耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的耐药机制及分子流行病学研究

发布时间：2019-05-30 07:53

【摘要】：目的了解上海交通大学医学院附属新华医院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药机制、流行趋势及临床特点。为CRKP院内感染预防控制提供理论依据,并指导临床合理使用抗生素。方法1.收集2009年-2013年我院临床标本中分离到的CRKP,采用Vitek-2Compact全自动微生物分析系统联合纸片扩散法(K-B法)进行药敏试验;2.用改良Hodge试验及亚胺培南/亚胺培南-EDTA金属酶抑制试验(IP/IPI E-test)进行碳青霉烯酶及金属酶表型筛查;3.PCR方法及基因测序检测碳青霉烯酶、AmpC酶及ESBLs酶基因;4.采用SDS-PAGE检测外膜蛋白的表达情况;5.对产碳青霉烯酶菌株进行质粒转移接合试验;6.对外科重症监护室(SICU)进行环境标本采样并筛选CRKP;7.采用多位点序列分型(MLST)及脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法对临床标本及环境样本分离到的CRKP进行基因分型,并结合患者的临床资料探讨我院CRKP的分子流行病学特点。结果1.2009年-2013年期间共收集了84株分离自临床标本的CRKP。2.72株改良Hodge试验阳性,1株IP/IPI E-test试验阳性。3.PCR及测序结果显示72株改良Hodge试验阳性的菌株中有69株携带KPC-2基因,2株携带IMP-4基因,1株携带NDM-1基因,上述菌株还同时携带1~3种ESBLs基因。12株改良Hodge试验阴性的菌株仅携带DHA-1基因和/或1~2种ESBLs基因。4.84株CRKP中5株外膜蛋白表达正常,3株缺失Ompk36,1株缺失Ompk35,其余75株存在外膜蛋白变异。5.4株产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌转移接合试验成功。6.SICU的环境样本中共筛选出2株CRKP。7.MLST结果显示我院CRKP临床分离株主要为ST11型(73/84),其次为ST323型(3/84),同时还检出ST29,ST37,ST571,ST1696,ST1721,ST1722,ST1723和ST1725型各1株,后5种类型为首次发现的新ST型。PFGE将84株菌分为A(A1、A2、A3、A4)、B(B1、B2、B3、B4)、C(C1、C2)三个群,B3型菌株流行范围最广,分型结果与MLST相吻合。环境样本中分离到的2株CRKP属于B3型,也属于ST11型。结论我院CRKP对碳青霉烯类抗生素的耐药机制以产KPC-2酶合并外膜蛋白异常表达为主。ST11型(B3型)肺炎克雷伯菌在我院存在爆发流行,CRKP感染患者及其接触过的物品为其重要的传染源。需加强院内感染预防控制措施,防止CRKP流行范围的进一步扩大。
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【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R446.5;R440

【参考文献】

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本文编号：2488656