碳青霉烯非敏感肺炎克雷伯菌耐药机制及分子流行病学初步研究

发布时间：2019-07-25 19:17

【摘要】：目的：了解我院2012-2014年碳青霉烯非敏感肺炎克雷伯菌的耐药情况,初步探讨碳青霉烯非敏感肺炎克雷伯菌的耐药机制,同时进行分子流行病学调查。方法：收集我院2012年1月至2014年12月VITEK2 Compact全自动细菌鉴定和药敏检测系统分离鉴定出的碳青霉烯类非敏感肺炎克雷伯菌非重复菌株,采用微量肉汤稀释法对碳青霉烯类抗生素的药敏结果进行复核；通过PCR及测序方法检测碳青霉烯酶基因blaKPC、blaSME、blaVIM、blaIMP、blaNDM-1、blaOXA-48,超广谱p内酰胺酶(Extended Spectrum Beta-Lactamases,ESBLs)基因blaTEM、6blaSH、. blaCTX-M-1'、blaCTX-M-9',喹诺酮类基因gnrA、gnrB、qnrC、gnrD、gnrS、 aac(6')-Ib-cr,氨基糖苷类基因aac(6')-Ib、armA、rmtB,以及Ⅰ类整合子Intl-1和膜孔蛋白基因ompK35、ompK36,采用脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)、多位点序列分型(Multiple Locus Sequence Typing,MLST)进行分子流行病学调查。结果：1、我院2012年1月-2014年12月共分离到2131株肺炎克雷伯菌,其中非重复碳青霉烯非敏感肺炎克雷伯菌有56株,占、2.63%。菌株分布特点提示,标本分布主要以尿液(18株,32.14%)和痰液(14株,25.00%)为主,病房分布主要以外科病房(29株,51.79%)和ICU病房(14株,25.00%)为主。3、药敏表型分析结果显示,56株(100%)对厄他培南不敏感,27株(48.21%)对亚胺培南不敏感,21株(37.50%)对美罗培南不敏感。82.14%(46/56)的菌株对一种以上头孢菌素耐药。氨基糖苷类抗生素和喹诺酮类抗生素的耐药率分别为69.64%(39/56)和64.29%(36/56)。4、耐药基因检测结果显示,10株(17.86%)菌检测到碳青霉烯酶基因：blaNDM-1(6/56,10.71%)、bla1MP-4(1/56,1.79%).blaKPC-2(3/56,5.36%)；52株(92.86%)菌检测到ESBLs基因：blaTEM(20/56, 35.71％)、blaSHV(49/56,87.5%)、blaCTX-M(30/56,53.57%):39株(69.64%)菌中检测到喹诺酮类基因：gnrB(27/56,48.21％)、gnrS (10/56,17.86%).aac(6')-Ib-cr(16/56,28.57%)；34株(60.71％)菌中检测到氨基糖苷类基因：aac(6')-Ib(25/56,44.64%).armA(10/56, 17.85%)、rmtB(3/56,5.36%);37株(66.07%)菌检测到Ⅰ类整合子(Intl-1);3株(5.36%)菌ompK35基因缺失,4株(7.14%)菌ompK36基因缺失,未检测到两种膜孔蛋白基因同时缺失的情况。值得注意的是,7株膜孔蛋白基因缺失的菌株中,有4株菌的厄他培南最低抑菌浓度(MIC)明显增高(128μg/ml或256μg/ml)。5、在本研究中,10株碳青霉烯基因阳性的菌株中,ESBLs基因、喹诺酮基因、氨基糖苷类基因和Ⅰ类整合子的共同表达率分别为90%、100%、80%和80%,膜孔蛋白基因缺失率为20%；52株携带ESBLs基因的菌株中,喹诺酮类、氨基糖苷类和整合子基因的阳性率分别为71.15%、63.46%和67.31%,膜孔蛋白基因缺失率为11.54%。我们首次发现在两株菌中存在新基因组合：blaKPC-2、blaSHV、 blaCTX-M-15,、aac(6')-Ib-cr、aac(6'-Ib和Intl-1共同表达且合并ompK35基因缺失。6、PFGE结果显示：56株非敏感菌分为52个型别,命名为1-52型。45型包括3个亚型45a、45b、45c。MLST结果提示：碳青霉烯酶基因阳性的10株菌属于7个ST型ST11、ST15、ST29、ST290. ST323、ST412和ST1641。结论：1、我院2012-2014年碳青霉烯非敏感肺炎克雷伯菌厄他培南非敏感率较高,且MIC值呈明显上升趋势,大部分菌株表现为多重耐药；2、碳青霉烯酶基因阳性率不高,ESBLs基因高表达合并膜孔蛋白基因缺失可能是我院肺炎克雷伯菌碳青霉烯类抗生素非敏感的主要机制；多种耐药基因共同表达和Ⅰ类整合子高表达可能与多重耐药有关；3、菌株来源以尿液和痰液为主,且主要分离自外科和ICU病房,分子流行病学显示具有克隆多样性。
【图文】：

6林碳青霉片奥非毅感筒的标本分布特征

图1.2，株峨
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R446.5

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本文编号：2519297