人乳酸脱氢酶C4基因突变的检测及其在男性不育发病中的作用

发布时间：2024-07-03 01:04

　　乳酸脱氢酶C4(lactate dehydrogenase-C4,LDH-C4)为LDH蛋白家族中一个特殊的同工酶,仅在哺乳动物成熟的睾丸(testis)和精子(spermatozoa)中表达,在精子的能量代谢中发挥重要作用,是精子运动、获能及受精等过程的一个关键酶,其功能或活性异常与男性不育有密切关系。本研究进一步优化了以2-羟基戊酸为LDH-C4底物检测精子LDH-C4活性的染色方法,建立了该方法酶活性积分的正常参考范围,绘制了ROC曲线,并初步得到该方法诊断的灵敏度为89.5%,特异性为91.2%。同时,开发了一种以2-羟基丁酸钠为底物的LDH-C4活性显色方法。在此基础上,对一组精子LDH-C4活性降低的特发性不育患者进行Ldhc基因突变检测,并通过T克隆加以确证。结果显示,一名患者编码区第5外显子的40位碱基产生T→G杂合突变,对应Ldhc基因的第153位密码子由TTA变为TGA,将其命名为L153X突变。为研究L153X突变引起男性不育的致病机制,本研究采用分子克隆技术,构建了野生型Ldhc的原核、真核重组载体,并利用人工诱导突变技术获得了L153X突变体的重组质粒,通过诱...

【文章页数】：129 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
英文缩略词表
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 乳酸脱氢酶C4活性检测方法的建立
    材料与方法
    结果
    讨论
第二部分Ldhc基因突变的检测及鉴定
    材料与方法
    结果
    讨论
第三部分L153X突变体原核、真核表达载体的构建及鉴定
    材料与方法
    结果
    讨论
第四部分L153X突变体的生物信息学分析及其亚基间相互作用的研究
    材料与方法
    结果
    讨论
第五部分L153X基因突变患者精子功能评价
    材料与方法
    结果
    讨论
全文小结
参考文献
致谢
综述
    参考文献
在校期间发表论文目录



本文编号：4000288