有氧运动对心衰大鼠的干预与线粒体定位的miRNA的关系初探

发布时间：2025-04-15 05:54

　　研究背景:线粒体有它自己的遗传物质和遗传体系,是一种半自主的细胞器,它是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷(ATP)的主要场所,为细胞的活动提供能量。microRNA(miRNA)是一类由内源基因编码的长度为20-24个核苷酸的非编码单链RNA分子,通过和靶基因mRNA碱基配对引起沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC)降解mRNA或阻碍其翻译。早期研究认为,miRNAs的工作场所仅为细胞质,调控着核编码的mRNA的翻译。近期研究表明,线粒体中也含有丰富的miRNA,这种线粒体定位的miRNA被称为mitomiRs,尽管其从细胞质进入线粒体的过程尚不清楚,但mitomiR以不同的方式参与调节线粒体内的蛋白质翻译过程,进而影响细胞的能量供应。目的:确定在压力后负荷造成的心力衰竭的大鼠模型中,有氧运动干预造成了mitomiR的变化;通过测序技术,发现若干新的mitomiR,进而讨论其调节线粒体能量代谢的可能作用。方法:1.动物模型的制备。选取雄性Wistar大鼠48只,随机分成两组,24只采取腹主动脉缩窄术提高大鼠心脏的后负荷,为腹主动脉缩窄手术组,简...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1.前言
    1.1 相关概念及定义
        1.1.1 心力衰竭
        1.1.2 有氧运动
        1.1.3 线粒体能量代谢
        1.1.4 microRNA(miRNA)及其作用机理
    1.2 国内外研究现状
        1.2.1 有氧运动对于心力衰竭有显著的干预效果。
        1.2.2 有氧运动对心力衰竭的干预与线粒体能量代谢功能相关
        1.2.3 miRNA对心力衰竭中线粒体能量代谢的影响
        1.2.4 mitomiRs对线粒体能量代谢的影响
        1.2.5 mitomiRs对心血管疾病的影响
2.实验材料及研究方法
    2.1 实验动物及饲养条件
    2.2 仪器与设备
    2.3 主要试剂
    2.4 主要试剂的配制方法
    2.5 动物模型的制备及分组
        2.5.1 腹主动脉缩窄手术方案
        2.5.2 假手术方案
        2.5.3 有氧运动干预方案
        2.5.4 动物分组
    2.6 实验动物心脏结构与功能检测
    2.7 模型动物的处死及取材
    2.8 粗制线粒体的制备
    2.9 超纯线粒体的制备
    2.10 线粒体总RNA的制备
    2.11 心肌总RNA的制备
    2.12 细胞总RNA的制备
    2.13 miRNA高通量测序
    2.14 生物信息分析各组大鼠miRNA测序结果
        2.14.1 known miRNA分析
        2.14.2 novel miRNA分析
    2.15 蛋白免疫印迹检测
    2.16 RT-qPCR验证候选miRNA
    2.17 数据统计
3.实验结果与分析
    3.1 以腹主动脉缩窄术成功建立压力后负荷过载的动物模型
    3.2 有氧运动干预显著改善心衰大鼠的心脏功能
    3.3 有氧运动改变定位在线粒体内的miRNA的表达谱
        3.3.1 超纯线粒体的质量控制
        3.3.2 known miRNA的生物信息学分析
        3.3.3 novel miRNA的生物信息学分析
    3.4 候选的novel miRNA在H9C2细胞中的鉴定
        3.4.1 引物的设计
        3.4.2 候选miRNA在大鼠心肌细胞H9C2中的表达丰度。
4.分析与讨论
    4.1 超纯线粒体的制备
    4.2 建库方式选择
    4.3 高通量测序中known miRNA的筛选
    4.4 高通量测序中novel miRNA的筛选
    4.5 RT-qPCR验证候选novel miRNA
5.结论与建议
    5.1 结论
    5.2 建议
参考文献
致谢
研究生个人简历



本文编号：4040180