咖啡因对乳鼠脑皮质神经元凋亡的作用

发布时间：2019-07-16 21:26

【摘要】：目的考察咖啡因对乳鼠脑皮质神经元凋亡的作用。方法取出生后2~3d的乳鼠脑皮质神经元,在37℃、5%CO2、100%相对湿度的培养箱中培养7d后,分别加入终浓度为300μmol/L和1 000μmol/L的盐酸咖啡因培养液,继续培养6~36h后,流式细胞仪测定细胞内钙离子浓度、线粒体膜电位和细胞凋亡率,酶标仪测定Caspase-9的活性,电镜和Hoechst 33258荧光染色观察细胞的形态学改变。结果与正常组相比较,300μmol/L和1 000μmol/L盐酸咖啡因组在给药后6h的钙离子平均荧光强度明显增强(P0.05),由正常值43.13±2.02分别增加到45.28±1.16和46.92±1.99;在给药后8h的线粒体膜电位下降最明显(P0.05),由正常值443.58±11.77分别下降到289.53±16.47和165.14±14.72;在给药后10h的Caspase-9活性最高(P0.05),由正常值1.00±0.000分别增加到5.33±1.02和8.33±0.92;在给药后36h的细胞凋亡率明显升高(P0.05),由正常值4.94±1.74分别增加到15.98±2.03和18.70±2.09;在给药后24h荧光显微镜下见典型凋亡小体。结论咖啡因对乳鼠脑皮质神经元凋亡有促进作用。
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图片说明： CH IN J FORENS IC MED　2009年第24卷第6期位的变化,具有时间和剂量依赖性(图1)。表2　咖啡因对神经元凋亡率的影响(n=12)Table2　Effects of caffeine on the rate ofapoptosis in neurons (n=12)检测时间神经元凋亡率(% )对照组实验Ⅰ组实验Ⅱ组12h 2. 55±1. 52 5. 23±1. 34*7. 55±1. 80*24h 3. 79±1. 25 7. 69±1. 74*10. 53±2. 14*36h 4. 94±1. 74 15. 98±2. 03*　18. 70±2. 09**与对照组相比P<0. 01;*P<0. 01, as compared with controlgroup图1　神经元内线粒体膜电位的变化(n=12)Fig1　The change ofm itochondrialm embranepotentials in neurons(n=12)2. 2. 4　神经元凋亡相关蛋白　Caspase-9活性检测与正常组相比较,实验组在加入咖啡因应用液10h时,Caspase-9的活性最高, 12h时有所下降,但仍高于正常组(P<0. 01),提示咖啡因引起脑皮质神经元凋亡相关蛋白Caspase-9活性的变化,且具有时间和剂量依赖性(图2)。图2　神经元内半胱天冬酶活性的变化(n=12)Fig2　The change ofCaspase-9activities in neurons(n=12)3　讨　论本实验以乳鼠大脑皮质神经元原代培养作为研究对象
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图片说明： 正常组(P<0. 01),提示咖啡因引起脑皮质神经元凋亡相关蛋白Caspase-9活性的变化,且具有时间和剂量依赖性(图2)。图2　神经元内半胱天冬酶活性的变化(n=12)Fig2　The change ofCaspase-9activities in neurons(n=12)3　讨　论本实验以乳鼠大脑皮质神经元原代培养作为研究对象,观察和了解咖啡因对其影响。电镜及荧光显微镜对神经元形态学动态观察结果表明:在咖啡因终浓度300~1 000μmol/L剂量范围内,神经元出现明显的凋亡。通过本研究可以观察到,加入终浓度300~1000μmol/L咖啡因应用液6h时,神经元内钙离子活性与对照组相比明显增高,其后逐渐下降。说明钙离子活性增高是咖啡因引起神经元凋亡发生的一个早期事件。给药8h时,神经元线粒体膜电位与对照组相比明显下降,其后逐渐上升。说明咖啡因对神经元线粒体产生了损伤
【作者单位】： 中国刑事警察学院法医学系;沈阳市公安局交警支队;中国人民公安大学;
【分类号】：D919.1

【参考文献】

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本文编号：2515265