miR-26b-5p靶向ULK1调控运动性心肌肥大的机制研究
发布时间：2024-01-25 15:00
MicroRNAs简称miRNAs,是生物体内的一组具有高度保守性的非编码RNA。研究发现MicroRNAs可以调控细胞的增殖、分化、凋亡等生命现象,亦是迄今为止最重要的心血管生理功能调控分子。细胞自噬(autophagy)是生命体普遍存在的一种代谢途径,是一种高度保守的分解代谢过程,通过自噬溶酶体途径清除受损细胞器和蛋白聚集物,并将其产物循环利用来维持细胞内的稳态。已有研究指出细胞自噬可调节运动性心肌肥大。运动性心肌肥大是心肌细胞及其间质细胞受机械牵张或生长因子刺激后,心肌细胞内与细胞生长增殖有关基因的表达发生变化的一种运动引起的适应性反应。已有研究表明,miR-26b-5p在运动性心肌肥大的形成中扮演着重要角色,然而其具体调控机制尚不完善。研究目的:本研究旨在探讨miR-26b-5p在运动性心肌肥大中的表达情况及其调控作用,以及确定miR-26b-5p通过靶基因ULK1调控运动性心肌肥大的分子机制。研究方法:选取24只6周龄清洁级雌性Wistar大鼠,随机分成安静对照组(CON,n=12)、运动性心肌肥大模型组(EX,n=12)。安静组大鼠普通笼内饲养,不进行任何运动。模型组大鼠参...
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
论文资助说明
摘要
ABSTRACT
符号说明
第1章 文献综述
1.1 运动性心肌肥大生理学研究进展
1.1.1 运动性心肌肥大的类型
1.1.2 生理性心肌肥大与病理性心肌肥大的比较研究进展
1.2 MIRNA的研究现状
1.2.1 miRNA的命名
1.2.2 miRNA的特征
1.2.3 miRNA的作用机制
1.2.4 miRNA参与调节心肌肥大机制研究进展
1.2.5 miRNA与运动性心肌肥大相关诱导因子
1.3 自噬的研究进展
1.3.1 自噬的概念及类型
1.3.2 自噬的作用机制
1.3.3 自噬与miRNA研究进展
1.3.4 自噬与运动性心肌肥大研究进展
1.4 展望
第2章 实验部分
2.1 实验材料
2.1.1 细胞系
2.1.2 实验动物
2.1.3 过表达miR-26b-5p腺病毒和干扰表达miR-26b-5p腺病毒
2.1.4 主要实验试剂
2.1.5 主要实验试剂的配制
2.2 实验方法
2.2.1 实验动物的饲养与动物模型的建立
2.3 实验动物的取材
2.3.1 大鼠心肌组织取材
2.3.2 大鼠心肌形态学检测
2.3.3 大鼠心肌组织蛋白的提取
2.3.4 大鼠心肌组织RNA的提取
2.4 H9C2 心肌细胞的培养
2.4.1 H9C2 心肌细胞换液
2.4.2 H9C2 心肌细胞传代
2.4.3 H9C2 心肌细胞冻存
2.4.4 H9C2 心肌细胞复苏
2.5 MIR-26B-5P腺病毒感染细胞
2.6 实时荧光定量PCR实验
2.6.1 细胞RNA提取
2.6.2 反转录
2.6.3 RT-qPCR反应
2.6.4 miRNA的 RT-qPCR反应
2.7 WESTERN BLOT实验
2.7.1 细胞总蛋白的提取
2.7.2 蛋白浓度测定
2.7.3 SDS-PAGE电泳
2.7.4 转膜
2.7.5 免疫印迹及化学发光
2.8 细胞免疫荧光实验
2.9 生物信息学预测靶基因
2.10 统计学分析
第3章 实验结果
3.1 运动性心肌肥大动物模型的评价
3.1.1 运动10 周后大鼠全心指数、左室指数的变化
3.1.2 运动10 周后大鼠心肌细胞形态变化
3.1.3 运动10 周后大鼠超声心动图像分析
3.1.4 运动10 周后大鼠心肌组织ANP、α-MHC、β-MHC、α-actin mRNA表达水平的变化
3.2 运动性心肌肥大动物模型中miR-26b-5p的表达变化
3.2.1 基因芯片分析miR-26b-5p表达
3.2.2 运动10 周后大鼠心肌组织miR-26b-5p表达水平
3.3 运动性心肌肥大动物模型心肌组织自噬水平的变化
3.3.1 透射电镜观察运动10 周后大鼠心肌组织自噬小体
3.3.2 运动10 周后大鼠心肌组织LC3、Beclin1 蛋白和mRNA表达水平的变化
3.3.3 运动10 周后大鼠心肌组织ULK1 蛋白和mRNA表达水平的变化
3.4 生物信息学预测MIR-26B-5P的靶基因
3.5 MIR-26B-5P通过靶向ULK1 调控运动性心肌肥大
3.5.1 过表达miR-26b-5p的重组腺病毒感染H9C2 心肌细胞
3.5.2 过表达miR-26b-5p腺病毒感染H9C2 心肌细胞中ULK1 表达水平变化
3.5.3 干扰表达miR-26b-5p腺病毒感染H9C2 心肌细胞的结果
3.6 ULK1与MIR-26B-5P的靶向关系验证
