实时荧光环介导恒温扩增技术检测嗜麦芽窄食单胞菌方法的建立

发布时间：2018-07-16 10:46

【摘要】：目的建立嗜麦芽窄食单胞菌16S ribosomal RNA基因的实时荧光环介导恒温扩增(Real Amp)快速检测方法,为嗜麦芽窄食单胞菌的快速检测提供一种新的方法。方法针对嗜麦芽窄食单胞菌16S ribosomal RNA基因设计的特异性引物,利用链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)恒温反应60 min,通过实时检测荧光信号来检测嗜麦芽窄食单胞菌16S ribosomal RNA基因的扩增。结果筛选实验发现:在使用引物4时,出峰时间最短,故选择引物4进行后续实验操作。在11株相关菌株的检测中,除嗜麦芽窄食单胞菌出现很好的阳性外,其余菌株均为阴性。本研究检测嗜麦芽窄食单胞菌DNA的灵敏度可达到4.07×10-5ng/μL。重复性分析表明:同一样品重复检测3次,几乎同时出峰,扩增曲线几乎重叠,说明Real Amp的重复性良好。结论嗜麦芽窄食单胞菌的Real Amp检测方法稳定性高,反应快速,特异性强,具有较大的推广及应用前景,可用于嗜麦芽窄食单胞菌的快速检测。
[Abstract]:Results the results showed that primer 4 had the shortest peak time, so primer 4 was selected for further experiment. In this study, the sensitivity of detecting the DNA of Stenotrophomonas maltophilia was 4.07 脳 10-5ng/ 渭 L. The repeatability analysis showed that the same sample was detected 3 times, almost at the same time, and the amplification curve almost overlapped, which indicated that Real Amp had good reproducibility.
【作者单位】： 广州医科大学附属第三医院检验科;广州医科大学金域检验学院;
【基金】：广州市医药卫生科技一般引导项目(编号:20151A011083) 广州医科大学大学生科技创新项目(编号:2014A029) 大学生创新创业训练计划项目(编号:2015105700045)
【分类号】：R440

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本文编号：2126139