胺神经系统的可塑性变化有关。 2、亚急性MA中毒,大鼠各脑区DA递质含量的变化与TH的变化结果基本一致。 3、亚急性MA中毒多巴胺能神经系统毒性作用可能与以下分子生物学机制有关:①DA神经系统的可塑性变化;②DA参与MA对神经元的兴奋性毒性作用;③DA与其他神经递质的相互关系等。
[Abstract]:Objective: to establish a rat model of subacute poisoning of methamphetamine (Rat Subacute MethamphetamineIntoxication Model), to observe the changes of sub acute MA poisoning rat behavior change and brain dopaminergic neurotoxicity, on sub acute MA poisoning rat behavior change the neurobiological basis and poisoning of MA dopaminergic neurotoxicity injury mechanism.
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本文编号：1622917
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