川贝母内生真菌介导纳米银的生物合成及其活性分析

发布时间：2020-07-06 12:51

【摘要】：纳米银作为一种特殊的银系材料,具有异于常规材料的热、光、电、磁、催化和敏感等独特性质,实际中作为催化剂材料、防静电材料、低温超导材料、生物传感器材料被广泛使用,同时在生物医学领域也有应用。高效合成纳米银已成为研究的热点。近年来利用各种生物材料和微生物与硝酸银生物合成纳米银的报道层出不穷,目前已证实多种植物内生真菌具有生物合成纳米银的功能。川贝母作为一种名贵的药食两用中药材,具有清热润肺,化痰止咳,散结消痈的作用。川贝母内生真菌作为一类与川贝母息息相关的真菌类群,具有很大的研究价值,其生物活性研究近来也成为热点。本研究以川贝母内生真菌为原料,采用生物合成法与硝酸银溶液反应成功合成纳米银,并通过改变反应条件对合成过程进行优化,再以纳米银为对象,对其进行抑菌活性和抗肿瘤活性的研究。以期为内生真菌生物合成纳米银的深入研究提供理论依据。主要结果如下:1.采用生物合成法,利用川贝母内生真菌浸泡液与硝酸银溶液反应,对课题组前期分离得到的15株川贝母内生真菌进行初筛,结果发现川贝母内生真菌CBY4和CBY13都能通过生物合成法制备纳米银,经过鉴定两株菌均为三线镰刀菌,将它们合成的纳米银分别命名4-AgNPs和13-AgNPs。2.分别探讨浸泡液pH、硝酸银溶液浓度、光照强度和温度对CBY4和CBY13生物合成纳米银的影响。结果发现反应不同条件下,纳米银的合成量具有显著差异。在pH3-11的范围内,4-AgNPs和13-AgNPs的合成量均在pH为6时达到最大;当硝酸银溶液浓度为2mmol/L时,制得的4-AgNPs和13-AgNPs均合成量较大、粒径最小;在2000Lux光照强度范围内,随着光照强度增强,4-AgNPs和13-AgNPs的合成量均不断增加;在50℃温度范围内,随着温度增加,4-AgNPs和13-AgNPs的合成量也均增加。最终确定pH为6、硝酸银浓度为2mmol/L、光强为2000Lux和50℃温度条件下相对更适合4-AgNPs和13-AgNPs的合成。3.4-AgNPs和13-AgNPs对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有良好的抑菌效果。采用平板孔阱扩散法的抑菌圈直径分别为19.33mm和19.97mm以及19.72mm和19.38mm。4-AgNPs抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌生物膜形成的最小抑制浓度(MIC)分别为76μg/mL和38μg/mL;13-AgNPs抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌生物膜形成的最小抑制浓度(MIC)分别为60μg/mL和30μg/mL。4.纳米银4-AgNPs和13-AgNPs均对人宫颈癌Hela细胞的增殖生长具有明显的抑制作用,可以成功诱导癌细胞的凋亡,具有良好的抗肿瘤活性。综上,本研究首次发现川贝母中分离的内生真菌CBY4和CBY13具有合成纳米银的能力,优化得到了一个比较适合其纳米银合成的反应条件,同时发现合成的纳米银具有一定的抑菌和抗肿瘤活性。本研究发现了川贝母内生真菌新的生物功能和作用,也为生物合成纳米银的研究积累了更多的资料。
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：TB383.1;O614.122
【图文】：

浸泡液,溶液混合,菌株,纳米银

图采用 Microsoft Excel2010 进行，采用 SPS关分析。生物合成纳米银初筛内生真菌的筛选，结果表明菌株 CBY4 和 C发现，当 CBY4 和 CBY13 的浸泡液与 AgN显变化，由浅黄色变成了棕黄色，而空白效应（SPR）造成的，棕黄色是指示纳米说明川贝母内生真菌 CBY4 和 CBY13 的浸判定整个溶液体系有纳米银合成。

浸泡液,溶液混合,菌株

浸泡液与 AgNO3溶液混合反应 4h（左边）和 CBY13 soaking solution mixed with AgNO3solution reaCBY13 soaking solution (right)可见分光光度计分别对 CBY4 浸泡液和 CB图 4.3 可以看出 CBY4 浸泡液和 AgNO3溶液4.4 可以看出 CBY13 浸泡液和 AgNO3溶液的说明 CBY4 和 CBY13 两株菌株的浸泡液都能纳米银命名为 4-AgNPs，CBY13 浸泡液合

浸泡液,纳米银,蓝线,菌株

图 4.4 可以看出 CBY13 浸泡液和 AgNO3溶液的混合液在最大吸收峰，说明 CBY4 和 CBY13 两株菌株的浸泡液都能合成纳米浸泡液合成的纳米银命名为 4-AgNPs，CBY13 浸泡液合成的纳米s。

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