脓肿分枝杆菌复合群的药物敏感性分析及其对克拉霉素的耐药机制研究

发布时间：2020-09-19 16:46

　　 目的了解我国脓肿分枝杆菌复合群(MABC)在非结核分枝杆菌(NTM)中的构成分布;弄清MABC的耐药现状；初步探索其对克拉霉素的耐药机制及基因分型。为我国MABC肺病的治疗提供依据。方法1、对中国疾病预防控制中心国家结核病参比实验室2011年1月-2012年12月冻存的490株经对硝基苯甲酸(PNB)初步鉴定为NTM的临床菌株给予16S rRNA、 hsp65、rpoB和ITS多靶位基因PCR-测序的分子菌种鉴定。2、用微孔板Alamar blue显色法检测MABC对16种药物的最低抑菌浓度(MIC)。3、随机挑选出部分菌株,进一步用棋盘稀释法作两药的体外联合药敏试验。4、对药敏试验延长培养至14天,观察MABC对克拉霉素的诱导耐药情况,并对耐药相关基因rrl及erm(41)进行测序,研究克拉霉素耐药表型和基因型的关系。5、对所有的MABC菌株进行可变数目串联重复序列(VNTR)基因分型。结果1、鉴定结果NTM452株,其中MABC100株,占22.1%,为NTM的第二位：100株MABC中,脓肿分枝杆菌75株,马赛分枝杆菌25株。2、100株MABC的体外药敏结果显示：耐药率较低的5种药为：利奈唑胺、阿米卡星、克拉霉素、阿奇霉素、替加环素,耐药率分别为2%、7%、9%、15%、20%;耐药率较高的5种药依次为：美罗培南、左氧氟沙星、加替沙星、米诺环素、复方新诺明,耐药率分别为：85%、79%、73%、70%、43%。莫西沙星、头孢西汀、亚胺培南、妥布霉素的耐药率居中。氯法齐明也有较低的MIC。3、28株菌(19株脓肿分枝杆菌、9株马赛分枝杆菌)的联合药敏结果显示：克拉霉素+莫西沙星对马赛分枝杆菌协同效应最好(88.9%),但对脓肿分枝杆菌协同效应最差(5.2%)。不论菌种,利奈唑胺+阿米卡星、替加环素+莫西沙星的协同效应较好,分别为42.9%、57.1%。4、75株脓肿分枝杆菌中,克拉霉素诱导耐药株51株,占68%；敏感株19株,占25.4%。25株马赛分枝杆菌无克拉霉素诱导耐药,敏感株21株,占84%。两者有显著性差异；9株克拉霉素获得性耐药菌株中,rrl突变的菌株6株,突变率66.7%;所有的脓肿分枝杆菌erm(41)序列完整,所有的马赛分枝杆菌,erm(41)序列有短缺;75株脓肿分枝杆菌,T28序列型菌株57株、C28序列型菌株18株。25株马赛分枝杆菌皆为T28序列型。5、VNTR各位点有明显基因多态性,分辨率指数为0.996,聚类分析呈3个基因群。结论MABC为我国较为常见的NTM,耐药率高,可用药物有限,治疗困难的主要菌种为脓肿分枝杆菌,根本的原因在于克拉霉素诱导耐药。准确的菌种鉴定、可靠的药敏试验对指导MABC肺病的临床治疗有重要意义。
【学位单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：博士
【学位年份】：2015
【中图分类】：R446.5


本文编号：2822761