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油桐桐酸合成酶基因(fadx)的克

发布时间:2017-01-03 14:45

  本文关键词:生物柴油原料评价及其混合性能改善研究,由笔耕文化传播整理发布。


《内蒙古农业大学》 2007年

油桐桐酸合成酶基因(fadx)的克隆、反义表达载体的构建及对烟草的初步转化

李元  

【摘要】: 随着全球性化石资源日益枯竭,加快发展以生物柴油为代表的可再生能源势在必行。以油桐的种子榨出的桐油作为原料生产生物柴油具有明显的优势,但美中不足是其主要成分α—桐酸(18:3Δ~(9cis,11trans,13trans)含量过高,这不符合优质生物柴油原料多不饱和脂肪酸含量尽量低的要求。α—桐酸合成酶是控制亚油酸向α—桐酸转化的关键酶,本研究通过反义表达来抑制α—桐酸的合成,从而获得符合生产优质生物柴油标准的脂肪酸原料。方法是以生长中的油桐种子为材料,利用改良TRIzoL法提取总RNA,并根据GenBank中已经登录的α—桐酸合成酶基因fadx的序列,设计特异性引物,采用RT-PCR方法,得到fadx基因全长cDNA,克隆到pMD18-T-simple载体中测序并进行了生物信息学分析。将所得基因经BamHI和SacI酶切后插入表达载体质粒pBI121,构建反义表达载体pBI121 fadx,,利用农杆菌介导法转入烟草叶片。

【关键词】:
【学位授予单位】:内蒙古农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:Q943.2
【目录】:

  • 中文摘要3-4
  • 英文摘要4-7
  • 1 引言7-18
  • 1.1 生物柴油综述7-14
  • 1.1.1 世界能源安全面临挑战7
  • 1.1.2 环境保护迫在眉睫7-8
  • 1.1.3 开发生物柴油的必要性8-10
  • 1.1.4 生物柴油的发展历史10
  • 1.1.5 生物柴油发展现状10-11
  • 1.1.6 生物柴油产业发展的瓶颈11-13
  • 1.1.7 油桐概述13-14
  • 1.2 脂肪酸脱氢酶概述14-18
  • 1.2.1 脂肪酸脱氢酶的分类14-15
  • 1.2.2 脂肪酸脱氢酶的结构特点15-16
  • 1.2.3 主要的脂肪酸脱氢酶基因16-18
  • 1.2.4 脂肪酸脱氢酶的应用前景18
  • 1.3 本研究的目的和意义18
  • 2 材料与方法18-30
  • 2.1 材料18-20
  • 2.1.1 植物材料18
  • 2.1.2 试剂盒18-19
  • 2.1.3 化学试剂19
  • 2.1.4 菌种19
  • 2.1.5 质粒载体19
  • 2.1.6 酶19
  • 2.1.7 部分仪器19-20
  • 2.2 实验方法20-30
  • 2.2.1 部分溶液及培养基的配制20-22
  • 2.2.2 油桐种子桐酸合成酶基因的克隆与鉴定22-27
  • 2.2.3 pBI121fadx反义表达载体的构建及遗传转化27-30
  • 3 结果与分析30-36
  • 3.1 油桐种子中RNA的提取30
  • 3.2 fadx基因的扩增结果30-31
  • 3.3 pMD18-T-fadx重组质粒的鉴定31-32
  • 3.4 测序及序列分析32-35
  • 3.5 反义表达载体的构建35-36
  • 3.6 表达载体转化农杆菌的鉴定36
  • 4 讨论36-37
  • 5 结论37-39
  • 致谢39-40
  • 参考文献40-46
  • 作者简介46
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    本文编号:232998

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