LHRH-TAT-壳聚糖/siRNA复合物与巨噬细胞的相互作用以及TPP-LHRH-MPG △NLS /AFP-siRN
发布时间：2021-09-25 03:42
RNA干扰（RNA interference,RNAi）是普遍存在于真核生物体内的一种能够对特定的mRNA序列进行降解的转录后调控机制。在包括肝癌在内的多种癌症疾病的治疗研究中具有良好的应用前景。然而,由于RNA本身具有的易降解、不易穿过细胞膜等特点,为RNAi的临床应用制造了很大的阻碍。新型基因载体能够提高RNA的递送效率,但其生物相容性、RNA释放以及对RNAi效率的影响需要更加深入的评估。生物相容性是评价非病毒载体与机体相互作用的一个指标,载体与免疫系统的相互作用不仅反映了免疫系统对载体的应答情况,也是衡量载体是否对人体组织损伤程度的一个指标。本文以不同N/P比（1：2、1：1、2：1、5：1和10：1）使LHRH-TAT-壳聚糖（LHRH-TAT-chitosan,TLC）以及未进行任何修饰的低分子量壳聚糖（low molecular weight chitosan,LMWC）包裹siRNA后形成TLC/siRNA纳米复合体。与未进行任何修饰的壳聚糖相比,TLC具有更好的siRNA结合能力。以不同N/P（10：1、20：1）与siRNA形成纳米复合体后,其粒径分布于90-150...
【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２纳米复合物与细胞的相互作用??Ｆｉｇ．?２?Ｐｏｌｙｐｌｅｘｅｓ?ｉｎｔｅｒａｃｔ?ｗｉｔｈ?ｃｅｌｌ．??
解决上述问题的一个方法是利用质子海绵效应，即当溶酶体内ｐＨ下降时，??阳离子聚合物载体将大量捕获质子，从而引起ｃｒ的内流，溶酶体渗透性肿胀后??破裂，内涵体中的物质最终释放到细胞质中（图３）。另外，将经由内吞所造成的??ｐＨ变化作为一个＂开关＂，使其中包裹的核酸或药品在ｐＨ变小时得到充分释??放，也可Ｗ作为有效物质在细胞内部释放的一个标志。根据这些概念，吴传保等??于２００８年将己二胺、二己胺、Ｈ己胺＆及乙醇胺为阳离子聚合物材料，用酸碱??滴定法探讨质子海绵效应的根源。研究表明，质子海绵效应与上述材料中氨基Ｂ??位甚至更远的位置是否有强电子吸附基团有关［４５ｌ．??ＴＡＴ蛋白是由ＨＩＶ病毒基因编码的反式激活因子（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ?ｏｆ??ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ，?ＴＡＴ），通过与反式激活应答ＲＮＡ序列的结合，起始基因的转录。??在该多肤的中部序列中，包含一个由２个赖氨酸和６个精氨酸残基组合而成的高??丰度阳离子区域，在Ｎ－端有一个ａ－螺旋结构ｔＷ。ＴＡＴ通过细胞膜的相关机制尚??不清楚。早期的研巧中
Ｆｉｇ．?１０?Ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?也ｅ?ｂｒｉｇｈ化。ｓ?ｏｆ?ｂａｎｄｓ??利用Ｉｍａｇｅ?Ｊ软件分析ＡＦＰ条带与内参ｐ－ａｃｔｉｎ条带亮度，两者的比值可Ｗ??反映该基因的抑制情况。由表５与图１０可知，ＨｅｐＧ２细胞的ＡＦＰ基因表达没有??受到明显的抑制，而Ｂｅｌ７４０２?＾＾＾及Ｌ０２两种细胞的ＡＦＰ－ｍＲＮＡ则受到了明显的??抑制。对Ｌ０２的作用能够表明ＴＰＰ的连接影响了载体的祀向性。阳性对照的结??果显示，ＡＦＰ－ｓｉＲＮＡ对ＨｑｊＧ２的影响比Ｂｅｌ７４０２大。此ＲＴ－ＰＣＲ结果需要进一??步验证。??４．讨论??人们通常利用化学修饰的方式为常规的载体赋予一定的特性，使其获得更好??的组织相容性。ＴＰＰ主要用于壳聚糖载体的修饰，近期的研究也将ＴＰＰ应用于??ＰＥＧｂＰＰＡ载体中ＰＰＡ氨基端的修饰。在ＴＰＰ的作用下，两种载体均获得了更??加稳定的结构和粒径，Ｗ及更高的肿瘤细胞杀伤力。因此，本文试图利用ＴＰＰ??来修饰多肤载体ＬＨＲＨ－ＭＰＧ＆ＷＵ，并观察ＴＰＰ对载体各种指标的影响。??３９??
