PAPP-A均相化学发光检测方法的建立和在ACS诊断中的初步应用

发布时间：2018-01-01 09:22

  本文关键词：PAPP-A均相化学发光检测方法的建立和在ACS诊断中的初步应用　出处：《天津医科大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的:新近研究发现PAPP-A是冠状动脉粥样斑块不稳定性的炎性生物标志物之一,血清PAPP-A的升高变化对急性冠脉综合征的早期诊断及预后具有一定价值。与孕妇血清PAPP-A不同,非孕血清中的PAPP-A以低水平存在,而目前使用的PAPP-A检测方法灵敏度较低,不适用非孕血清的检测。本研究采用活性氧传递免疫分析技术方法,建立适合检测ACS患者血清超敏PAPP-A水平的定量分析体系,评价分析方法的各项性能指标。在此基础上对ACS患者标本分组检测,实验研究在急性冠状动脉综合征患者血清中,PAPP-A是否对ACS具有较好的预测作用,对此类疾病危险分层和预后评估的价值。方法:制备生物素化PAPP-A抗体和抗体包被的受体微球,以双抗体夹心法与血清中PAPP-A结合,以光激化学发光分析方法检测PAPP-A浓度。通过改变加样模式、加样顺序,调整试剂比例和反应时间温度等方面,优化检测方法的反应条件。利用ELISA Cale软件建立四参数拟合方程的标准曲线,初步建立PAPP-A均相化学发光免疫检测方法。同时评价均相化学发光分析检测PAPP-A方法的灵敏度、精密度、准确性、稳定性等各项性能指标,初步推算正常人的参考范围。根据病程进展对急性冠脉综合征患者进行分组研究,比较各组ACS患者与对照组的PAPP-A水平有何差别,同时与其它ACS相关的指标进行分析,初步探讨PAPP-A与ACS之间的临床相关性。结果:确定PAPP-A检测方法:在96孔板中加入25ul生物素化抗体(1:2000),25ul受体球(1:100),25ul样本,于37℃孵育30min,避光条件下加入175ul供体微球,于37℃孵育10min测定信号值。此PAPP-A检测方法灵敏度为0.55m U/L,回收率在95%-100%;线性、稳定性及特异性良好;重复性:批内变异系数(CV)小于10%,批间CV小于15%;选择血红蛋白、甘油三酯和胆红素三种常见干扰因素对此检测方法的干扰较小。采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)与本实验建立的均相化学发光法检测30例(10例心梗患者,20例孕妇)血清标本,二者进行相关分析(r2=0.988,P0.05)。检测104例健康体检者(男/女:43/61,年龄:24-69岁)血清PAPP-A水平,初步推算参考范围为1.60—25.12m U/L。结论:本实验建立了一种适用于ACS患者以均相化学发光免疫分析技术检测血清低妊娠相关血浆蛋白A水平的方法。我们所建立的超敏PAPP-A检测方法准确性好,灵敏度、回收率、特异性较高,与时间分辨荧光免疫方法的相关性较高,通过检测小样本量健康人群的血清PAPP-A水平为其参考范围的确定提供了一定的依据,评价了此方法应用于临床检测的可行性。分析了各组间ACS影响因素的差异,对ACS相关的炎性指标进行讨论,并比较其相关性,初步讨论了超敏PAPP-A的检测在冠脉综合征患者中的分层评估的应用价值,而其作用机制及对ACS分层和预测的标准还需要进一步研究和探索。
[Abstract]:Objective : To study the relationship between PAPP - A and PAPP - A in patients with acute coronary syndrome ( ACS ) . Serum samples of 30 cases ( 10 patients with myocardial infarction and 20 pregnant women ) were detected by using time - resolved fluorescence immunoassay ( TRFIA ) and homogeneous chemiluminescence method established in this experiment ( r2 = 0.988 , P0.05 ) . The levels of serum PAPP - A in patients with ACS were determined by using homogeneous chemiluminescence immunoassay .

【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R446.6;R541.4

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