3.6.1 psiCHECK-2/ULK1 野生、突变型质粒构建成功
3.6.2 ULK1是miR-26b-5p直接调控的靶基因
3.7 过表达、干扰表达MIR-26B-5P后心肌自噬变化
第4章 讨论与分析
4.1 运动性心肌肥大动物模型的建立与评价
4.2 运动性心肌肥大中自噬的变化
4.3 miR-26b-5p靶作用于自噬相关基因ULK1
4.4 运动通过影响miR-26b-5p调控运动性心肌肥大的可能机制
第5章 结论
参考文献
攻读学位期间发表的论文及获得的奖励
致谢
本文编号：3885032
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【学位级别】：硕士
【文章目录】：
论文资助说明
摘要
ABSTRACT
符号说明
第1章 文献综述
1.1 运动性心肌肥大生理学研究进展
1.1.1 运动性心肌肥大的类型
1.1.2 生理性心肌肥大与病理性心肌肥大的比较研究进展
1.2 MIRNA的研究现状
1.2.1 miRNA的命名
1.2.2 miRNA的特征
1.2.3 miRNA的作用机制
1.2.4 miRNA参与调节心肌肥大机制研究进展
1.2.5 miRNA与运动性心肌肥大相关诱导因子
1.3 自噬的研究进展
1.3.1 自噬的概念及类型
1.3.2 自噬的作用机制
1.3.3 自噬与miRNA研究进展
1.3.4 自噬与运动性心肌肥大研究进展
1.4 展望
第2章 实验部分
2.1 实验材料
2.1.1 细胞系
2.1.2 实验动物
2.1.3 过表达miR-26b-5p腺病毒和干扰表达miR-26b-5p腺病毒
2.1.4 主要实验试剂
2.1.5 主要实验试剂的配制
2.2 实验方法
2.2.1 实验动物的饲养与动物模型的建立
2.3 实验动物的取材
2.3.1 大鼠心肌组织取材
2.3.2 大鼠心肌形态学检测
2.3.3 大鼠心肌组织蛋白的提取
2.3.4 大鼠心肌组织RNA的提取
2.4 H9C2 心肌细胞的培养
2.4.1 H9C2 心肌细胞换液
2.4.2 H9C2 心肌细胞传代
2.4.3 H9C2 心肌细胞冻存
2.4.4 H9C2 心肌细胞复苏
2.5 MIR-26B-5P腺病毒感染细胞
2.6 实时荧光定量PCR实验
2.6.1 细胞RNA提取
2.6.2 反转录
2.6.3 RT-qPCR反应
2.6.4 miRNA的 RT-qPCR反应
2.7 WESTERN BLOT实验
2.7.1 细胞总蛋白的提取
2.7.2 蛋白浓度测定
2.7.3 SDS-PAGE电泳
2.7.4 转膜
2.7.5 免疫印迹及化学发光
2.8 细胞免疫荧光实验
2.9 生物信息学预测靶基因
2.10 统计学分析
第3章 实验结果
3.1 运动性心肌肥大动物模型的评价
3.1.1 运动10 周后大鼠全心指数、左室指数的变化
3.1.2 运动10 周后大鼠心肌细胞形态变化
3.1.3 运动10 周后大鼠超声心动图像分析
3.1.4 运动10 周后大鼠心肌组织ANP、α-MHC、β-MHC、α-actin mRNA表达水平的变化
3.2 运动性心肌肥大动物模型中miR-26b-5p的表达变化
3.2.1 基因芯片分析miR-26b-5p表达
3.2.2 运动10 周后大鼠心肌组织miR-26b-5p表达水平
3.3 运动性心肌肥大动物模型心肌组织自噬水平的变化
3.3.1 透射电镜观察运动10 周后大鼠心肌组织自噬小体
3.3.2 运动10 周后大鼠心肌组织LC3、Beclin1 蛋白和mRNA表达水平的变化
3.3.3 运动10 周后大鼠心肌组织ULK1 蛋白和mRNA表达水平的变化
3.4 生物信息学预测MIR-26B-5P的靶基因
3.5 MIR-26B-5P通过靶向ULK1 调控运动性心肌肥大
3.5.1 过表达miR-26b-5p的重组腺病毒感染H9C2 心肌细胞
3.5.2 过表达miR-26b-5p腺病毒感染H9C2 心肌细胞中ULK1 表达水平变化
3.5.3 干扰表达miR-26b-5p腺病毒感染H9C2 心肌细胞的结果
3.6 ULK1与MIR-26B-5P的靶向关系验证
3.6.1 psiCHECK-2/ULK1 野生、突变型质粒构建成功
3.6.2 ULK1是miR-26b-5p直接调控的靶基因
3.7 过表达、干扰表达MIR-26B-5P后心肌自噬变化
第4章 讨论与分析
4.1 运动性心肌肥大动物模型的建立与评价
4.2 运动性心肌肥大中自噬的变化
4.3 miR-26b-5p靶作用于自噬相关基因ULK1
4.4 运动通过影响miR-26b-5p调控运动性心肌肥大的可能机制
第5章 结论
参考文献
攻读学位期间发表的论文及获得的奖励
致谢
本文编号：3885032
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