本文编号：3409020
【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２纳米复合物与细胞的相互作用??Ｆｉｇ．?２?Ｐｏｌｙｐｌｅｘｅｓ?ｉｎｔｅｒａｃｔ?ｗｉｔｈ?ｃｅｌｌ．??
解决上述问题的一个方法是利用质子海绵效应，即当溶酶体内ｐＨ下降时，??阳离子聚合物载体将大量捕获质子，从而引起ｃｒ的内流，溶酶体渗透性肿胀后??破裂，内涵体中的物质最终释放到细胞质中（图３）。另外，将经由内吞所造成的??ｐＨ变化作为一个＂开关＂，使其中包裹的核酸或药品在ｐＨ变小时得到充分释??放，也可Ｗ作为有效物质在细胞内部释放的一个标志。根据这些概念，吴传保等??于２００８年将己二胺、二己胺、Ｈ己胺＆及乙醇胺为阳离子聚合物材料，用酸碱??滴定法探讨质子海绵效应的根源。研究表明，质子海绵效应与上述材料中氨基Ｂ??位甚至更远的位置是否有强电子吸附基团有关［４５ｌ．??ＴＡＴ蛋白是由ＨＩＶ病毒基因编码的反式激活因子（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ?ｏｆ??ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ，?ＴＡＴ），通过与反式激活应答ＲＮＡ序列的结合，起始基因的转录。??在该多肤的中部序列中，包含一个由２个赖氨酸和６个精氨酸残基组合而成的高??丰度阳离子区域，在Ｎ－端有一个ａ－螺旋结构ｔＷ。ＴＡＴ通过细胞膜的相关机制尚??不清楚。早期的研巧中
Ｆｉｇ．?１０?Ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?也ｅ?ｂｒｉｇｈ化。ｓ?ｏｆ?ｂａｎｄｓ??利用Ｉｍａｇｅ?Ｊ软件分析ＡＦＰ条带与内参ｐ－ａｃｔｉｎ条带亮度，两者的比值可Ｗ??反映该基因的抑制情况。由表５与图１０可知，ＨｅｐＧ２细胞的ＡＦＰ基因表达没有??受到明显的抑制，而Ｂｅｌ７４０２?＾＾＾及Ｌ０２两种细胞的ＡＦＰ－ｍＲＮＡ则受到了明显的??抑制。对Ｌ０２的作用能够表明ＴＰＰ的连接影响了载体的祀向性。阳性对照的结??果显示，ＡＦＰ－ｓｉＲＮＡ对ＨｑｊＧ２的影响比Ｂｅｌ７４０２大。此ＲＴ－ＰＣＲ结果需要进一??步验证。??４．讨论??人们通常利用化学修饰的方式为常规的载体赋予一定的特性，使其获得更好??的组织相容性。ＴＰＰ主要用于壳聚糖载体的修饰，近期的研究也将ＴＰＰ应用于??ＰＥＧｂＰＰＡ载体中ＰＰＡ氨基端的修饰。在ＴＰＰ的作用下，两种载体均获得了更??加稳定的结构和粒径，Ｗ及更高的肿瘤细胞杀伤力。因此，本文试图利用ＴＰＰ??来修饰多肤载体ＬＨＲＨ－ＭＰＧ＆ＷＵ，并观察ＴＰＰ对载体各种指标的影响。??３９??
本文编号：3409020
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