核酸适配体应用于双酚A快速检测新方法研究

发布时间：2017-10-25 10:33

  本文关键词：核酸适配体应用于双酚A快速检测新方法研究

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【摘要】：大量研究发现双酚A是一种环境内分泌干扰物,对人体具有致癌、致畸和致突变等危害,会影响婴幼儿的正常成长发育。传统的双酚A检测方法具有灵敏度高、精确度好、重复性好等优点,但同时还具有检测费用高、需要精密仪器、无法满足快速实时检测的缺点。因此,亟需开发一种简便、快速灵敏的双酚A检测方法。核酸适配体能与靶标进行也异性结合,在检测中具有其独特的优越性,因而本研究以核酸适配体为基础,开发出三种不同的比色法快速实时检测环境中双酚A的方法：(1)开发了一种利用纳米颗粒催化TMB/H2O2法检测双酚A的技术。纳米金颗粒具有一定的催化活性,可以催化TMB/H2O2显淡蓝色；而核酸适配体包裹的AuNPs颗粒的催化活性增强,催化TMB/H2O2显深蓝色。在最优检测条件下,对双酚A的检测线性范围为6.79～1500 nM,最低检测限为6.79 nM。(2)开发了一种基于双酚A特异性核酸适配体的表面活性剂CTAB聚集纳米金比色法检测双酚A的技术。该方法中CTAB具有两方面的作用：一是可以与适配体发生反应形成超分子结构的复合物；其次是CTAB能破坏纳米金表面的静电平衡使得其发生聚集,从而导致溶液的颜色发生由酒红到蓝色的变化。在最优检测条件下,该反应体系对双酚A的检测限为3.2 nM,线性范围为0.032μM～2.0 μM,对河水中双酚A的加标回收率为100.1%～108.5%。(3)开发了一种基于双酚A特异性核酸适配体的阳离子聚合物PDDA聚集纳米金比色法检测双酚A的技术。本技术的关键是PDDA既能与适配体通过静电力结合形成类似“双链”结构,同时又具有破坏纳米金颗粒之间的静电平衡使其发生聚集的功能。该检测方法具有良好的特异性,检测线性范围为1.50～500 nM,对双酚A的检测下限为1.50 nM,对自来水和河水的加标回收率范围为100.94～112.71%,相对标准偏差为6.72～13.08%。
【关键词】：环境内分泌干扰物 双酚A 生物传感器 纳米金 检测
【学位授予单位】：上海应用技术大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：X830;O657.3
【目录】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-11
• 第一章 绪论11-22
• 1.1 双酚A11-14
• 1.1.1 双酚A简介11
• 1.1.2 双酚A制品的应用11-12
• 1.1.3 双酚A的毒性及其危害12-13
• 1.1.4 双酚A的污染现状13-14
• 1.1.5 双酚A的国家规定14
• 1.2 传统的双酚A检测方法及存在的不足14-16
• 1.2.1 传统双酚A检测方法14-15
• 1.2.2 传统检测方法的不足15-16
• 1.3 核酸适配体技术及其在检测中的应用16-20
• 1.3.1 核酸适配体简介16-17
• 1.3.2 核酸适配体技术的优点17
• 1.3.3 核酸适配体技术检测双酚A信号输出方法17-20
• 1.4 课题研究的目的和意义20-22
• 第二章 基于适配体包裹纳米金催化TMB/H_2O_2比色法检测双酚A22-31
• 2.1 前言22
• 2.2 实验材料22-23
• 2.2.1 主要实验试剂22-23
• 2.2.2 主要仪器23
• 2.3 实验方法23-24
• 2.3.1 无修饰纳米金溶液的制备23
• 2.3.2 比色信号的测量23-24
• 2.3.3 检测体系的条件优化24
• 2.3.4 检测体系的灵敏度和特异性24
• 2.4 结果与讨论24-30
• 2.4.1 检测原理24-26
• 2.4.2 AuNPs催化性能研究26-27
• 2.4.3 检测体系的条件优化27-29
• 2.4.4 检测体系的灵敏度和特异性29-30
• 2.5 本章小节30-31
• 第三章 基于适配体的表面活性剂聚集纳米金比色法检测双酚A31-40
• 3.1 引言31
• 3.2 实验材料31-32
• 3.2.1 主要实验试剂31
• 3.2.2 主要仪器31-32
• 3.3 实验方法32-33
• 3.3.1 纳米金的制备32
• 3.3.2 检测条件的优化32
• 3.3.3 双酚A的检测步骤32-33
• 3.3.4 水样预处理和加标回收实验分析33
• 3.4 结果与讨论33-39
• 3.4.1 实验原理33-34
• 3.4.2 纳米金的表征34
• 3.4.3 反应条件的优化34-37
• 3.4.4 检测体系灵敏度和特异性37-38
• 3.4.5 加标回收实验结果38-39
• 3.5 本章小结39-40
• 第四章 基于适配体的阳离子聚合物聚集纳米金比色法检测双酚A40-51
• 4.1 前言40
• 4.2 实验材料40-41
• 4.2.1 主要实验试剂40
• 4.2.2 主要仪器40-41
• 4.3 实验方法41-42
• 4.3.1 纳米金溶液的制备41
• 4.3.2 适配体、双酚A、PDDA以及纳米金之间的反应41
• 4.3.3 吸光度的测量41
• 4.3.4 检测体系的条件优化41-42
• 4.3.5 检测体系的灵敏度和特异性42
• 4.3.6 水样的预处理42
• 4.4 结果与讨论42-50
• 4.4.1 检测原理42-43
• 4.4.2 核酸适配体与纳米金的表征43-44
• 4.4.3 检测体系条件的优化44-47
• 4.4.4 传感体系的检测性能47-49
• 4.4.5 加标回收实验49-50
• 4.5 本章小结50-51
• 第五章 结论与展望51-53
• 5.1 研究成果51-52
• 5.2 论文创新点52
• 5.3 展望52-53
• 参考文献53-61
• 致谢61-62
• 攻读学位期间发表的学术论文和专利62

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本文编号：1093344