大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤后Rac1及Nox1的表达变化

发布时间：2018-06-18 10:09

  本文选题：脑卒中 + MCAO/R　； 参考：《皖南医学院》2017年硕士论文

【摘要】：目的:探讨Rac1及Nox1在大鼠大脑中动脉缺血再灌注(Middle Cerebral Artery Ischemia-Reperfusion,MCAO/R)损伤中通过氧化应激途径参与缺血再灌注损伤的作用机制。方法:本实验采用SD雄性大鼠70只,随机分为假手术组(n=5)及MCAO/R组(n=65),MCAO/R组用改良的Zea-Longa法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型。造模后采用Longa评分法对大鼠神经行为学进行评分,观察大鼠神经功能缺损。分别于再灌注3h、6h、12h、24h、2d、3d、5d、7d后断头处死大鼠,取脑组织用0.2%TTC染液进行染色。测量不同时间组脑梗死体积百分比,观察MCAO/R损伤模型的稳定性。造模稳定后分别于再灌注3h、6h、12h、24h、2d、3d、5d、7d将大鼠处死,断颈取脑组织。采用HE染色观察脑组织缺血再灌注损伤后的形态学改变,然后采用免疫组织化学法和Western-Blot技术检测Rac1、Nox1蛋白的表达。对检测结果进行统计分析,比较Rac1、Nox1蛋白在各组脑组织中的表达差异及其二者表达的规律性。结果:1.TTC染色结果显示再灌注不同时间大鼠脑梗死体积百分比呈现一定的规律,随再灌注时的延长(12h~3d)脑梗死体积百分比逐渐增加(P0.05),5d~7d后逐渐降低(P0.05)。2.显微镜下观察HE染色结果显示,与假手术组比较,再灌注3h和6h出现神经细胞肿胀改变,再灌注12h-3d神经细胞发生不同程度的损伤、坏死、崩解、消失,红细胞散在分布于血管周围脑组织中,再灌注5d组脑组织梗死区可见神经元数量减少,胶质细胞增生,血管壁炎性细胞浸润,再灌注7d组毛细血管内皮细胞增生、出芽形成新生毛细血管。3.免疫组织化学检测结果显示,缺血再灌注损伤后Rac1蛋白主要在神经细胞胞核中表达呈强阳性,Nox1蛋白主要在神经元及血管内皮细胞上表达。与假手术组比较,海马Rac1于再灌注3h出现阳性表达,再灌注24h达到高峰后开始下降(P0.05);皮质Rac1于再灌注6h出现阳性表达,再灌注2d达到高峰后下降(P0.05);海马部位Nox1蛋白阳性表达明显较皮质部位低,海马部位于再灌注24h Nox1蛋白阳性表达增加,再灌注24h后降低;皮质部位于再灌注6h Nox1蛋白阳性表达上升,再灌注6h后逐渐下降,再灌注5~7d后Nox1蛋白表达逐渐上升(P0.05)。实验结果表明,Rac1及Nox1蛋白表达在空间上具有特异性,且海马部位Rac1蛋白阳性表达较皮质部位Rac1蛋白出现的早,海马部位Rac1蛋白阳性表达较Nox1蛋白出现的早。4.Western-Blot检测结果提示MCAO/R组Rac1蛋白较假手术组表达上调,且海马及皮质部位Rac1蛋白的表达均随再灌注时间的延长逐渐上升,达高峰后又逐渐下降,但皮质部位Rac1蛋白的表达晚于海马。与假手术组比较,海马部位Nox1蛋白在再灌注24h表达量显著增高,其余时间组表达水平差异并不明显,但均较假手术组表达量增高。再灌注后皮质部位Nox1蛋白于再灌注6h骤然上升,再灌注6h后逐渐下降至正常水平以下,再灌注5~7d后皮质部位Nox1蛋白表达逐渐上升(P0.05)。结论:1.根据TTC染色梗死体积百分比判断MCAO/R造模的稳定性,发现梗死体积百分比可能随着再灌注时间的延长先上升后下降的趋势。2.以假手术组为对照,大鼠脑缺血再灌注损伤后组织形学主要为神经细胞损伤、凋亡、坏死及水肿等改变。3.与假手术组对比,缺血再灌注损伤后Rac1蛋白主要在神经细胞胞核中表达呈强阳性,Nox1蛋白主要在神经元及血管内皮细胞中表达,大鼠大脑缺血再灌注损伤后Nox1蛋白及Rac1蛋白表达在空间上具有特异性,且随着再灌注时间的延长出现Nox1蛋白表达随Rac1蛋白表达增加而上升的趋势,Rac1可能是Nox1蛋白表达的重要调控因子,其通过调控Nox1生成氧自由基参与缺血再灌注后氧化应激过程。4.皮质部位Nox1蛋白于再灌注早期表达先增加后降低而再灌注晚期又上升的趋势表明Nox1蛋白不仅仅参与到再灌注早期脑组织损伤的过程,还可能参与到缺血再灌注损伤后期脑组组损伤修复的过程当中。研究脑卒中缺血再灌注损伤的发生发展过程,对缺血再灌注损伤的理论研究及临床治疗药物的研发有非常重要的意义。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of Rac1 and Nox1 on ischemia - reperfusion injury by oxidative stress pathway in middle cerebral ischemia - reperfusion injury . The rats were sacrificed at 3h , 6h , 12h , 24h , 2d , 3d , 5d and 7d after reperfusion . Compared with sham operation group , the expression of Nox1 protein in cerebral ischemia - reperfusion injury increased gradually after reperfusion for 6 hours .
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：D919

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本文编号：2035112