依赖CD23的ERK信号转导通路在变应性鼻炎发病机制中的作用

发布时间：2018-04-28 17:22

  本文选题：变应性鼻炎 + CD23　； 参考：《郑州大学》2017年硕士论文

【摘要】：背景及目的变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)是耳鼻咽喉-头颈外科的常见病之一,是由IgE介导的鼻黏膜的Ⅰ型变态反应性疾病,严重影响着人们的日常生活,同时增加了社会负担。据统计变应性鼻炎的全球平均发病率约为10%~25%,且随着全球经济的发展和生存环境的改变,变应性鼻炎的发病率呈现逐年增长的趋势,已成为亟待解决的全球性健康问题。IgE作为最不丰富的免疫球蛋白类,主要通过与2种细胞表面受体之间的相互作用而发挥其病理作用,即:高亲和力受体FcεRI和低亲和力受CD23(FcεRⅡ),IgE和FcεRI的分子结构之间的相互作用已经研究的非常成熟,FcεRI已成为变应性疾病治疗中的的一个重要靶向。最新的IgE受体的分子结构研究显示,相较于与FcεRI的结合,IgE与CD23的结合位点具有更显著的可变性,因此,CD23可能在IgE介导的变应性疾病中扮演更为重要的角色。多项研究显示,CD23在过敏性气道及过敏性肠炎的发生中参与抗原提成及跨上皮转运。而在变应性鼻炎的研究中也同样发现,CD23表达在鼻黏膜的上皮细胞中,参与IgE的双向转运及IgE抗原复合物的单向转运,从而启动变应性鼻炎的发生。而CD23的表达是否影响变应性鼻炎晚发相的发生,目前尚不明确。国外研究发现,在过敏性肠炎中存在依赖CD23的ERK信号通路,ERK信号通路的激活可进一步促进CCL20、IL8的释放,从而介导炎症的发生发展。变应性鼻炎中是否存在相同的由CD23介导的信号通路参与变应性鼻炎晚发相的炎症浸润,值得进一步深入探讨。本研究通过检测CD23及p-ERK、CCL20、IL-18在变应性鼻炎大鼠模型中的表达并进行相关性研究,然后在体内阻断CD23,观察其对下游ERK信号通路的影响,从而进一步解释CD23对变应性鼻炎整个发生过程的影响,试图更深入的阐明变应性鼻炎的发病机制,探寻变应性鼻炎治疗的新靶点。实验方法采用30只健康的SD大鼠建立实验动物模型,雌雄不限,将大鼠随机分为空白对照组(A组)、AR组(B组)、抗CD23干预组(C组),每组10只。实验的早期模拟致敏阶段,B组和C组大鼠用卵清蛋白联合氢氧化铝进行基础致敏,而A组大鼠仅腹腔注射生理盐水及氢氧化铝,实验的后期模拟激发阶段,B组大鼠采用5%的卵清蛋白生理盐水溶液滴鼻,每组均为隔天1次,共16天。C组大鼠则在卵清蛋白生理盐水溶液滴鼻激发前30分钟,给予抗CD23抗体滴鼻处理,而A组大鼠仅生理盐水滴鼻。每组均为1次/天,连续10天。末次滴鼻激发完成后,记录大鼠鼻部症状并注射过量水合氯醛处死大鼠。HE染色观察大鼠鼻粘膜组织病理学变化及嗜酸粒细胞浸润程度,免疫荧光检测CD23、CCL20在三组大鼠鼻腔黏膜的表达量、Western Blot检测p-ERK的表达量。ELISA法检测三组大鼠血清中OVA-IgE、LTC4、ECP和鼻腔灌洗液p-ERK、CCL20、IL8的水平。结果1.大鼠的挠鼻及喷嚏次数,OVA-sIgE及LTC4的水平浓度,AR组明显高于对照组,而CD23抗体干预组则较变应性鼻炎组明显降低,三组之间差异具有统计学意义(P0.05)。2.大鼠鼻粘膜嗜酸性粒细胞的浸润程度与ECP的水平,AR组明显高于对照组,而CD23抗体干预组则较变应性鼻炎组明显降低,三组之间差异具有统计学意义(P0.05)。3.CD23在正常对照组、AR组、CD23抗体干预组大鼠鼻黏膜中的表达量分别为51.32±10.23、103.55±19.98、72.63±14.53,三组之间差异具有统计学意义(F=78.41,P0.05);4.p-ERK在空白对照组、变应性鼻炎组及CD23抗体干预组三组鼻腔灌洗液中的表达量依次为79.37±16.18,167.82±31.42,117.43±24.16,三组之间差异具有统计学意义(F=108.46,P0.05)。5.CCL20在空白对照组、变应性鼻炎组及CD23抗体干预组三组鼻腔灌洗液中的表达量依次为40.82±7.93,116.23±23.17,63.47±12.16,三组之间差异具有统计学意义(F=146.13,P0.05).6.IL8在空白对照组、变应性鼻炎组及CD23抗体干预组三组鼻腔灌洗液中的表达量依次为18.32±3.79,72.93±15.21,31.26±6.21,三组之间差异具有统计学意义(F=108.46,P0.05).7.经Pearson相关性检验分析,在变应性鼻炎组中CD23的表达量与鼻腔灌洗液中p-ERK的水平呈正相关(r=0.613,P0.05),鼻腔灌洗液中p-ERK的水平与CCL20、IL8的水平也呈正相关(r=0.792,r=0.813 P0.05)。鼻腔灌洗液中IL8的水平与嗜酸性粒细胞也呈正相关(r=0.846,P0.05)。结论1.CD23不仅参与介导跨上皮细胞转运Ig E和IgE免疫复合物,启动变应性鼻炎的发生,同时可通过激活ERK信号转导通路,促进CCL20、IL8的释放,从而招募和趋化中性粒细胞、T淋巴细胞及嗜酸性粒细胞导致局部的炎症聚集放大,从而参与变应性鼻炎晚发相炎症的发生发展。2.而阻断CD23,ERK通路也同样被阻断,下游的CCL20、IL8的释放减少,局部的炎症浸润明显改善,因此,对CD23在鼻黏膜上皮细胞的表达的干预可作为变应性鼻炎治疗的新靶向。
[Abstract]:Background and Objective Allergic rhinitis ( AR ) is one of the most common diseases in the ENT - Head and Neck Surgery . It is an important target of IgE - mediated allergic rhinitis . The study shows that CD23 plays a more important role in allergic rhinitis . The levels of OVA - IgE , LTC4 , ECP and IL - 8 in nasal mucosa of rats were significantly lower than those in control group ( P 0.05 ) . Results 1 . The levels of OVA - IgE , LTC4 , ECP and IL - 8 in nasal mucosa of rats were significantly lower than those in control group . The level of IL8 in nasal lavage fluid was positively correlated with eosinophils ( r = 0.846 , P0.05 ) . Conclusion 1 . CD23 is not only involved in mediating the transport of Ig E and IgE immune complexes across epithelial cells , activating allergic rhinitis , but also by activating ERK signal transduction pathway to promote the release of local inflammation .

【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R765.21
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本文编号：1816191