性别决定技术在银狐养殖产业中的应用研究

发布时间：2017-04-10 18:39

  本文关键词：性别决定技术在银狐养殖产业中的应用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：狐狸属于哺乳纲,食肉目,犬科动物。我国的狐狸养殖业主要分布在北方较寒冷的地区,如：河北、山东、内蒙古、东北等地。银狐又叫银黑狐,是赤狐的一种基因突变种,被毛呈黑白相间,且有一层雾状形的针毛,是人们饲养的珍贵毛皮动物主要品种之一。安徽省皖北有多家狐狸养殖企业,这些企业在狐狸养殖过程中,一般采用的是自然繁殖的方式,狐狸发情期短,一年只有两个个月左右的发情期,并且繁殖率低,每胎只能产2-3只后代,自然繁殖方式难以满足狐狸养殖产业高速扩大再生产的需要。随着人工授精技术的发展,授精技术越来越成熟,虽然繁殖率得到了大大的提高,但相比貉子等皮毛动物产率仍然低很多,加之保胎也困难很多,怎样提高养狐业的繁殖率,这是最受人们关注的。养殖产业中母狐的需求量往往不能被满足,提高母狐的产量是养殖厂扩大再生产的关键。如果能在受精前做好性别分离,将会大大节约资源和时间,提高性别控制与鉴定和胚胎移植的效率。本文以皖北银狐为研究对象,探究皖北银狐精子发生的过程与季节影响、皖北银狐的精液品质、提高精子常温液态保存效果、输精前对X精子进行筛选,从这几环节来提高狐狸的繁殖率,最终通过动物实验,将性别决定技术应用在银狐养殖产业。为银狐人工繁殖受精率奠定基础,进而满足狐狸养殖产业扩大再生产的需要。通过研究得出的结论主要有以下几个方面：1.分析了季节对皖北地区银狐精子发生的影响,表明精子发生呈现典型的季节性,从而确定了采集公狐精液的最佳时间段。以9月、11月、次年1月份的银狐睾丸为研究对象,测量睾丸的重量、体积等基础形态参数以及采用酶联吸附实验测睾丸中睾酮的含量。利用组织切片技术分析曲细精管中各类生精细胞的组成及比例。结果：9月、11月、次年1月银狐睾丸的重量分别为0.896±0.002g、3.365±0.081 g、5.241±0.100 g,体积分别为1.215±0.036 cm3、5.558±0.794cm3、14.112±2.8543 cm3,睾酮含量分别为1.215±0.036μg、5.558±0.794μg、14.112±2.8543μg。结果表明,不同月份银狐睾丸的体积、重量以及睾酮含量有显著差异(P0.05),并且睾丸中睾酮的含量与重量的变化呈正相关,相关系数为0.991。切片上曲细精管中生精细胞的组成、数量随着季节变化也呈现不同,差异性显著(P0.05)。2.从分析皖北银狐精液品质入手,配制了一种安全、高效、经济的银狐精子稀释液,延长了精子在体外的存活时间,提高了人工授精时母狐的受孕率和单胎产胎数。结果显示,皖北银狐的射精量在0.5-1.5 m1/次,精子密度在5亿/ml左右。母狐子宫的精子容纳量为0.5 m1左右。实验证明将精液进行稀释,稀释5倍左右并不会对受孕率以及受孕胎数造成影响,而稀释液质量的好坏则直接影响精子的活率和活力,进而影响银狐繁殖率。本研究配制了一种优质银狐常温保存的精子稀释液。以貂、人等其他动物精子稀释液成分为基础,配制出三种液态保存精子稀释液,在细胞水平上观测稀释液的保存效果,确定了最优的配方配制方法：配制100 m1稀释液,称量三羟甲基氨基甲烷2.13 g、柠檬酸1.24 g、D果糖0.71g、双蒸水80 ml、卵黄液10 ml、Ham's F-10 10ml和青霉素7万IU,混合均匀。实验组15只母狐用本稀释液稀释精液受孕,平均产下的小仔数为6.5±1.5只；对照组使用养殖场购买的稀释液,185只母狐平均产仔数为4.5±1.5只,差异显著。结果表明用本精液稀释液来稀释精液,银狐可以产出更多的后代。3.建立起一种优选的X精子分离技术,取得了一定成效,提高了雌雄比例,为提高狐狸的繁殖率提供了依据。以银狐为研究对象,利用优化的梯度离心沉积法分离X精子,再在细胞水平上鉴定X精子的比率,最后进行人工授精使母狐受孕。通过产下的狐狸小仔数以及性别比例与常规人工授精方法做比较。利用本性别决定技术分离出的X精子,给10只母狐人工授精后,产出72只后代,其中雌性后代61只,占总后代数的84.7%,对照组雌性后代占51.6%。
【关键词】：银狐 精子发生 睾丸 稀释液 性别决定
【学位授予单位】：安徽大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S865.23
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 引言10-18
• 1 狐狸10-12
• 1.1 银狐的起源10
• 1.2 银狐的生物学特性10-12
• 2 性别决定技术概述12-14
• 2.1 性别决定在银狐养殖业的意义12-13
• 2.2 性别决定技术的发展13-14
• 3 研究的目的、意义和方法14-16
• 3.1 研究的目的和意义14-16
• 4 研究内容16-18
• 4.1 实验基地16
• 4.2 研究内容16-17
• 4.3 研究特点17-18
• 第一章：季节对银狐精子发生的影响18-31
• 1 材料与方法19-22
• 1.1 材料19
• 1.2 试剂及仪器设备19
• 1.3 睾丸获取19-21
• 1.4 睾酮的测定21
• 1.5 石蜡组织切片21-22
• 1.6 数理统计22
• 2 结果22-29
• 2.1 睾丸体积及重量22-24
• 2.2 睾丸中睾酮的含量24-25
• 2.3 曲细精管中生精细胞的分布25-26
• 2.4 附睾中精子数量26-29
• 3 讨论29-31
• 第二章：银狐精液参数测定及精子稀释液配制31-42
• 1 材料与方法32-35
• 1.1 材料32
• 1.2 方法32-35
• 2 结果35-39
• 2.1 银狐精液参数35-37
• 2.2 不同精液稀释液体外对精子活率的影响37-38
• 2.3 精液稀释液的人工授精效果检测38-39
• 3 讨论39-42
• 第三章：银狐X精子分离及在产业化中的基础应用研究42-50
• 1 材料与方法42-45
• 1.1 试验地点42-43
• 1.2 精液采集43
• 1.3 实验材料与配制方法43
• 1.4 精液参数的常规分析43
• 1.5 流式细胞术分离X精子43-44
• 1.6 密度梯度离心分离X精子44
• 1.7 X精子占比分析44-45
• 1.8 人工授精45
• 1.9 数理统计45
• 2 结果45-48
• 2.1 流式细胞术分离X精子45-46
• 2.2 密度梯度离心分离出X精子的占比46
• 2.3 人工授精46-48
• 3 讨论48-50
• 结论与展望50-52
• 参考文献52-58
• 致谢58-60
• 附录60

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本文编号：297343