DNA甲基化转移酶活性检测及其抑制剂筛选的电化学生物传感方法研究
本文关键词：DNA甲基化转移酶活性检测及其抑制剂筛选的电化学生物传感方法研究 出处：《重庆医科大学》2015年硕士论文 论文类型：学位论文
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【摘要】：目的：DNA甲基化是表观遗传学的一种重要表现形式,它是通过DNA甲基化转移酶催化甲基从供体上转移到目标核酸上这一反应来完成的,甲基化转移酶在这一过程中起到了非常重要的作用,它的量和活性直接影响DNA甲基化的水平。DNA甲基化转移酶的异常表达已经在多种肿瘤细胞中被发现。DNA甲基化转移酶抑制剂在抗生素和抗癌治疗方面均有应用潜力。本研究的目的在于,利用纳米材料的优良性能,制备特异灵敏的电化学生物传感器,用于DNA甲基化和DNA甲基化转移酶活性检测,并对DNA甲基化转移酶抑制剂的抑制效果进行分析。方法：1.DNA S3-AuNPs生物复合物的制备：先制备稳定的AuNPs,利用DNA S3与AuNPs之间形成的稳固的Au-S键将两者结合在一起,并用TEM和UV-vis方法进行表征。2.电化学生物传感器的制备：依次对预处理后的金电极修饰DNA S1、MCH、BSA、DNA S2、 DNA S3-AuNPs,并对每一步修饰结果用电化学方法进行表征。3.优化电化学生物传感器的重要实验条件：甲基供体SAM的浓度、限制性核酸内切酶Mbo I的浓度。4.考察电化学生物传感器性能：可行性、特异性、线性范围、最低检测限、对抑制剂抑制效果的分析、精密度、重复性和稳定性等。结果：1.对制备所得的AuNPs和DNA S3-AuNPs进行形态学和光谱学分析,在TEM中可见AuNPs呈球状,均匀分散,DNA S3-AuNPs与AuNPs几乎无区别；在UV-vis曲线中可见DNA S3-AuNPs的吸收峰比AuNPs的吸收峰红移了5 nm,表明DNA S3-AuNPs制备成功。2.对电化学生物传感器的每一步修饰结果用电化学方法进行表征,CV与EIS共同表明电极的每一步修饰都是成功可靠的。3.重要实验条件的优化：SAM最佳浓度为80μM, Mbo I最佳浓度为50 U/mL。4.电化学生物传感器各项性能：可用于灵敏特异地检测Dam MTase,并能对其抑制剂5-氟尿嘧啶进行检测分析；线性范围是0.075-30 U/mL；最低检测限是0.02 U/mL；精密度、重复性、稳定性均良好。结论：本研究表明,该电化学生物传感器可以用于对Dam MTase进行特异灵敏的检测分析,检测线性范围是0.075-30 U/mL,最低检测限是0.02U/mL；还可以对Dam MTase抑制剂5-氟尿嘧啶进行检测分析。本方案具有一定的通用性,只要改变相应的DNA序列,形成不同DNA甲基化转移酶的识别作用位点,就可以对其他DNA甲基化转移酶和其抑制剂进行检测分析。在与DNA甲基化相关的疾病诊断和药物发展方面具有巨大的应用潜力。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R440;TP212.3
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，本文编号：1348039
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