壳寡糖的制备、分离分析及抑菌活性研究

发布时间：2017-05-19 19:32

  本文关键词：壳寡糖的制备、分离分析及抑菌活性研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：壳寡糖是壳聚糖的水解产物,水溶性好,生物利用度高,在抑菌、抗氧化、抗炎、调节血脂和血糖、抗肿瘤、增强免疫及活化肠道菌群中具有广泛的应用,因此壳寡糖已成为当今国内外研究、开发的热点领域。 采用微波辅助酶解的方法制备水溶性壳寡糖,通过乙醇沉淀法制备低聚合度壳寡糖,利用TLC、HPLC、UPLC-MS分析壳寡糖组分。采用异丙醇/水/氨水为展开剂,体积比为4/2/3时,TLC图谱显示壳寡糖的各个组分达到分离,斑点清晰,基本无拖尾现象；利用Shodex NH2P-504E色谱柱,联合蒸发光散射检测器,以乙腈-氨水为流动相梯度洗脱可以定量分析壳寡糖中的各个组分；利用UPLC-MS可以在没有标准品的情况下定性鉴定壳寡糖组分,并可以鉴定壳寡糖分子中的N-乙酰化组分。此外,本文进一步探讨了壳寡糖组分的色谱行为,发现壳寡糖的N-乙酰化是导致壳寡糖不完全按照聚合度大小进行色谱分离的主要原因,为壳寡糖质量分析、组分分离提供了参考。 用聚丙烯酰胺凝胶(Bio-Gel P-2)进行单组分的分离制备,分离组分经TLC和UPLC-MS分析鉴定后,分别确定为壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖以及壳六糖,鉴定后,其中壳二糖、壳三糖纯度较高,均在96%以上,壳四糖、壳五糖、壳六糖纯度稍低,还需进一步纯化。 通过N-酰化反应制备得到了不同脱乙酰度的壳寡糖,然后对不同脱乙酰度的壳寡糖及壳寡糖单体的抑菌活性进行研究。结果显示pH为5时,脱乙酰度为95%、65%、45%的壳寡糖对大肠杆菌的IC50分别为2.5、5、40g/L,说明相同pH条件下,壳寡糖的脱乙酰度越高,对大肠杆菌抑制效果越好；脱乙酰度为95%的壳寡糖,在pH为5、6、7时对大肠杆菌的IC50分别为2.5、2.5、10g/L,即相同脱乙酰度的壳寡糖,pH越低,其对大肠杆菌的抑制效果越好。不同壳寡糖单体对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和尖孢镰刀菌的抑菌活性差别也较大,壳六糖最高,壳二糖最低,氨基葡萄糖没有表现出抑菌活性。如壳六糖对镰刀菌的抑制率为70.5%,而壳二糖对镰刀菌的抑制率只有38.8%。
【关键词】：壳寡糖 微波辅助 酶解 分离分析 抑菌活性
【学位授予单位】：江南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：TQ464.1;R96
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-5
• 目录5-7
• 第一章 绪论7-18
• 1.1 壳寡糖概述7-9
• 1.1.1 壳寡糖的原料来源7
• 1.1.2 壳寡糖的应用7-9
• 1.2 壳寡糖的制备方法9-11
• 1.2.1 化学降解法9-10
• 1.2.2 物理降解法10-11
• 1.2.3 酶解法11
• 1.3 壳寡糖研究进展11-16
• 1.3.1 壳寡糖分离方法简介11-12
• 1.3.2 壳寡糖分析方法简介12-13
• 1.3.3 壳寡糖的化学修饰及衍生物的研究进展13
• 1.3.4 壳寡糖的抑菌性能研究13-16
• 1.4 壳寡糖单体研究进展16
• 1.5 本论文研究的主要内容16-18
• 第二章 壳寡糖的制备18-34
• 2.1 引言18
• 2.2 实验材料18-19
• 2.2.1 材料和试剂18
• 2.2.2 主要仪器18-19
• 2.3 实验方法19-23
• 2.3.1 壳聚糖脱乙酰度及分子量的测定19-20
• 2.3.2 壳聚糖的微波降粘20
• 2.3.3 壳聚糖的酶解20-22
• 2.3.4 酶解组分的数均分子量测定22-23
• 2.4 结果与分析23-33
• 2.4.1 壳聚糖脱乙酰度测定23-24
• 2.4.2 壳聚糖的微波降粘24-29
• 2.4.3 壳聚糖的酶解29-32
• 2.4.4 酶解组分的数均分子量测定32-33
• 2.5 本章小结33-34
• 第三章 低聚合度壳寡糖的色谱行为分析及单组分的分离制备34-49
• 3.1 引言34
• 3.2 实验材料34-35
• 3.2.1 材料和试剂34-35
• 3.2.2 主要仪器35
• 3.3 实验方法35-38
• 3.3.1 低聚合度壳寡糖的色谱行为分析35-37
• 3.3.2 壳寡糖单组分的分离制备37-38
• 3.4 实验结果38-48
• 3.4.1 低聚合度壳寡糖的色谱行为分析38-45
• 3.4.2 壳寡糖单组分的分离制备45-48
• 3.5 本章小结48-49
• 第四章 不同脱乙酰度壳寡糖及壳寡糖单体的抑菌活性研究49-58
• 4.1 引言49
• 4.2 实验材料49-50
• 4.2.1 材料和试剂49
• 4.2.2 主要仪器49-50
• 4.3 实验方法50-51
• 4.3.1 不同脱乙酰度壳寡糖的制备50
• 4.3.2 壳寡糖的抑菌活性研究50-51
• 4.4 实验结果51-56
• 4.4.1 壳寡糖的酰化修饰51-52
• 4.4.2 壳寡糖的抑菌活性研究52-56
• 4.5 本章小结56-58
• 主要结论与展望58-60
• 主要结论58-59
• 存在的问题及展望59-60
• 致谢60-61
• 参考文献61-66
• 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文66

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：379662