沙门氏菌快速检测技术方法学评估及临床应用研究

发布时间：2018-07-23 13:12

【摘要】：目的,对四种快速新型的沙门氏菌检测方法进行评估、比较及其临床应用研究,同时探索能够对沙门氏菌快速鉴定、分型、分析的最佳方法并建立和优化临床标本检测流程。方法,以生化反应联合血清凝集法为标准方法分别对胶体金法、质谱法、16Sr DNA法、CLSPT法结果、方法学、临床应用进行研究、比较和评估。应用沙门氏菌胶体金法试剂对65例临床腹泻患者粪便标本(其中沙门菌属感染20例,非沙门菌感染45例)及44株纯培养的沙门菌属菌悬液进行检测,评价胶体金试剂的检测性能。同时应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF-MS)16Sr DNA、CLSPT(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats locus spacer pair typing,CLSPT)方法对上述分离和纯培养的64株已知的沙门菌进行检测,统计鉴定符合率,并对各方法进行比较分析。结果,胶体金法敏感性100%,特异性98.7%,准确度99.3%,最低检出限1×106 cfu·ml-1;试剂可实现A~E不同亚群沙门氏菌检测,与其他肠道腹泻致病菌无交叉反应,且在4℃和37℃避光保存6个月,检测结果未发生改变。该检测试剂联合快速亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液能够很好的提高沙门菌检出率。质谱技术,质谱仪对沙门菌的属水平鉴定率达100%(64/64);血清型水平上,肠炎沙门菌符合率97.22%(35/36),鼠伤寒沙门菌为100%(17/17)。CLSPT结果,扩增片段在750bp左右,64株沙门菌经CLSPT方法检测结果肠炎沙门菌34株,碱基匹配率为97%-100%,鉴定符合率94.44%(34/36);鼠伤寒沙门符合率100%(17/17)。甲型副伤寒100%(2/2),乙型副伤寒100%(2/2)。16sr DNA结果,PCR片段碱基长度1500bp左右,检测出肠炎沙门菌35株,碱基匹配率为99%-100%,鉴定符合率97.22%(35/36);鼠伤寒沙门菌17株,鉴定符合率100%(17/17)。四种方法在属水平鉴定符合率无显著差异(P0.05),在种水平上MALDI-TOF-MS、16Sr DNA、CLSPT方法鉴定符合率无显著差异(P0.05),三种方法有较高的一致率,和比较满意的一致性。胶体金法与质谱技术法最为节省时间(见表4-9)。如两种方法联合应用可为临床提供快速准确报告,具有重要意义。结论,胶体金法使用非常方便,检测速度非常快,但只能将沙门菌鉴定到属水平;质谱技术无论在属水平还是种水平都有较好的鉴定结果,且具有强大的数据分析能力,速度也非常快;CLSPT基于成簇的规律间隔的短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)分型方法的改进方法,即CRISPR位点间隔序列分型(CLSPT)法分析位点简化、简单方便、准确率高,但结果影响因素多检测时间长;16sr DNA法,虽然很快很准但对沙门氏菌种间碱基分辨率较差。胶体金法和MALDI-TOF-MS法均为目前最为快速的沙门菌检测方法,胶体金法最适用于快速初筛检测且准确可靠,可为临床提供快速的初步报告,为患者的快速诊疗提供主要方向,质谱技术最适用于快速鉴定、分型、数据分析,可快速的为临床提供详细的病原信息及分析工具,如两者联合应用,可互为补充,大大提高临床标本的检测速度、灵敏度和特异度,具有广阔的应用前景。
[Abstract]:鐩�鐨�,瀵瑰洓绉嶅揩閫熸柊鍨嬬殑娌欓棬姘忚弻妫，

本文编号：2139521