基于等温信号放大技术构建多功能核酸纳米胶束及其在肿瘤协同治疗中的应用
发布时间：2022-09-28 14:20
作为生命体内重要的遗传信息载体,核酸是生物研究和医学诊断的重要标志物。开发具有刺激响应型核酸纳米材料已成为药物递送载体等领域的研究重点。此外,通过等温信号放大技术构建核酸纳米材料已广泛应用于生物传感、生物成像及生物医药等方面。本文利用点击化学、酰胺反应等将核酸与聚合物连接合成核酸纳米胶束,进一步基于滚环扩增技术（rolling circle amplification,RCA）、DNA自组装等构建核酸纳米胶束功能组装体,由肿瘤微环境、生物分子等引发药物释放,成功应用于细胞水平及活体层面肿瘤的协同治疗,有效提高肿瘤的治疗效果,为DNA纳米技术、信号放大成像分析、肿瘤协同治疗等领域的发展提供了新方法和新思路。本论文主要开展了以下三个方面的工作:一、基于滚环扩增技术技术构建p H响应型DNA纳米胶束功能组装体首先,通过点击化学合成两亲性的引物-聚乳酸偶联物,其自组装形成DNA纳米胶束,并原位引发RCA反应。随后将RCA产物与含有si RNA的双螺旋/三螺旋分子开关探针交联,制备得到具有p H响应的DNA纳米胶束,并负载抗癌药物阿霉素（Dox）,从而实现DNA纳米胶束的功能组装。在弱酸性/中性...
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 引言
1.1 等温信号放大技术
1.1.1 基于滚环扩增技术的等温信号放大技术
1.1.2 基于DNA链取代反应的等温信号放大技术
1.2 DNA纳米结构
1.2.1 DNA折纸结构
1.2.2 DNA纳米管
1.2.3 DNA纳米花
1.2.4 DNA嵌段共聚物
1.3 癌症及其治疗方法
1.3.1 癌症的概述
1.3.2 癌症的治疗方法
1.4 课题研究的内容及意义
第二章 基于滚环扩增技术技术构建pH响应型DNA纳米胶束功能组装体
2.1 引言
2.2 实验部分
2.2.1 主要试剂与仪器
2.2.2 引物-PLA偶联物的制备
2.2.3 Dox/si RNA/DNMs的制备
2.2.4 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳表征
2.2.5 zeta电位表征
2.2.6 原子力显微镜(AFM)表征
2.2.7 荧光光谱表征
2.3 结果与讨论
2.3.1 实验原理
2.3.2 N3-PLA核磁氢谱和红外吸收光谱表征
2.3.3 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳表征
2.3.4 原子力显微镜表征
2.3.5 zeta电势表征
2.3.6 si RNA/DNMs的载药量及稳定性
2.4 小结
第三章 pH响应型DNA纳米胶束功能组装体用于间变性大细胞淋巴瘤化疗-基因协同疗法
3.1 引言
3.2 实验部分
3.2.1 主要试剂及仪器
3.2.2 激光共聚焦表征
3.2.3 流式细胞实验
3.2.4 实时定量PCR(q RT-PCR)分析
3.2.5 蛋白质印迹分析
3.2.6 细胞毒性分析
3.2.7 Annexin V-APC/7-AAD染色检测细胞凋亡
3.2.8 Calcein AM/PI实验
3.2.9 活体实验
3.3 结果与讨论
3.3.1 实验原理
3.3.2 DNMs作为递送载体的细胞内行为
3.3.3 mRNA及蛋白的表达量
3.3.4 Dox/si RNA/DNMs的协同治疗作用
3.3.5 活体治疗效果评估
3.4 小结
第四章 负载双药的DNA纳米胶束功能组装体的构建
4.1 引言
4.2 实验部分
4.2.1 主要试剂与仪器
4.2.2 PLGA-Cur NPs的制备
4.2.3 DNA纳米胶束的制备
4.2.4 姜黄素载药量的测定
4.2.5 DLS及 zeta电位表征
4.2.6 酶活性的测定
4.3 结果与讨论
4.3.1 实验原理
4.3.2 PLGA-Cur NPs的表征
4.3.3 载药效率的计算
4.3.4 G-四联体/hemin DNA酶催化活性的测定
4.4 小结
第五章 结论与展望
参考文献
攻读学位期间的研究成果
致谢
本文编号：3681823
【文章页数】：66 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 引言
1.1 等温信号放大技术
1.1.1 基于滚环扩增技术的等温信号放大技术
1.1.2 基于DNA链取代反应的等温信号放大技术
1.2 DNA纳米结构
1.2.1 DNA折纸结构
1.2.2 DNA纳米管
1.2.3 DNA纳米花
1.2.4 DNA嵌段共聚物
1.3 癌症及其治疗方法
1.3.1 癌症的概述
1.3.2 癌症的治疗方法
1.4 课题研究的内容及意义
第二章 基于滚环扩增技术技术构建pH响应型DNA纳米胶束功能组装体
2.1 引言
2.2 实验部分
2.2.1 主要试剂与仪器
2.2.2 引物-PLA偶联物的制备
2.2.3 Dox/si RNA/DNMs的制备
2.2.4 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳表征
2.2.5 zeta电位表征
2.2.6 原子力显微镜(AFM)表征
2.2.7 荧光光谱表征
2.3 结果与讨论
2.3.1 实验原理
2.3.2 N3-PLA核磁氢谱和红外吸收光谱表征
2.3.3 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳表征
2.3.4 原子力显微镜表征
2.3.5 zeta电势表征
2.3.6 si RNA/DNMs的载药量及稳定性
2.4 小结
第三章 pH响应型DNA纳米胶束功能组装体用于间变性大细胞淋巴瘤化疗-基因协同疗法
3.1 引言
3.2 实验部分
3.2.1 主要试剂及仪器
3.2.2 激光共聚焦表征
3.2.3 流式细胞实验
3.2.4 实时定量PCR(q RT-PCR)分析
3.2.5 蛋白质印迹分析
3.2.6 细胞毒性分析
3.2.7 Annexin V-APC/7-AAD染色检测细胞凋亡
3.2.8 Calcein AM/PI实验
3.2.9 活体实验
3.3 结果与讨论
3.3.1 实验原理
3.3.2 DNMs作为递送载体的细胞内行为
3.3.3 mRNA及蛋白的表达量
3.3.4 Dox/si RNA/DNMs的协同治疗作用
3.3.5 活体治疗效果评估
3.4 小结
第四章 负载双药的DNA纳米胶束功能组装体的构建
4.1 引言
4.2 实验部分
4.2.1 主要试剂与仪器
4.2.2 PLGA-Cur NPs的制备
4.2.3 DNA纳米胶束的制备
4.2.4 姜黄素载药量的测定
4.2.5 DLS及 zeta电位表征
4.2.6 酶活性的测定
4.3 结果与讨论
4.3.1 实验原理
4.3.2 PLGA-Cur NPs的表征
4.3.3 载药效率的计算
4.3.4 G-四联体/hemin DNA酶催化活性的测定
4.4 小结
第五章 结论与展望
参考文献
攻读学位期间的研究成果
致谢
本文编号：3681823
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