黑木耳多糖分离纯化及其对大豆分离蛋白糖基化的研究

发布时间：2017-03-27 04:00

  本文关键词：黑木耳多糖分离纯化及其对大豆分离蛋白糖基化的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本研究以黑木耳(Auricularia auricular)为试验原料,采用亚临界水萃取法提取黑木耳多糖,通过响应面法优化提取工艺条件,并分析三氯乙酸法、酶解法、sevage法和AB-8树脂法等脱除黑木耳多糖中蛋白质的效果,得到脱蛋白的最佳工艺条件,在此基础上,利用黑木耳多糖和大豆分离蛋白进行复合,优化糖基化反应条件,并初步探讨了黑木耳多糖-大豆分离蛋白复合物的功能特性,为黑木耳多糖的综合利用及工业化生产提供理论依据。主要研究结果如下：1.根据Box-Behnken试验设计原理,在单因素的试验基础上采用响应面分析法优化工艺条件,得到亚临界水萃取法提取木耳多糖的最佳工艺条件为：提取温度152.31℃,提取时间26.07 min,料液比130.79：1mL/g,提取压力1.0 MPa,此时得到的木耳多糖提取率为24.51%。同时,将优化的亚临界水萃取法与传统的水浸提法、酶提取法、微波和超声波辅助法进行比较,结果表明黑木耳多糖的提取率较高,提取时间短,并且绿色环保,适合工业化生产以及应用在食品药物中。2.为了得到黑木耳多糖的最佳脱蛋白工艺,用三氯乙酸法、sevage法、酶解法、酶解-sevage法、等电点法、酶解-等电点法和AB-8树脂等7种方法处理黑木耳多糖,其蛋白脱除率分别为76.85%、72.17%、72.42%、76.48%、50.71%、62.24%和78.37%,其中AB-8树脂对蛋白质的脱除效果最好,通过响应面法对其进行工艺优化,结果表明：上样浓度为2.07mg/n (?)L、吸附时间为2.06h、固液比为1：4.87时蛋白脱除率最高,为81.00%,此时多糖回收率为83.13%；并分析比较了脱除蛋白质前后黑木耳多糖的体外抗氧化性,发现黑木耳多糖脱蛋白后其体外抗氧化活性有所增加,羟基自由基清除率提高32.36%,DPPH清除率最高为脱蛋白前的1.12倍,而还原能力为脱蛋白前的1.89倍。3.采用Box-Behnken模型优化黑木耳多糖-大豆蛋白复合物的制备工艺,优化后的工艺参数为：料液比40：1(m:V)、pH 9.21、温度92.88℃、糖与蛋白质量比4.18：1。并分析比较了黑木耳多糖-大豆蛋白复合物和普通大豆蛋白的功能特性,结果表明黑木耳多糖-大豆蛋白复合物的乳化活性、乳化稳定性增加,与大豆蛋白相比分别增加10.75倍和6.15倍,同时黑木耳多糖-大豆蛋白复合物的溶解度在pH 2-10范围内溶解度显著高于大豆蛋白,且热稳定性提高了9.24倍。黑木耳多糖与大豆蛋白复合后显著改善了蛋白质的功能特性,为黑木耳多糖广泛的工业化应用奠定了理论基础。
【关键词】：黑木耳 多糖 亚临界水 脱蛋白 糖基化
【学位授予单位】：东北林业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：TS219;TQ281
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-9
• 1 绪论9-15
• 1.1 黑木耳多糖的简介9-10
• 1.1.1 多糖简介9
• 1.1.2 黑木耳多糖的生理功能9-10
• 1.2 多糖提取纯化方法的研究进展10-13
• 1.2.1 传统提取方法10-12
• 1.2.2 亚临界水萃取法12
• 1.2.3 多糖脱蛋白方法的研究进展12-13
• 1.3 蛋白质糖基化研究进展13-14
• 1.4 本研究的目的意义14-15
• 2 黑木耳多糖的亚临界水萃取工艺研究15-25
• 2.1 材料与方法15-16
• 2.1.1 试验原料15
• 2.1.2 试验试剂15
• 2.1.3 试验仪器15
• 2.1.4 黑木耳多糖的提取工艺流程15
• 2.1.5 多糖含量的测定15
• 2.1.6 多糖提取率的计算15-16
• 2.1.7 单因素试验16
• 2.1.8 响应面分析试验16
• 2.2 结果与分析16-23
• 2.2.1 葡萄糖标准曲线的建立16-17
• 2.2.2 液料比对多糖提取率的影响17-18
• 2.2.3 温度对多糖提取率的影响18
• 2.2.4 时间对多糖提取率的影响18-19
• 2.2.5 压力对多糖提取率的影响19-20
• 2.2.6 响应面试验结果与分析20-22
• 2.2.7 亚临界水萃取法与不同提取方法对比试验22-23
• 2.3 讨论23-24
• 2.4 本章小结24-25
• 3 黑木耳多糖脱蛋白工艺的优化25-40
• 3.1 材料与方法25-27
• 3.1.1 试验原料25
• 3.1.2 黑木耳多糖的提取25
• 3.1.3 多糖含量的测定25
• 3.1.4 蛋白质含量的测定25
• 3.1.5 多糖中蛋白质脱除方法25-26
• 3.1.6 多糖回收率及蛋白质脱除率的计算26
• 3.1.7 最佳方法的工艺优化26-27
• 3.1.8 体外抗氧化研究27
• 3.2 结果与分析27-38
• 3.2.1 黑木耳多糖除蛋白工艺的筛选27-32
• 3.2.2 AB-8树脂脱蛋白工艺的优化32-37
• 3.2.3 黑木耳多糖脱蛋白对体外抗氧化性的影响37-38
• 3.3 讨论38-39
• 3.4 本章小结39-40
• 4 黑木耳多糖-大豆蛋白复合物的制备及其功能特性研究40-56
• 4.1 材料与方法40-42
• 4.1.1 试验原料40
• 4.1.2 黑木耳多糖的提取40
• 4.1.3 多糖含量的测定40
• 4.1.4 游离氨基酸含量量的测定40-41
• 4.1.5 单因素试验41
• 4.1.6 响应面分析试验41
• 4.1.7 乳化性和乳化稳定性的测定41-42
• 4.1.8 溶解性的测定42
• 4.1.9 热稳定性的测定42
• 4.2 结果与分析42-54
• 4.2.1 甘氨酸标准曲线的建立42-43
• 4.2.2 pH对氨基酸结合率及乳化活性的影响43-44
• 4.2.3 温度对氨基酸结合率及乳化活性的影响44-46
• 4.2.4 糖与蛋白质量比对氨基酸结合率及乳化活性的影响46-47
• 4.2.5 料液比对氨基酸结合率及乳化活性的影响47-48
• 4.2.6 响应面试验结果与分析48-51
• 4.2.7 黑木耳多糖-大豆蛋白复合物的功能特性分析51-54
• 4.3 讨论54-55
• 4.4 本章小结55-56
• 结论56-57
• 参考文献57-63
• 攻读学位期间发表的学术论文63-64
• 致谢64-65

【参考文献】

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本文编号：269805